钟 鸣 陈少锋 赵湘培 苏 华 余胜民

(1. 广西中医药研究院，广西 南宁 530012；2. 广西壮族自治区民族医药研究院，广西 南宁 530001；)

实验研究

3种壮医方对CCl4肝损伤大鼠血清相关指标的影响△

钟 鸣1陈少锋2赵湘培2苏 华1余胜民2

(1. 广西中医药研究院，广西 南宁 530012；2. 广西壮族自治区民族医药研究院，广西 南宁 530001；)

目的：研究3种壮医方对CCl4肝损伤大鼠血清相关指标的影响。方法：抽取144只SD大鼠，雌雄各半，随机分成12组，每组12只，即正常对照组，模型对照组，阳性秋水仙碱组，白花丹消蛊汤高、中、低剂量组，鸡骨草驱蛊汤高、中、低剂量组，七叶化蛊散高、中、低剂量组。除正常对照组外，其余各组均按0.6mL/100g动物体重皮下注射给予40%四氯化碳(CCl4) 橄榄油造模，2次/wk，连续造模8wk。造模2wk灌胃给药，连续给药6wk后，大鼠腹主动脉取血，离心取血清，检测各组大鼠血清中血脂、肝功能及肾功能水平，对比各方剂疗效。结果：与模型组相比，七叶化蛊散、白花丹消蛊汤和鸡骨草驱蛊汤各方剂能不同程度改善肝损伤大鼠血清肝肾功能各指标水平(P<0.01或P<0.05)。结论:七叶化蛊散、白花丹消蛊汤和鸡骨草驱蛊汤具有改善肝损伤的作用。

壮医方；肝损伤；大鼠

肝纤维化是指由于各种致病因子导致的肝结缔组织异常增生，肝内发生病理性细胞外基质过度沉淀，是慢性肝病转为肝硬化的前期阶段，具有可逆性的特点[1]。也是进一步向肝硬变发展的主要中间环节。壮医学中，现代医学的肝硬化(肝纤维化)可归于壮瑶医蛊病范畴，肝纤维化属蛊病日久，湿毒热毒渐消，蛊毒滞留龙路火路，并在腹中结块所致。治疗以通调龙路火路为主，清除热毒湿毒为辅。壮医方白花丹消蛊汤、鸡骨草驱蛊汤、七叶化蛊散都是治疗盅毒、腹部结块的良药，但其对肝纤维的明确疗效目前还尚未可知。本研究采用四氯化碳(CCl4)建立大鼠肝损伤模型，探讨3种壮医方对肝损伤大鼠的相关血清指标的影响，为其方剂的临床使用提供实验依据。

1 材料

1.1 壮医方的制备

1.1.1 白花丹消蛊汤由白花丹、排钱草、车前草、岗梅根等6味壮药组成。称取上述白花丹消蛊汤处方药材共13 kg，加水10～12倍量，室温浸泡1 h，加热煮沸1 h，滤过。以上方法共提取二次，合并滤液，浓缩到5 L备用。

1.1.2 鸡骨草驱蛊汤由鸡骨草、田基黄、虎杖、 赤小豆等7味壮药组成。称取上述鸡骨草驱蛊汤处方药材共13 kg，加水10～12倍量，室温浸泡1 h，加热煮沸1 h，滤过。以上方法共提取2次，合并滤液，浓缩到5 L备用。

1.1.3 七叶化蛊散由七叶一枝花、三棱、莪术、夏枯草等7味壮药组成。称取上述七叶化蛊散处方药材共13 kg，加水10～12倍量，室温浸泡1 h，加热煮沸1 h，滤过。以上方法共提取2次，合并滤液，浓缩到5 L备用。

1.2 药品与试剂：丙氨酸氨基转移酶(ALT)批号：150113031、门冬氨酸氨基转移酶(AST)批号：150213026、碱性磷酸酶(ALP)批号：150314014、总胆红素(T-BIL)批号：150613025，均为中国深圳迈瑞试剂盒。

1.3 实验动物：SD大鼠，清洁级，体重180～220g，雌雄各半，购自广西医科大学实验动物中心 (生产许可证号：SCXK桂2003—0003)。动物购回后，雌雄分笼饲养，自由饮水，喂全价颗粒饲料。动物室温度(24±2)℃ 。相对湿度50%～60%，动物室按常规定期消毒。

1.4 主要仪器：全自动生化分析仪(BS-350E，中国深圳迈瑞)，高速冷冻离心机( 上海安亭科学仪器厂)，酶标仪(Multislcan MK3，赛默飞世尔上海仪器有限公司)。

