秦豫培，胡阳黔

（湖北医药学院附属东风总医院消化内科，湖北十堰442000）

临床研究·论著

锌指蛋白217在结肠癌组织中的表达及其临床意义

秦豫培，胡阳黔

（湖北医药学院附属东风总医院消化内科，湖北十堰442000）

目的检测锌指蛋白217（ZNF217）在结肠癌中的表达，分析ZNF217的表达水平与结肠癌患者临床病理特征及结肠癌患者生存与预后的相关性。方法利用免疫组织化学方法检测84例结肠癌患者组织标本及相应癌旁组织中ZNF217的表达水平，并利用Spearman秩相关、K-M曲线及Cox比例风险回归模型等统计方法分析ZNF217在结肠癌中的临床相关性。结果免疫组化结果发现结肠癌组织中ZNF217阳性表达率高于癌旁组织。Spearman秩相关显示ZNF217的表达水平与结肠癌患者TNM分期和淋巴转移情况呈正相关，且与其他结肠癌患者临床病理特征无相关性。K-M曲线显示ZNF217表达水平与结肠癌患者术后总体生存率及无进展生存率呈负相关。Cox风险比例模型显示ZNF217可作为判断结肠癌预后独立的预测指标。结论ZNF217在结肠癌组织中表达升高，且可作为判断结肠癌患者生存及预后的独立的潜在分子指标。

锌指蛋白217；结肠癌；生存；预后

结肠癌是导致肿瘤相关死亡最常见的恶性肿瘤之一，其发病率位居所有肿瘤的第3位[1]。目前，结肠癌约占全球新发肿瘤总例数的10%，每年新发患者约为100万[2]，截至目前，我国约有125万人被诊断为结肠癌[3]。结肠癌患者常由于肿瘤发生转移而失去手术机会，肝脏是结肠癌最主要的转移定位病灶[4]。约50%～60%的结肠癌患者将发生远处转移，该类患者的5年总体生存率一般为5%左右[5-6]。近年来，根治性切除术后给予患者放化疗等综合性治疗手段，已大幅延长结肠癌患者的5年生存率。然而，目前尚无有效治疗方法可降低结肠癌患者转移及复发的几率。结肠癌的发病人数众多，且缺少有效的治疗手段，基于此，目前迫切寻找与结肠癌发生及进展相关的分子靶点。

锌指蛋白217（zinc-finger protein 217，ZNF217）是库普佛样转录因子家族成员，其首次发现于乳腺癌中，并被证实与乳腺癌的恶性表型及不良预后密切相关[7-8]。ZNF217在C段编码8个可预测的C2H2锌指基序和富含脯氨酸的转录激活结构域[9-10]。除可调控乳腺癌的进展外，后续研究发现，ZNF217在包括胃癌[11]、卵巢癌[12]及前列腺癌等[13]肿瘤的发生及进展中也发挥着至关重要的作用。在结肠癌中，ZNF217表达被证实异常上调，并可促进肿瘤细胞的侵袭及转移能力[14]。然而，ZNF217的表达水平与结肠癌患者生存及预后的关系，相关研究尚不充分。

本研究通过免疫组织化学方法检测ZNF217在结肠癌及癌旁组织中表达，并利用一系列统计学方法及模型，分析ZNF217与结肠癌患者临床病理特征、生存周期及预后的相关性。结果显示，ZNF217在结肠癌组织中表达升高，且可作为判断结肠癌患者生存及预后的独立的潜在分子指标。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2001年1月-2007年12月在湖北医药学院附属东风总医院消化内科接受手术、肿瘤组织得到根治性切除并经病理证实为结肠癌的肿瘤组织及癌旁组织标本84例，所有入选患者均持续随访，随访截止时间为患者死亡或至5年随访截止日，入组患者均具备完整随访资料。所有入组患者术前未进行任何抗肿瘤治疗，术中取肿瘤组织及相应的癌旁组织，经石蜡包埋，而后按实验所需制成组织芯片。本研究经湖北医药学院附属东风总医院伦理委员会审核并批准，所有入选本研究的结肠癌患者均签署知情同意书并同意使用其组织标本用于本项科学研究之中。

