白江涛,杨 慧,陈应坚,刘 渠,金玉娟,甘莉萍,叶珍珍

(1. 深圳市龙华新区疾病预防控制中心，广东 深圳 570100; 2. 深圳市龙岗区疾病预防控制中心，广东 深圳 518172)

2011～2015年深圳市龙岗区致泻性大肠埃希菌的感染状况及耐药性分析①

白江涛1,杨 慧2,陈应坚2,刘 渠2,金玉娟2,甘莉萍2,叶珍珍2

(1. 深圳市龙华新区疾病预防控制中心，广东 深圳 570100; 2. 深圳市龙岗区疾病预防控制中心，广东 深圳 518172)

目的：了解深圳市龙岗区腹泻人群中致泻性大肠埃希菌的感染状况及耐药性，为该菌引起腹泻的防控与临床治疗提供依据。方法:收集深圳市龙岗区2011～2015年腹泻人群粪便标本，进行致泻性大肠埃希菌的分离培养、生化鉴定后，利用PCR进行鉴定与分型，然后用K-B琼脂扩散法进行抗生素敏感性测试。结果:致泻性大肠埃希菌的检出率为9.4%(95/1008)；年龄分布上存在统计学差异(P<0.05)，14～25岁(11.5%)、25～35岁(11.6%)相对较高。检出类型以ETEC为主，占60.0%(56/95)，其次为EPEC(22.1%，21/95)和EAEC(15.8%，15/95)。出现较高耐药率的是萘啶酸(69.5%)，其次是氨苄西林(40.0%)和四环素(34.7%)；致泻性大肠埃希菌多重耐药率(MDR)为38.9%，ETEC、EPEC、EAEC多重耐药率分别为25.0%、66.7%、43.8%。结论：深圳市龙岗区五种致泻性大肠埃希菌中ETEC感染率最高，致泻性大肠埃希菌多重耐药较严重；提示规范合理使用抗生素。

致泻性大肠埃希菌；腹泻；耐药

致泻性大肠埃希菌(DiarrheagenicEscherichiacoli，DEC)是引起人类急性感染性腹泻的常见病原菌之一，研究数据显示，致泻性大肠埃希菌是细菌感染性腹泻的主要病因[1,2]。它是指能够引起胃肠炎、腹泻等肠道内感染症状。根据携带致病基因的不同可分为6类：致病性大肠埃希菌(EnteropathogenicE.coli，EPEC)、产毒性大肠埃希菌(EnterotoxigenicE.coli，ETEC)、侵袭性大肠埃希菌(EnteroinvasiveE.coli，EIEC)、产志贺毒素大肠埃希菌(Shigatoxin-producingE.coli，STEC)、黏附性大肠埃希菌(EnteroadherentE.coli，EAEC)及弥散黏附性大肠埃希菌(DiffuselyadherentE.coli，DAEC)[3]。全球范围内，DEC对氨苄西林、环丙沙星、复方磺胺甲噁唑、四环素、氯霉素、庆大霉素的耐药率高达50%[4]。在我国，DEC对阿莫西林、复方新诺明、三代头孢类抗生素、喹诺酮类及四环素耐药率超过40%，对氨苄西林及哌拉西林等青霉素类耐药率甚至高达80%～100%[5～7]。DEC的耐药问题已成为全球越来越关注的公共卫生问题，为了了解深圳龙岗区腹泻人群中DEC的抗生素敏感情况，本研究对2011～2015年来自深圳市龙岗区2家感染性腹泻哨点医院的腹泻人群粪便标本进行了DEC的检测，并对分DEC阳性菌株进行了耐药性分析。

1 材料与方法

1.1 材料

收集2011～2015年来自深圳市龙岗区2家感染性腹泻哨点医院腹泻病人的粪便标本1008人份，病例相关资料来自深圳市感染性腹泻监测网。

1.2 标准菌株

大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923和铜绿假单胞菌ATCC27853菌株购自美国典型菌种保藏中心。

1.3 主要试剂和仪器

主要培养基和试剂：LB肉汤增菌液(杭州微生物公司)、ECC显色培养基(郑州博赛科玛嘉微生物公司)、LB琼脂干粉(北京陆桥有限公司)、MH琼脂干粉(英国Oxoid公司)、TaKaRaTaqTM试剂盒(宝生物工程(大连)有限公司)、琼脂糖(南京生兴生物有限公司)、API20E生化鉴定条(法国bioMerieux公司)。