2 方法

2.1 动物分组、造模及给药方法：随机抽取144只SD大鼠(180～220g)，雌雄各半，随机分成12组，每组12只，即正常对照组，模型对照组，秋水仙碱组，白花丹消蛊汤高、中、低剂量组，鸡骨草驱蛊汤高、中、低剂量组，七叶化蛊散高、中、低剂量组。除正常对照组外，其余各组均按0.6mL/100g动物体重皮下注射给予40%四氯化碳(CCl4)橄榄油造模，2次/wk，连续造模8wk。造模2wk起灌胃给药，正常对照组和模型对照组给予生理盐水，秋水仙碱组给予0.01mg/mL秋水仙碱(1×10-4g/Kg)，白花丹消蛊汤高、中、低剂量组分别按12g生药/Kg，6 g生药/Kg，3 g生药/Kg剂量给药，鸡骨草驱蛊汤高、中、低剂量组分别按18g生药/Kg， 9 g生药/Kg，4.5g生药/Kg剂量给药，七叶化蛊散分别按18g生药/Kg，9 g生药/Kg，4.5g生药/Kg剂量给药。所有剂量组均每天给药1次，连续给药6wk，治疗期间注意观察大鼠的毛发、爪甲、舌质、舌象、舌下静脉、眼球颜色、尾部色泽或瘀斑、粪便变化等情况。

2.2 指标检测：实验结束前禁食12h，动物称重，各组大鼠腹主动脉取血，离心取血清，按试剂盒说明书测定血清肝功能及肾功能水平。肝功能检测指标包括：丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(T-BIiL)γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)及白/球蛋白比(A/G)。肾功能检测指标包括：尿酸(UA)、尿素(UREA)及血肌酐(CREA)。

2.3 统计学方法： 结果采用平均值±标准差来表示。所有的统计分析由SPSS16.0软件做t检验分析，P<0.05表明差异有统计学意义。

3 结果

3.1 各方剂对动物体重增长的影响： 各方剂对肝损伤大鼠体重的影响详见图1。各给药组动物的食量、腺体分泌、呼吸、粪便等末见明显异常。空白组大鼠体重增长较明显，而造模后各组动物少食少动，毛色疏松无光泽，体重增长缓慢。

图1 各组大鼠体重变化曲线图

组别ALT(U/L)AST(U/L)TBiL(μmol/l)γ-GT(U/L)A/G(%)阳性组100.90±19.19*275.99±30.09*2.78±2.04*8.48±4.75**0.68±0.07模型组270.56±215.98483.78±294.768.44±8.4016.54±8.880.65±0.06空白组39.63±11.59**156.58±55.57**0.13±0.23**0.61±0.32**0.73±0.04**QYL组74.48±19.09**191.82±34.31**0.88±1.31**5.08±4.44**0.73±0.04**QYM组62.84±19.16**151.99±32.13**1.93±3.66**6.20±4.10**0.74±0.06**QYH组69.31±47.54**144.71±107.88**5.18±8.987.41±4.97**0.66±0.05BHL组77.42±49.79*240.86±36.84**0.78±0.96*4.13±2.44**0.69±0.05**BHM组85.28±47.63**227.21±36.14**2.90±3.13*6.47±4.14**0.67±0.08BHH组87.36±38.04**214.04±104.29**3.35±4.75*7.88±3.24**0.65±0.04JGL组108.20±53.46**258.70±96.53**6.32±7.8610.69±8.850.77±0.16JGM组112.77±30.45*273.92±61.33*8.14±4.2514.91±4.730.69±0.06JGH组97.83±45.29**212.55±101.26**5.47±10.7511.64±9.180.72±0.06*

注：与模型组比较，*P﹤0.05，**P﹤0.01，下同。

3.2 各方剂对血清肝功能指标的影响：各方剂对肝损伤大鼠血清肝功能水平由表1可见，与空白组相比，模型组肝损伤大鼠血清ALT、AST、TBiL及γ-GT水平均升高，A/G比降低(P<0.01)，差异具有统计学意义。七叶化蛊散高、中、低组大鼠ALT、AST、TBiL及γ-GT水平降低，低、中剂量组血清A/G比升高(P<0.01或P<0.05)；白花丹消蛊汤高、中、低组大鼠ALT、AST、TBiL及γ-GT水平降低，低剂量组血清A/G比升高(P<0.01或P<0.05)；鸡骨草驱蛊汤高、中、低组大鼠ALT、AST、TBiL及γ-GT水平降低，高剂量组血清A/G比升高(P<0.01或P<0.05)。