1.2 免疫组织化学检测ZN F217在结肠癌及癌旁组织中表达

常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水。柠檬酸盐缓冲液高压修复90 s。30 ml/L过氧化氢孵育25 min，磷酸盐缓冲液5 min×5次。兔抗人ZNF217-抗（1∶150）4℃孵育过夜，磷酸盐缓冲液5 min×5次。加入聚合物增强剂，37℃孵育15 min，磷酸盐缓冲液5 min×5次。加入酶标抗兔聚合物放大剂，37℃孵育15 min，磷酸盐缓冲液5 min×5次。DAB显色，苏木素复燃，1 ml/L盐酸酒精分化，PBS返蓝，脱水，透明，封片。结果判定参照文献判定方法，每个片子任选10个视野，每个视野计数100个细胞，统计阳性细胞百分率及着色程度。免疫组织化学染色结果由两位病理科医师以双盲的方式完成，两者不一致的结果经多镜头显微镜讨论得出一致结果。百分率＜25%、不着色或较淡着色者为阴性，百分率＞35%、适中着色或深着色者为阳性。

1.3 统计学方法

数据分析采用SPSS 22.0统计软件，计量资料以数据均数±标准差（±s）表示，用Spearman秩相关分析各组间计数资料的差异，用Kaplan-Meier法绘制生存曲线及Log-rank检验分析两组生存周期之间的关系，采用Cox风险比例模型各指标与预后的关系，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ZN F217蛋白在结肠癌组织中的表达

免疫组织化学结果显示，在结肠癌患者组织中ZNF217表达上调，图1所示为结肠癌及癌旁组织中ZNF217表达示例，ZNF217阳性染色特征为细胞核与细胞浆内棕黄色颗粒状着色。结肠癌患者癌组织及癌旁组织两者之间ZNF217阳性比例分别为47/ 84（55.95%）和5/84（5.95%），差异有统计学意义（χ2=49.130，P=0.000），ZNF217在结肠癌组织阳性比例高于癌旁组织。

2.2 ZN F217的表达水平与结肠癌患者临床病理特征的关系

将结肠癌患者分为ZNF217阳性组及ZNF217阴性组，利用Spearman秩相关分析ZNF217表达水平与结肠癌患者临床病理特征的关系。结果显示：ZNF217的表达水平与结肠癌患者TNM分期（P= 0.002）和淋巴结转移情况（P=0.000）密切相关，而与其他病理特征无相关性。见表1。

图1 ZN F217蛋白在结肠癌组织期癌旁组织中的表达（×200）

表1 结肠癌患者不同临床病理特征癌组织ZN F217阳性表达率的比较

2.3 ZN F217的表达水平与结肠癌患者术后生存率的关系

Kaplan-Meier生存曲线显示，ZNF217阳性组的结肠癌患者的术后5年总体生存率和无进展生存率均低于ZNF217阴性组（χ2=8.156和5.217，P=0.048和0.019）。

2.4 ZN F217的表达水平与结肠癌患者预后的关系

续表1

利用Cox风险比例模型评估ZNF217表达水平及结肠癌临床病理特征对结肠癌患者生存预期的影响。单因素分析结果显示，TNM分期风险比（hazard ratio，HR）、淋巴结转移情况、血管侵袭及ZNF217的表达水平与总体生存预期及无进展生存预期相关。多因素分析评估结果显示，TNM分期、淋巴结转移情况、血管侵袭及ZNF217表达水平均为结肠癌患者总体生存预期及无进展生存预期的独立的判断预后指标。见表2、3和图2。

表2 结肠癌患者总体生存预期的单因素分析及多因素分析

表3 结肠癌患者无进展生存预期的单因素分析及多因素分析

图2 结肠癌患者ZN F217不同表达术后生存率

3 讨论

根据最新流行病学调查报告显示，结肠癌患者的5年总体生存率仅为47.2%[15]。根治性切除术、常规化学治疗及放射治疗是结肠癌患者的主要治疗手段[16]。然而，结肠癌患者就诊时往往已处于进展期，通常已发生淋巴结及远处转移。因此，鉴定结肠癌相关的诊断及治疗靶点对改善结肠癌患者的生存及预后具有重要的意义。在本研究中，通过免疫组织化学技术检测结肠癌及癌旁组织中ZNF217的表达水平，并利用Spearman秩相关、K-M生存分析及Cox风险比例模型等一系列统计方法分析ZNF217与结肠癌患者病理特征、生存及预后的关系，进一步证实ZNF217在结肠癌中有着极其重要的临床相关性。研究发现，ZNF217在结肠癌中的表达水平高于癌旁组织，且结肠癌组织中ZNF217的表达水平与结肠癌患者的TNMF分期和淋巴结转移情况及情况密切相关。更为重要的是，ZNF217的表达水平与结肠癌患者的5年总体生存率、无进展生存率及预后亦密切相关。