表1 22种抗生素的类型、名称及规格

主要仪器和耗材：PCR扩增仪(美国AppliedBiosystems公司)、恒温电热培养箱(天津中环实验器材有限公司)、凝胶电泳仪(美国伯乐公司)、浊度计(法国bioMerieux公司)、抗生素药敏纸片(英国Oxoid公司)见表1。

2 方法

2.1 分离培养及生化鉴定

参照国标GB/T4789.36-2008、WS271-2007进行分离培养，大致流程为标本直接划线ECC平板，同时使用肠道增菌液增菌过夜后接种至ECC平板，可疑菌落转接至三糖铁斜面做初步生化，初步生化可疑菌落使用API20E鉴定条进行生化鉴定。

2.2 毒力基因测定2.2.1DNA模板的制备(沸水浴法)

取LB琼脂平板上分离纯培养的大肠埃希菌菌落置于装有100μL无菌蒸馏水的1.5mL离心管中，震荡混匀后100℃水浴10min，12000r/min离心2min，吸取上清液即为DNA模板，-20℃保存备用。

2.2.2PCR检测

采用中国疾病预防控制中心传染病所提供的多重PCR检测EPEC、ETEC、EAEC、EHEC、EIEC五种致泻性大肠埃希菌的方法进行检测[8]。反应总体积为50μL，在1.5mL的离心管中依次加入10×buffer10μL，dNTP8μL，引物rrs-F/R(10μmol/L)各0.1μL，ipaH-F/R(10μmol/L)各0.2μL，lt-F/R(10μmol/L)各0.4μL，aggR-F/R(10μmol/L)各0.6μL，eaeA-F/R(10μmol/L)各0.5μL，stx1-F/R(10μmol/L)各0.5μL，stx2-F/R(10μmol/L)各0.5μL，stIb-F/R(10μmol/L)各2μL，stIa-F(10μmol/L)2μL，Taq酶0.8μL/5U，DNA模板2μL补充无菌水至50μL。反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性30s，58℃退火45s，72℃延伸45s，共30个循环；最后72℃延伸10min。

2.3 抗生素敏感性试验

采用K-B琼脂扩散法(WHO推荐)做DEC分离株的 22种常用抗生素的药敏试验，方法步骤参照2013版《抗菌药物敏感性试验纸片法执行标准》[9]，结果判定参照2016版药物敏感试验指南(CLSIM100-S26)。

2.4 资料的整理与分析

采用SPSS20.0软件进行统计分析。用excel整理录入相关数据，用频数构成比进行统计描述，运用卡方检验法比较频率或频率分布。

3 结果

3.1 流行特征

3.1.1 人群特征

感染性腹泻人群中检出95例DEC阳性感染者，检出率为9.4%。女性DEC检出率10.3%(49/477)，男性则为8.7%(46/531)。样本人群年龄均值为(24.15±1.64)岁，最低年龄为1个月龄，最高年龄为85岁；14～25岁、25～35岁检出率相对较高，分别为11.5%(26/226)、11.6%(31/268)，45岁以上年龄段检出率最低，为2.7%(4/149)；卡方检验比较分析不同性别、年龄DEC的检出情况，发现在年龄分布上检出率存在统计学差异(P<0.05)，见表2。

表2 不同性别、年龄段、年份致泻性大肠埃希的检出情况

3.1.2 时间分布特征

2011～2015年DEC的检出率如表2，比较不同年份DEC的检出情况，发现5年中DEC检出率不存在统计学差异(P﹥0.05)。

3.1.3 分型情况

腹泻人群感染ETEC(lt和/或st阳性)为主，占60.0%(56/95)，其次为EPEC(eae阳性且stx1和stx2均为阴性)和EAEC(aggR阳性)，分别占22.1%(21/95)、15.8%(15/95)，EIEC(ipaH阳性)少见，占2.1%(2/95)，STEC未检出。

