文│杨军（辽宁省建平县动物疫病预防控制中心）

复方黄参术制剂配合猪瘟免疫的应用研究

文│杨军（辽宁省建平县动物疫病预防控制中心）

多年来，养猪场猪瘟免疫失败是一个现实存在的问题。很多疫苗厂家、兽药经销商甚至有些专家建议提高免疫剂量，从实际效果分析，短期效果显著。但由于现在国内厂家生产的各种疫苗多为活毒，会出现超量免疫动物排毒现象，把疫苗毒排到猪舍内，因为饲养环境差，毒株经过几代繁衍会变强，或者有的病毒发生变异，成为造成猪瘟免疫失败的一个主要因素。笔者多年研究使用中药制剂提高动物自身的免疫能力，以期达到免疫效果，对于猪瘟的试验如下。

一、材料与方法

1.猪瘟试剂盒。IDEXX猪瘟病毒抗体检测试剂盒，购自北京爱德士元亨生物科技有限公司；猪瘟脾淋疫苗，购自辽宁省益康生物技术有限公司。

表1 筛选优化生产母猪免疫程序设计与分组

2.中药配方。中药方剂：黄芪15克、党参8克、白术（炙）8克、茯苓6克、肉苁蓉4克、菟丝子4克，板蓝根7克、连翘7克、沙参（玄参）7克、甘草8克等。以上按比例用水煎熬制成60毫升，饲喂仔猪40头（50千克以下），成年猪30头（或者应用粉剂剂量）。

2012年5月至2015年7月，分别在辽宁省朝阳市建平县万寿街道东村李志刚、深井镇章吉营子村侯伟、铁南街道南沟村丁福猪场进行对比试验。

3.试验方法。

（1）猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）检测原理。该试剂盒猪瘟病毒抗原包被的微量反应板，利用阻断酶联免疫吸附试验（ELISA）原理检测猪血清或血浆中猪瘟病毒抗体。如果被检血清中存在猪瘟病毒抗体，它们就会阻断辣根过氧化物酶标记（HRPO）的抗猪瘟病毒的单克隆抗体。该抗体与猪瘟病毒抗原结合通过辣根过氧化物酶与底物的显色程度进行判断，即用酶标仪在单波长450纳米或双波长450纳米与650纳米测定该反应体系的吸光度。当被检血清样品中含有猪瘟病毒抗体（结果为阳性）时，显色就会变浅，样品中没有猪瘟抗体（结果为阴性）时，显色就会变深。样品的阻断率可以通过450纳米波长样本吸光度与阴性对照吸光度的比值来确定。

表2 筛选优化生长育肥仔猪免疫程序设计与分组

（2）分组及实验方法。分组说明：分别对试验母猪组和试验仔猪组的免疫时间、免疫剂量分别进行筛选。每组实验分别在建平县万寿街道东村李志刚和深井镇章吉营子村侯伟、铁南街道南沟村丁福家猪场进行。

三户分别选择日龄相近的经产母猪各10头，随机分成2组，于产后30天在颈部肌肉注射疫苗，免疫剂量依次为1头份、2头份，每年免疫一次。采血、分离血清分别在免疫7天后进行，分别在4个时间段用IDEXX猪瘟病毒抗体检测试剂盒检测猪瘟抗体。以观测其在30天、100天、200天、300天抗体水平。

（3）试验生产母猪组、育肥仔猪组和对照组设计。从上述三户1头份试验组母猪中分别选择抗体较高，产仔数在10头以上的4头，待其产仔后，从其4窝仔猪中每窝选择10头进行跟踪采血，检测猪瘟抗体水平。跟踪采血日龄为35、60、80、100。

（4）生产母猪猪瘟免疫及其中药给药方法。见表1，对以上3户9组母猪进行跟踪采血检测抗体水平，跟踪采血日龄为30、100、200、300，连续4年。

（5）育肥仔猪猪瘟免疫及其中药给药方法（表2）。从1头份剂量免疫组母猪所产仔猪中每窝随机选择4头，每组共10头，最后获得4组试验猪，共40头。对以上4个组试验猪分别进行跟踪采血检测抗体水平，跟踪采血日龄为35、60、80、100。

二、结果分析

1.判断标准。阴性对照的平均OD450值大于0.5，阳性对照的阻断率大于50%。样品的阻断率=（阴性对照的OD450平均值－样品OD450值）÷阴性对照的OD450平均值x100%）。通过计算每个样品的阻断率判断猪瘟病毒（CSFV）抗体，如果被检样品的阻断率大于50%，判断为CSFV抗体阳性或有效保护；如果被检样品的阻断率在40%～50%，判断为CSFV抗体阳性或合格；如果被检样品的阻断率在30%～40%，判断为CSFV抗体为疑似；如果被检样品的阻断率小于30%，判断为CSFV抗体阴性或没有保护。

2.筛选母猪免疫程序。从表1生产母猪免疫程序设计与分组进行试验，试验母猪猪瘟抗体检测阻断率结果见表3。结果表明，2头份免疫组母猪抗体阻断率水平，平均略高于1头份免疫组，抗体水平差异不显著（p＞0.05）。1头份免疫组和2头份免疫组的母猪抗体持续时间差异不显著（p＞0.05）。

表3 母猪猪瘟抗体跟踪检测抗体阻断率结果 天、头

表4 仔猪猪瘟抗体跟踪检测抗体阻断率结果 天、头

表5 筛选母猪和生长育肥猪抗体检测合格率 头

3.筛选仔猪免疫程序。从表2筛选优化生长育肥猪免疫程序设计与分组试验，试验仔猪猪瘟抗体检测阻断率结果情况见表4。结果表明， 2头份免疫组母猪抗体阻断率水平，平均略高于1头份免疫组，抗体水平差异不显著（p＞0.05）。1头份免疫组和2头份免疫组的母猪抗体持续时间差异不显著（p＞0.05）。

4.筛选优化生产母猪免疫程序结果。2倍量组和1倍量组免疫抗体阳性率没有明显区别（表5）。2倍量组在试验中出现1头为阴性，没有保护力。所以，应用猪瘟脾淋疫苗免疫没有必要加量免疫注射，这样虽然1倍量组被检猪瘟病毒抗体阻断率略大于50%，但完全能够起到保护作用；而2倍量组被检猪瘟病毒抗体阻断率多在于70%左右，但是从表3中看出抗体持续时间上不够稳定。由此得出结论是从节省开支，减少浪费上看，1倍量组优于2倍量组。

5.筛选优化生长育肥猪免疫程序结果。试验生长育肥猪跟踪采血检测抗体水平见表4。结果表明，2倍量组和1倍量组比较，前者不如后者，因为2倍量组在从其跟踪100天检测时出现1头抗体阴性。从表5可以看出，免疫抗体阳性率没有明显区别。2倍量组和1倍量组在试验中出现2头阴性，没有保护力。所以在应用猪瘟脾淋疫苗免疫没有必要加量免疫注射，表3对比发现，2倍量组较1倍量组抗体持续时间短。

三、结论

第一，生产母猪通过试验检测猪内的猪瘟抗体水平，通过应用中药研究制定了适合于不同养殖模式的猪瘟免疫程序，即应用猪瘟脾淋常规剂量配合中药进行免疫，母猪每年免疫一次，免疫抗体持续时间达到一年。

第二，仔猪常规免疫，应用猪瘟脾淋首免日龄35日龄，加强免疫时间为60日龄，免疫剂量1头份较为合适。