於颖+顾其芳+陈敏+张红芝

摘要：目的 制备用于检测肉制品中沙门氏菌荧光定量PCR的标准质粒。方法 设计针对沙门氏菌invA基因的引物，扩增特异片段，转入质粒载体中构建重组质粒。将构建的重组质粒作为标准品，进行优化后的实时荧光定量PCR，建立标准曲线，并考察该标准品灵敏性及稳定性。结果 成功构建含有沙门氏菌invA基因的质粒标准品，用其建立的标准曲线循环阈值（Ct值）与模板的拷贝数呈良好线性关系（r2=0.9979），最低可以检出10 拷贝/反应。该标准质粒经验证具有良好的稳定性。用该质粒标准品检测肉制品中的沙门氏菌，经2h增菌后，可在7h内完成对样本的检测。结论 所构建的质粒标准品可用于荧光定量PCR检测肉制品中的沙门氏菌，为考量实验质量提供参考依据。

关键词：质粒标准品；荧光定量PCR；沙门氏菌；肉制品；

当前，微生物污染引起的食源性疾病已引发人们的普遍关注和深入研究。在各类食源性病原菌及危害因子中，沙门氏菌是主要致病因子[1]。根据我国统计数据显示，由沙门氏菌导致的食源性疾病占总数的10.2%，且以肉制品受污染居多[2，3]。建立有效手段快速检测肉制品中沙门氏菌，对防控和监测这类食源性疾病意义重大。

荧光定量PCR（real-time quantitative polymerase chain reaction， qPCR）方法可快速并灵敏地对沙门氏菌进行检测，而拥有可靠的标准品保证了检测的稳定和可重复性[4]。目前，获得荧光定量PCR标准品的方法有许多，包括菌液提取模板DNA、PCR扩增产物纯化、PCR扩增目的片段割胶纯化以及构建含与目的基因片段相同序列的重组质粒等，其中以质粒作为标准品最为稳定，且制备简单，使用方便。……