近年来，研究发现ZNF217在卵巢癌中高表达，并可活化PI3K/AKT信号通路而促进肿瘤细胞增殖[17]。此外，ZNF217可促进调控有丝分裂的重要激酶Aurora-A而调控乳腺癌细胞的增殖；此外，ZNF217还可通过促进Bcl-2蛋白的降解而抑制紫杉醇诱导的凋亡[18]。ZNF217是20q13.2染色体最为重要的基因之一，而研究证实20q13.2在结肠癌肝转移的患者中拷贝数增加[19]，因此，ZNF217在结肠癌肝转移的患者中的表达也可能表达上调。上皮间质转化是肿瘤转移的主要机制之一，其主要标志为肿瘤细胞中上皮细胞钙粘蛋白（epithelial-cadherin，E-cadherin）表达的缺失。而研究证实，ZNF217可抑制肿瘤细胞中E-cadherin的表达，并促进上皮细胞向间质细胞的转变（epithelial-mensenchymal transition，EMT）的发生，而最终促进肿瘤细胞的转移[20]，这可能是ZNF217作为癌基因发挥作用的潜在机制。

值得注意的是，新近发表的一篇研究报道与本研究类似的结果，该研究发现ZNF217在结直肠癌组织中表达水平高于癌旁组织，且与患者的肿瘤体积、淋巴结转移情况及TNM分期密切相关。此外，该研究还发现沉默结直肠癌细胞系中ZNF217的表达水平可抑制肿瘤细胞的转移和侵袭能力[14]。该研究部分研究结果与本研究吻合，然而在ZNF217与结肠癌患者肿瘤体积之间的相关性上，本研究与该研究结果出现分歧，其可能的原因是，上述研究分析ZNF217与结肠癌患者临床病理特征的相关性上采用的分析方法为Pearson卡方分析，而本研究采用的分析方法为Speraman秩相关分析。值得注意的是，上述研究除分析ZNF217的临床相关性外，还进行细胞水平的实验证实ZNF217对结肠癌细胞侵袭和转移的影响。而本研究未进行相关机制方面的实验，这也是本研究的不足，下一步的实验也将重点关注ZNF217对结肠癌细胞功能的影响。而本研究进一步通过K-M生存曲线及Cox风险比例模型分析ZNF217与结肠癌患者生存及预后的关系，使本研究可更深入的证实ZNF217与结肠癌患者的临床相关性，对于鉴定结肠癌预后判断分子指标方面的研究更有意义。

综上所述，ZNF217在结肠癌组织中的表达水平较癌旁组织上调，上调的ZNF217的表达水平与结肠癌患者TNM分期和淋巴结转移情况密切相关。此外，ZNF217的表达水平与结肠癌患者的5年总体生存率、无进展生存率及预后密切相关。本研究证实ZNF217在结肠癌发生及进展中发挥着重要的作用，为判断结肠癌生存及预后的潜在分子靶点。

[1]JEMAL A,BRAY F,CENTER MM,et al.Global cancer statistics,2012[J].Ca A Cancer Journal for Clinicians,2011,61(2)：69-90.

[2]CHU E.Colorectal cancer(CRC)continues to be a major public health problem in the United States and throughout the world[J]. Cancer Journal,2010,16(3)：195.

[3]CHEN W,ZHENG R,ZHANG S,et al.Report of incidence and mortality in China cancer registries,2009[J].Chinese Journal of Cancer Research,2012,25(3)：10-21.

[4]ALWAN A.World Health Organization[J].Disaster Medicine and Public Health Preparedness,2007,1(1)：7-8.

[5]VAN C E,CERVANTES A,NORDLINGER B,et al.Metastatic colorectal cancer：ESMO clinical practice guidelines for diagnosis, treatment and follow-up[J].Annals of Oncology,2014,19(2)：29-30.

[6]DIN F V,THEODORATOU E,FARRINGTON S M,et al.Effect of aspirin and NSAIDs on risk and survival from colorectal cancer[J].Gut,2010,59(12)：1670-1679.

[7]NONET G H,STAMPFER M R,CHIN K,et al.The ZNF217 gene amplified in breast cancers promotes immortalization of human mammary epithelial cells[J].Cancer Research,2001,61(4)：1250-1254.

[8]COLLINS C,ROMMENS J M,KOWBEL D,et al.Positional cloning of ZNF217 and NABC1：genes amplified at 20q13.2 and overexpressed in breast carcinoma[J].Proc Natl Acad Sci USA, 1998,95(15)：8703-8708.

