徐 娜，李 鑫，孙甸甸，徐亚维，尹 锐

(吉林农业科技学院 生物工程学院，吉林 吉林 132101)



鹿中结核分枝杆菌最佳DNA提取方法探索

徐 娜，李 鑫，孙甸甸，徐亚维，尹 锐

(吉林农业科技学院 生物工程学院，吉林 吉林 132101)

对树脂法、改良CTAB法和国标法三种方法获得的鹿中结核分枝杆菌DNA进行比较，通过核酸扩增鉴定和琼脂糖凝胶电泳分析，发现改良CTAB法获得的基因组DNA最佳，配合PCR技术检测灵敏度达到100 fg，且能对低含量样本进行快速检测。

鹿；结核分枝杆菌；DNA提取

鹿结核病是由结核杆菌引起的慢性、消耗性传染病，主要由牛型和人型结核分枝杆菌引起，临床症状为极度消瘦、呼吸困难，有的甚至瘫痪，死亡率高[1]。结核病一直以来也严重威胁着人类的生命健康，因此，快速诊断对预后和结核病疫情控制尤为重要[2]。

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)是一种快速特异的结核分枝杆菌检测方法，尤其适用于结核杆菌含量低的样品检测[3]。但PCR扩增诊断的高灵敏性和特异性要以高质量的结核分枝杆菌DNA的提取为前提。本文对鹿中分枝杆菌DNA提取的三种方法进行比较研究，探讨最佳提取方法，为从低含量结核分枝杆菌的样品中提取高质量DNA提供理论参考。

1 材料

1.1 试验动物及菌株

牛结核分枝杆菌菌株ATCC27289(BCG)(购自北京中原经贸公司ATCC菌种保存中心)。

1.2 主要试剂

聚合酶购于大连宝生物公司；溶菌酶、DNA分子量DL2000、DNTP购于上海生物工程有限公司。

1.3 主要仪器

微量快速紫外可见分光光度计(型号为BioSpec-nano，岛津)；电泳仪(型号为DYY-5，北京市六一)；……