3.2 药敏试验结果3.2.1 致泻性大肠埃希菌抗生素耐药状况

DEC出现较高耐药率的是萘啶酸(69.5%)，其次是氨苄西林(40.0%)和四环素(34.7%)；其余抗生素中除了甲氧苄氨嘧啶(28.4%)、复方新诺明(27.4%)，其他抗生素耐药率均在20.0%以下。中介敏感率最高的是链霉素(67.4%)，其次是头孢噻吩(46.3%)。敏感率100.0% 的有美罗培南、亚胺培南，敏感率高于95%的有头孢西丁、阿米卡星、呋喃妥因。

DEC对三代头孢素(CTX、CRO、CAZ)的耐药率均在15.0%以下，四代头孢素(FEP)的耐药率更是低于5.0%，对环丙沙星(CIP)和左氧氟沙星(LEV)的耐药率也均低于7.0%。见表3。

3.2.2 各型致泻性大肠埃希菌抗生素耐药状况

ETEC耐药情况：出现抗生素敏感率为100%的有舒巴坦、阿莫西林、阿米卡星和头孢西丁；耐药率最高的是萘啶酸(75.0%)，其次是四环素和氨苄西林(30.4%，26.8%)，对其余的抗生素耐药率均在18.0%以下。

EPEC耐药情况：对呋喃妥因的敏感率为100.0%；耐药率最高的是氨苄西林(71.4%)，其次是萘啶酸(61.9%)，对甲氧苄氨嘧啶、复方新诺明、四环素、庆大霉素均50.0%，并且对三代头孢类(CTX、CRO)的耐药率均达28.6%。

EAEC耐药情况：全部菌株对阿米卡星、头孢他叮、头孢吡肟敏感；耐药率较高的是萘啶酸、氨苄西林(62.5%，52.2%)，其次是复方新诺明、甲氧苄氨嘧啶、链霉素(均为25.0 %)，除了四环素、呋喃妥因，对其余抗生素耐药率均低于10.0%。见表4。

2株EIEC有1株出现耐药，对氯霉素、庆大霉素、链霉素、四环素、甲氧苄啶及复方新诺明均产生耐药性。

表3 致泻性大肠埃希菌对各种抗生素的敏感性情况

表4 ETEC、EPEC、EAEC 对各种抗生素的敏感情况

3.2.3 致泻性大肠埃希菌的多重耐药情况

药敏试验结果显示DEC多重耐药率(MDR)为38.9%(37/95)，ETEC、EPEC、EAEC多重耐药率分别为25.0%(14/56)、66.7%(14/21)、43.8%(7/16)，2株EIEC中有1株出现多重耐药的情况，见表5。

DEC多重耐药谱可分为19种，多见于四类抗生素的多重耐药(32.4%，12/37)，最多可出现七类抗生素的多重耐药(8.1%，3/37)。耐七类的有3株，耐药谱一致(磺胺+四环素+青霉素+氨基糖苷+喹诺酮+头孢+酰胺醇)；耐六类的有4株，耐药谱以磺胺+四环素+青霉素+氨基糖苷+喹诺酮+头孢多见(75.0%，3/4)；耐药五类的有8株，耐药谱以磺胺+四环素+青霉素+氨基糖苷+喹诺酮多见(75.0%，6/8)；耐四类抗生素的有12株，出现7种耐药谱，以磺胺+青霉素+氨基糖苷+喹诺酮多见(33.3%，4/12)；耐三类的有10株，以磺胺+喹诺酮+青霉素多见(40.0%，4/10)。见表5。

表5 致泻性大肠埃希菌的多重耐药情况

4 讨论

深圳市作为经济特区，毗邻港澳，是经济贸易和生产制造的枢纽，人口密集，且流动性大，是腹泻历来的高发地区，DEC作为腹泻的主要病因之一，掌握其感染水平，有利于感染性腹泻的防控。结果显示深圳市龙岗区急性腹泻患者中DEC的检出率为9.4%，与河南相似(10.4%)，低于福建地区(12.7%)，高于北京地区报道的检出率[10～12]；与国外相比，普遍低于该类研究报告的检出率[13～15]。可能是由于经济发展状况、环境条件、饮食结构的差异，而导致不同地区不同人群中DEC的检出率不一。DEC在年龄分布上存在差异，感染多集中在成年人中，这与国内其他研究结果一致[16,17]。可能是因为青壮年社会活动频繁，外出就餐几率大，暴露机会大增加所致。资料显示5年中DEC的检出率不存在统计学差异，提示近五年来研究地区腹泻人群中DEC感染水平比较稳定。结果显示腹泻人群的检出ETEC为主，其次是EPEC，这与深圳市监测数据[16]显示一致，提示研究地区不存在致泻性大肠埃希菌的优势型别变迁现象。与国内其他地区相比，上海地区腹泻人群中检出也是以ETEC多见，而沈阳、杭州地区以EAEC多见(70.3%，55.9%)，北京、福建地区以EPEC多见(42.8%、50.77%)[18,19]。