3.3 各方剂对肾功能指标的影响:各方剂对肝损伤大鼠血清肾功能水平的影响详由表2可见，与空白组相比，模型组肝损伤大鼠血清UA水平均降低(P<0.01)，UREA和CREA(P<0.01)水平升高。与模型组相比，阳性药、七叶化蛊散高中低剂量、白花丹消蛊汤高中低剂量、鸡骨草驱蛊汤高中低剂量可升高肝损伤大鼠血清UA水平(P<0.01)；阳性药、七叶化蛊散高剂量、白花丹消蛊汤高中低剂量、鸡骨草驱蛊汤高中低剂量可降低肝损伤大鼠血清中UREA和CREA含量(P<0.01或P<0.05)。

表2 各组大鼠血清肾功能水平

4 讨论

蛊病是以腹部胀大、脉络暴露为特征的一类疾病。现代医学的肝硬化(肝纤维化)可归于壮瑶医蛊病范畴。壮瑶医认为蛊毒是一种毒物，由各种动物、植物毒素混合而成。蛊毒一旦侵入机体，即可造成机体天地人三气同步平衡失调，三道两路不通或受到损害而中毒发病。临床表现为胁下胀痛，饮食减少，或烦热口苦，嗳气，大便溏烂，小便短少，面部、下肢浮肿，神疲乏力，怕冷懒动等。治疗蛊病，以驱邪杀虫，疏通水道为原则[1]。常用药物有古羊藤、南蛇勒、地桃花、田基黄、小拦路、赤小豆、大腹皮、白花丹、鸡骨草、排钱草、车前草等[2]。三草护肝汤、鸡骨草驱蛊汤、七叶化蛊散、白花丹消蛊汤等都是壮医治疗蛊病的常用方剂。但这三个方剂的抗肝纤维化的明确疗效目前还尚未可知。

CCl4是典型的亲肝性毒物，对肾脏也具有亲嗜性效应[3,4]。CCl4是最早且最广泛用于建立肝损伤模型的一种造模方法，模型动物多采用大鼠，造模途径多样，有单纯性皮下注射、灌胃、腹腔注射及在此基础上加以不同喂饲手段的复合法，造模时间因给药途径、剂量及饲喂方法的不同而异，一般为6～16wk不等[5]。本次研究采用经皮下注射给予CCl4法造模8wk，肝损伤大鼠血清肝、肾功能ALT、AST、TBiL及γ-GT水平升高，血清肾UA水平均降低，UREA和CREA水平升高[6～8]，与文献报道相符，3种壮医方剂能不同程度地升高肝损伤大鼠血清UA水平，降低肝损伤大鼠血清ALT、AST、TBiL、γ-GT水平及UREA、CREA含量，结果提示，七叶化蛊散、白花丹消蛊汤、鸡骨草驱蛊汤能在不同程度上恢复肝损伤大鼠肝功能和肾功能水平，对慢性肝炎肝纤维化患者有较好的愈后作用。下一步我们可考虑对以上3个壮医方分别进行抗肝纤维作用量效关系考察及机制研究。

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2017年1月22日收稿

Study on effect of three Zhuang medicine prescription on serum indicators of hepatic damnification rats

Zhong-Min1Chen-Shaofeng2Zhao-Xiangpei2Su-Hua1Yu-shengming2

1. Guangxi Institute of Chinese Medicine & Pharmaceutical Science, Nanning 530022,China；2. Guangxi Institute of Nationality Medicine，Nanning 530001 China

Objective：To observe the curative effect of Zhuang medicine prescription on serum indicators of hepatic damnification rats. Methods: Rats were randomLy divided into 12 groups: normal group, model group, positive control group, QiYeHuaGu high ,middle and low dose group, BaiHuaDanXiao high ,middle and low dose group, JiGuCaoQuGu high ,middle and low dose group. All rats, except the animal of normal group, were induced by injection of 40% carbon tetrachloride hypodermically twice a week at dose of 0.6mL/100g, and at the same time animal were given rich fat and drug diet. All rats, except the animal of normal group, were treated with medicine. After 8 weeks all rats were sacrificed. The content of bood-fat , liver function and kidney function from blood were determined. Results: Comparing with model group, the content of bood-fat , liver function and kidney function from blood on Three Zhuang medicine prescription groups were better than that of model group. Conclusions: Three Zhuang medicine prescription are capable of anti- hepatic?injury action .

Zhuang medicine prescription; hepatic injury；Rats

广西科学研究与技术开发计划课题(No.桂科能14123006-6)

钟鸣(1962-)，男(壮族)，广西德保人，广西中医药研究院研究员(教授)，硕士研究生导师，主要从事民族药药理学研究，E-mail：gxmyszm@163.com。

R291.8

A

1006-6810(2017)03-0042-03