[9]COHEN P A,DONINI C F,NGUYEN N T,et al.The dark side of ZNF217,a key regulator of tumorigenesis with powerful biomarker value[J].Oncotarget,2015,6(39)：41566-41581.

[10]VANDEVENNE M,JACQUES D A,ARTUZ C,et al.New insights into DNA recognition by zinc fingers revealed by structural analysis of the oncoprotein ZNF217[J].Journal of Biological Chemistry,2013,288(15)：10616-10627.

[11]SHIDA A,FUJIOKA S,KURIHARA H,et al.Prognostic significance of ZNF217 expression in gastric carcinoma[J].Anticancer Research,2014,34(9)：4813-4817.

[12]SUN G,ZHOU J,YIN A,et al.Silencing of ZNF217 gene influences the biological behavior of a human ovarian cancer cell line[J].International Journal of Oncology,2008,32(5)：1065-1071.

[13]SZCZYRBA J,NOLTE E,HART M,et al.Identification of ZNF217,hnRNP-K,VEGF-A and IPO7 as targets for microRNAs that are downregulated in prostate carcinoma[J].International Journal of Cancer,2013,132(4)：775-784.

[14]ZHANG Z C,ZHENG L Q,PAN L J,et al.ZNF217 is overexpressed and enhances cell migration and invasion in colorectal carcinoma[J].Asian Pacific Journal of Cancer Prevention,2015, 16(6)：2459-2463.

[15]ZENG H,ZHENG R,GUO Y,et al.Cancer survival in China, 2003-2005：a population-based study[J].International Journal of Cancer,2015,136(8)：1921-1930.

[16]BOZKURT O,INANC M,TURKMEN E,et al.Clinicopathological characteristics and prognosis of patients according to recurrence time after curative resection for colorectal cancer[J].Asian Pacific Journal of Cancer Prevention,2014,15(21)：9277-9281.

[17]HUANG H N,LIN MC,HUANG W C,et al.Loss of ARID1A expression and its relationship with PI3K-Akt pathway alterations and ZNF217 amplification in ovarian clear cell carcinoma[J]. Modern Pathology,2014,27(7)：983-990.

[18]THOLLET A,VENDRELL J A,PAYEN L,et al.ZNF217 confers resistance to the pro-apoptotic signals of paclitaxel and aberrantexpressionofAurora-Ainbreastcancercells[J]. Molecular Cancer,2010,9(1)：1-17.

[19]HIDAKA S,YASUTAKE T,TAKESHITA H,et al.Differences in 20q13.2 copy number between colorectal cancers with and without liver metastasis[J].Clinical Cancer Research,2000,6(7)：2712-2717.

[20]BAI W D,YE X M,ZHANG MY,et al.MiR-200c suppresses TGF-beta signaling and counteracts trastuzumab resistance and metastasis by targeting ZNF217 and ZEB1 in breast cancer[J]. International Journal of Cancer,2014,135(6)：1356-1368.

Expression and clinical significance of ZNF217 in colon cancer

Yu-pei Qin,Yang-qian Hu
(Department of gastroenterology,Dongfeng General Hospital Affiliated to Hubei Medical College,Shiyan,Hubei 442000,China)

ObjectiveTo explore the expression of ZNF217 in tissues of colon cancer(CRC),investigate the association of the expression levels of ZNF217 and clinicopathological features of CRC patients,and analyze the relevance of ZNF217 and survival and prognosis of CRC patients.MethodsExpressions of ZNF217 were analyzed by immunohistochemistry in 84 CRC patients.Spearman's rank test,K-M survival curves,and Cox proportional hazards risk were conducted to analyze the clinical relevance of ZNF217 in CRC.ResultsImmunohistochemistry revealed that the positive rate of ZNF217 was upregulated in CRC tissues comparewithadjacenttissues.SpearmanrankcorrelationshowedthatpositiveZNF217expressionwas significantly associated with TNM stage,lymph node status and venous invasion of CRC patients.Kaplan-Meier curves showed that positive ZNF217 expression was inversely correlated with 5 years overall and progression-free survival time of CRC patients.Cox proportional hazards risk analysis revealed that ZNF217 was an independent prognostic factor for CRC.ConclusionsZNF217 expression is upregulated in tissues of CRC,and ZNF217 is a potential survival and prognosis biomarker in CRC.

ZNF217;colon cancer;survival;prognosis

R735.35

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.08.008

1005-8982（2017）08-0038-05

2016-01-25

胡阳黔，E-mai：huyangqian999@163.com