抗生素药敏结果表明，研究地区的DEC出现较高耐药率的是萘啶酸、氨苄西林、四环素。在同类研究中，上海地区[20]报道耐药率较高的前三种抗生素为甲氧苄啶、萘啶酸和四环素；沈阳地区[21]报道是氨苄西林、复方新诺明和庆大霉素；武汉[22]地区报道的是氨苄西林、哌拉西林和环丙沙星耐药率。提示不同地区DEC的耐药情况大同小异，基本上都对氨苄西林耐药。在本研究中，DEC对氨苄西林具有较高的的耐药率，特别是EPEC和EAEC，原因可能是因为该药物为非处方药，方便购买且价格便宜，易出现非适应症群体不规范使用或滥用，而导致耐药率较高。

对于临床常用的喹诺酮类(CIP、LEV)，DEC并没有出现较高的耐药率(均<7.0%)，而张燕飞、王佳军等[5,22]报道的DEC临床分离株耐药率均超过50.0%，可能是由于不同研究地区临床使用抗生素的情况不同所致，但耐药率相差较大，需作进一步确证研究。萘啶酸为第一代喹诺酮类抗生素，于1962 年被发现并广泛应用于临床尿路感染的治疗中，但很快就发现很多细菌已经对其产生了耐药性，现在临床上较少使用该类药物[23]。DEC对萘啶酸的耐药率高达69.5%，与杨秋娥[24]报道的猪源DEC耐药率都相似(65.0%)，低于赵瑞华[25]报道泌尿系大肠埃希菌分离株的耐药率(74.9%)，说明不同来源的菌株对萘啶酸均出现较高的抗药性。研究显示，肉类食品、动物体内分离的药菌株存在流行病学相关性[25,26]，即耐药菌可通过食物链进行感染传播，所以研究地区DEC出现萘啶酸的高抗药性，可能和动物源或食物源的耐药菌有关。头孢类抗生素是目前治疗儿童腹泻的首选，本研究中DEC对三代、四代头孢菌株素的耐药率较低，对该类抗生素仍具有较高的敏感性，故在临床治疗仍能产生较好的效果。

本研究结果显示深圳市龙岗区DEC的多重耐药率达38.9%，普遍低于国内外其他报道的结果 ，虽然多重耐药率相对不高，由于抗生素广泛使用及抗药基因水平转移均使得细菌的耐药趋势发展迅速[27]，因此仍需加强监测，警惕DEC多重耐药的快速增高。DEC的多重耐药谱多样，主要以磺胺类+青霉素类+四环素类+喹诺酮类+氨基糖苷类+头孢类、磺胺+四环素+青霉素+氨基糖苷+喹诺酮和磺胺+喹诺酮+青霉素的3种多重耐药组合多见。

深圳市龙岗区各类大肠埃希菌抗生素的耐药种类和程度有所不同。EPEC产生较高耐药率的抗生素种类较多，耐药率在50.0%以上的有6种，而ETEC和EAEC分别只有1种和2种。EPEC耐药类型以多重耐药多见，多重耐药率超过60.0%，是多重耐药率最高的分型，多数研究也报道EPEC多重耐药率高达50.0%～70.0%[28,29]，提示研究地区各个型别的DEC耐药情况有所不同，故临床治疗时需根据致病型别选择用药。

综上所述，DEC是一起本地区急性感染性腹泻的主要病原菌，对萘啶酸、氨苄西林、四环素的耐药较严重，并且各分型的抗生素耐药不同，EPEC耐抗生素的种类最多，多重耐药情况较严重，需加强关注。细菌的耐药性会随着时间的变化而增加，尼日利亚的一项的研究显示，从1986～1998年的12年间，致泻性大肠埃希菌对四环素、氨苄青霉素、氯霉素的耐药率从9%～35%上升到56%～100%[27]，所以需要长期监测DEC的分布和耐药特征，为本地区DEC流行的防控及临床合理使用抗生素提供客观依据。

