王维生，李桂芹，白 琳，李明伟，肖 静，李真玉，马志强，赵 敏

(山东寿光市人民医院， 山东 潍坊 262700)

对阿尔茨海默病患者脑脊液和血浆中sTNFR1和sTNFR2的含量水平的分析研究

王维生，李桂芹，白 琳，李明伟，肖 静，李真玉，马志强，赵 敏

(山东寿光市人民医院， 山东 潍坊 262700)

目的研究阿尔茨海默病患者脑脊液和血浆中sTNFR1和sTNFR2的含量水平变化。方法ELISA方法。结论在AD病人的脑脊液和血浆中，sTNFR1和sTNFR2的含量均明显升高。这就提示了sTNFR可以作为阿尔茨海默病早期诊断的可靠客观的生物标记。

阿尔茨海默病；肿瘤坏死因子转化酶；脑脊液；血浆

1 材料和方法

1.1 材料来源

血浆收集中，要求患者为空腹状态，静脉抽取后由EDTA抗凝管保存，在此基础上将戴柏酶抑制剂置于其中，离心后将上层血浆吸取，于-80℃环境下利用EP管保存，切忌出现反复冻融情况。此外，收集脑脊液后，要求混匀并在-80℃环境下保存。

1.2 实验试剂

ELISA试剂盒：Human sTNFR1 Immunoassay；Human sTNFR1 Immunoassay；Human sTNFR2 Immunoassay；Human sTNFR2 Immunoassay，R＆D system公司产品。

TACE的酶底物：R＆D system公司产品。

1.3 实验仪器

酶标仪(SpectraMax M5)：美国Molecular Devices公司。

1.4 ELISA方法操作步骤

在96孔板内置入稀释液RD1-650 μL，分别将将抗对照组血浆、AD病人血浆、200 uL标准液加入，对于稀释液然200 μL需在室温下通过空白孔检测，孵育时间2 h。

冲洗3次后，每孔加入200 μL的sTNFR偶联物，室温孵育2小时。

洗3次后，每孔加入200 μL的底物，室温避光孵育20分钟。

每孔加入50 μL终止液，轻轻混匀。

酶标仪450 nm波长处测吸光度(OD)值，减去空白孔OD值，即为测试样品OD值。

2 统计学处理

实验结果采用均数±标准误(mean±S.E.M.)表示。应用SPSS11.5软件统计。对比健康对照组、AD病人脑脊液以及血浆结果，以t检验，P＜0.05表示结果有统计学意义。

3 结果

3.1 AD病人脑脊液和血浆中sTNFR1的含量增高

AD病人脑脊液中的sTNFR1的含量为930.9±297.3pg/ ml明显高于健康对照组(HC)(705.0±343.8 pg/mL)，有统计学意义(P＜0.05)；血浆中sTNFR1比较，AD病人286.3± 137.3 pg/mL高于HC组204.0±104.2 pg/mL，差别有统计学意义(P＜0.05)(图1)。

3.2 AD病人脑脊液和血浆中sTNFR2的含量增高

AD病人脑脊液中sTNFR2的含量为832.1±306.3 pg/ mL，健康对照组脑脊液中sTNFR2的含量为409.6±157.2 pg/mL，两者相比差别有统计学意义(P＜0.05)；AD病人血浆中sTNFR2的含量为390.3±90.3 pg/mL，健康对照组血浆中sTNFR2的含量为228.2±61.8 pg/mL，两者相比差别有统计学意义(P＜0.05)(图2)(表1，表2)。

图1 AD病人和健康对照组脑脊液和血浆中sTNFR1的含量

图2 AD病人和健康对照组脑脊液和血浆中sTNFR2的含量

4 讨论

作为神经退行性疾病之一，AD在临床症状上多以记忆功能恶化、认知功能减退、日常生活能力差等为主，且部分患者有行为障碍、神经精神症状表现。从发病机制上看，其仍是研究的重点，如部分研究中可发现，AD发病中铅中毒假说、Aβ异常沉积、炎症学说等都可能参与其中，尤其在炎症学说方面表现更加明显。一般在炎性途径下，很可能出现ADAβ异常沉积情况，其是导致细胞凋亡的组要原因。此外，当前老年疾病中，老年性痴呆也逐渐成为严重威胁健康的疾病，需要做到及早发现、及早治疗，有助于病情的控制。

研究发现，在ELISA实验方法应用下，观察到血浆和脑脊液中sTNFR1和sTNFR2的含量是明显升高的，这就提示了sTNFR可以作为老年痴呆早期诊断的可靠客观的生物标记。

[1] Iqbal K，Grundke-Iqbal I，Zaidi T，Ali N，Wisniewski HM.Are Alzheimer neurofibrillary tangles insoluble polymers?Life Sci，1986，38：1695-1700.

[2] Gandy S.The role of cerebral amyloid beta accumulation in common forms of Alzheimer disease.J Clin Invest，2005，115：1121-1129.

本文编辑：罗 兰

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ISSN.2095-8242.2017.12.2339.01