[1]YuJX,JingHQ,LaiSJ,etal.EtiologyofdiarrheaamongchildrenundertheagefiveinChina:Resultsfromafive-yearsurveillance[J].JournalofInfect,2015,3:61-69

[2]张新,曲梅,钱海坤,等.北京市儿童2010-2014年感染性腹泻病原菌监测分析[J]. 中国卫生检验杂志,2015,12(22):345-348

[3]JafariA,AslaniMM,BouzariS,etal.Escherichiacoli:abriefreviewofdiarrheagenicpathotypesandtheirroleindiarrhealdiseasesinIran[J].Iranianjournalofmicrobiology, 2012,4(3):102-117

[4]KongHS,HongXP,LiXF,etal.CurrentperspectivesinpathogenesisandantimicrobialresistanceofenteroaggregativeEscherichiacoli[J].MicrobialPathogenesis, 2015,8(5):44-49

[5]王佳军.491例大肠埃希菌耐药情况分析[J].药事管理,2015,15(49):132-133

[6]施保华.1106 例大肠埃希菌耐药情况分析[J].中国实用医药,2011,6(7)：165-167

[7]陈文燕,罗燕萍,王成彬,等.社区腹泻患者感染致泻性大肠埃希菌分布与耐药性分析[J].中华医院感染学杂志,2014,24(24):134-136

[8]赵爱兰,熊衍文,白雪梅,等．鉴定五类致泻性大肠埃希菌和志贺菌的多重PCR方法[J]．疾病监测,2011,26(1)：65-67

[9]PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting.Thetwenty-sixInformationalSupplement[S].WaynePA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute, 2016

[10]陈冲,夏胜利,赵嘉咏,等. 2010～2012年河南省致泻性大肠埃希菌监测[J]. 预防医学情报杂志,2014, 11(5):964-968

[11]杨劲松,李玉燕,廖慧,等.2010～2012年福建省致泻性大肠杆菌监测结果分析[J]. 预防医学论坛,2014(3):161-165

[12]曲梅,张新,钱海坤,等.北京地区腹泻病患者致泻性大肠埃希菌感染类型及其流行特征[J].中华流行病学杂志,2014,35(10):1123-1126

[13]OsawaK,RaharjoD,WasitoEB,etal.FrequencyofDiarrheagenicEscherichiacoliamongChildreninSurabaya,Indonesia[J].JInfectDis, 2013, 6(6):446-448

[14]RajendranP,JampurSS,ChidambaramD,etal.PathotypeofdiarrheagenicEscherichiacoliinchildrenattendingatertiarycarehospitalinSouthIndia[J].JLabPhysicians,2012,4(1):24-29

[15]AlikhaniMY,HashemiSH,AslaniMM,etal.PrevalenceandantibioticresistancepatternsofdiarrheagenicEscherichiacoliisolatedfromadolescentsandadultsinHamedan[J].WesternIranJMicrobiol, 2013, 5(1):42-47

[16]李迎慧,邱亚群,冼慧霞,等. 深圳市腹泻病人致泻性大肠埃希菌及病因特征研究[J].中华流行病学杂志,2016,13 (7):115-117

[17]汤泓,李勇,张平平.上海市2013-2014年致泻性大肠埃希菌的监测[J].中华流行病学杂志,2015, 36(11):1163-1167

[18]于淼,王卓,冯立, 等. 沈阳地区2012 ～2014年致泻性大肠埃希菌耐药性监测分析[J].中国卫生检验杂志,2015,25(24):4301-4303

[19]周芳美. 2011-2013年杭州地区致泻性大肠埃希菌的流行特征与耐药性分析[D].硕士论文. 浙江中医药大学,23,2014

[20]赵雪涛,闵红芳,张春华,等.致泻性大肠埃希菌抗生素敏感试验比较与分析[J].中国卫生检验杂志,2013,23(14):3000-3003

[21]李莉红,邓孝陵,陈以莲,等.致泻性大肠埃希菌感染性腹泻患者血清型分布与耐药性[J].中华医院感染学杂志,2015,25(13):2901-2903

[22]张燕飞,田晓伟,郝琼,等.宁夏致泻性大肠埃希菌的流行特征及耐药现状研究[J].中国抗生素杂志,2015,40(11):865-869

[23]DavidC,Hooper,GeorgeA,etal.JacobyMechanismsofdrugresistance:quinoloneresistance[J].NewYorkAcademyofSciences, 2015, 12(4):12-31

[23]杨秋娥,李亮,廖晓萍,等.猪场及周边环境中大肠埃希菌对几种消毒剂及抗菌药的耐药性调查[J]. 华南农业大学学报,2015,11(6):15-22

[24]赵瑞华,舒明星,陈淑贞.80株大肠埃希菌靶位基因突变对喹诺酮耐药影响[J].中国感染控制杂志,2002,11(1):12-15

[25]MeloDB,MenezesAP,ReisJN,etal.AntimicrobialresistanceandgeneticdiversityofEscherichiacoliisolatedfromhumansandfoods[J].BrazJMicrobiol, 2004，46(4):116-117

[26]JohnsonJR,SannesMR,CroyC,etal.AntimicrobialDrug-ResistantEscherichiacolifromHumansandPoultryProducts,MinnesotaandWisconsin, 2002-2004[J].EmergingInfectiousDiseases, 2007,13(6):838-844

[27]OkekeIN,FayinkaST,Lamikanra,etal.Antibiotic-resistanceinEscherichiacolifromNigerianstudents, 1986-1998[J].InfectDis, 2000, 6(4):393-396

[28]Mahmoud-aznarehAzam,BakhshiBita,Najar-peerayehShahin,etal.ThetrendofenteropathogenicEscherichiacolitowardsatypicalmultidrugresistantgenotypes[J].Chemotherapy, 2016, 10(3):54-58

[29]HaghiFakhri,ZeighamiHabib,HajiahmadiFahimeh,etal.FrequencyandantimicrobialresistanceofdiarrhoeagenicEscherichiacolifromyoungchildreninIran[J].JournalofMedicalMicrobiology, 2014, 63(3), 427-432

The infection status and drug-reistance analysis of diarrheagenic escherichiacoli in Longgang district of Shenzhen from 2011 to 2015

BAIJiang-tao1,YANGHui2,CHENYing-jian2,LIUQu2,JINYu-juan2,GANLi-ping2,YEZhen-zhen2

(1.Longhua Center of Disease Control and Prevention in Shenzhen, Shenzhen 570100；2.Longgang Center of Disease Control and Prevention in Shenzhen, Shenzhen 518172)

Objective:To survey the infection and drug resistance of diarrheagenic escherichiacoli (DEC) in the population of diarrhea in order to prevention and control of diarrhea caused by bacteria and provide the basis for clinical treatment. Methods: Stool samples of diarrhea patients in Longgang district during the period of 2011-2015 were collected. DEC was isolated, cultured and performed biochemical identification. PCR was used to identify and typing. Kirby Bauer disk diffusion method was applied to perform antibiotic susceptibility testing.Results:The detection rate of DEC was 9.4% (95/1008); There was significant difference (P<0.05)ontheagedistribution,thetoptwogroupswere14to25 (11.5%)and25to35year-oldgroups(11.6%).ETECwasthemaintypeaccountingfor60.0% (56/95),followedbyEPEC(22.1%, 21/95)andtheEAEC(15.8%, 15/95).Therateofresistancetonalidixicacid(69.5%)washighest,followedbyampicillin(40.0%)andtetracycline(34.7%);MultidrugresistancerateofDECwas38.9%.ThoseofETEC,EPEC,EAECwere25.0%, 66.7%, 43.8%,respectively. Conclusion:The ETEC infection rate in DEC was the highest in Longgang District. The multidrug resistance of DEC was serious. Therefore clinical doctors should be aware of rational use of antibiotics.

diarrheagenic escherichiacoli;diarrhea;drug-resistance

1.2014年广东省医学科研基金，编号：2014669;2.2015深圳市科技研发项目，编号：2015486。

白江涛(1968～)男，广东深圳人，主管技师。

金玉娟(1976～)女，广东深圳人，博士，主任技师。E-mail:yujuanjin@126.com。

R

B

1008-0104(2017)02-0056-05

2016-12-08)