何磊+郭丽娜

【摘要】 目的：分析包头医学院第二附属医院2015年1月-2016年11月血培养中病原菌分布及其对抗菌药物的敏感情况，为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法：采用美国BD公司的BACTEC 9050全自动血培养仪，对血培养瓶进行连续培养监测，BD公司生产的Phoenix 100系统全自动微生物分析系统对血标本中分离的病原菌进行鉴定和药物敏感试验，利用WHONET 5.6软件来对药敏结果进行分析。结果：1307份血培养标本中，病原菌的分离数量共182株，阳性检出率为13.9%，其中革兰阴性菌120株，占65.9%；革兰阳性菌61株，占33.5%；真菌1株，占0.6%。对大肠埃希菌、克雷伯菌属、葡萄球菌属、肠球菌属进行药敏结果分析，葡萄球菌属对万古霉素、利奈唑胺100%敏感，大肠埃希菌以及克雷伯菌属对亚胺培南和美罗培南100%敏感，其他抗菌药物则有不同程度的耐药。结论：目前本院血培养分离出的病原菌主要以革兰阴性菌为主，菌种多样化，且呈现较高的耐药率，提示临床医生应重视血培养，以便合理应用抗菌药物。

【关键词】 血培养； 病原菌； 耐药性

Blood Culture Pathogens Distribution and Rug Resistance Analysis/HE Lei，GUO Li-na.//Medical Innovation of China，2017，14（10）：118-121

【Abstract】 Objective：To analyse the blood culture and the distribution of pathogenic bacteria to antimicrobial sensitivity in our hospital from January 2015 to November 2016，then provide the basis for clinical rational use of antimicrobial agents.Method：The blood culture bottle was given continuous training monitoring by the BACTEC 9050 automatic blood culture of BD company.The blood specimens of separation identification of pathogenic bacteria and drug sensitive test was given by BD company produces the Phoenix 100 system automatic microbial analysis system.The WHONET 5.6 software was used for analysis the drug susceptibility test results.Result：1307 blood specimens，182 strains pathogenic bacteria isolated positive rate of 13.9%，of which 120 strains of Gram-negative bacteria，accounting for 65.9%，Gram-positive bacteria were 61 strains （33.5%），and 1 strain fungi accounted for 0.6%.Analyzed the susceptibility of Escherichia coli，Klebsiella pneumoniae，Staphylococcus aureus and enterococcus，Staphylococcus was sensitive to Vancomycin and Linezolid of 100%，Escherichia coli were sensitive to Imipenem and Meropenem of 100%，other antimicrobial agents had different degrees of resistance.Conclusion：At present in our hospital blood culture pathogens isolated mainly Gram-negative bacteria， species diversity，and presents a high resistance to prompt clinical doctors should pay attention to blood culture， so that the reasonable application of antimicrobial agents.

【Key words】 Blood culture； Pathogenic bacteria； Drug resistance

First-authors address：Baotou Medical College Second Affiliated Hospital，Baotou 014030，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.10.033

敗血症，属于重度的感染性疾病，病情危急且死亡率非常高，且在医院感染中有上升趋势[1-2]。临床上，多通过血培养来对败血症进行诊断[3]，了解败血症实际的病原菌，便于临床及时作出抗感染治疗。近年来，病原菌种类发生了较大变迁，对抗菌药物的耐药率也发生了显著变化[4]。为探讨病原菌的耐药率，就本文对包头医学院第二附属医院2015年1月-2016年11月血培养病原菌分布及抗菌药物作出分析和总结，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 2015年1月-2016年11月，对本院1307份血培养标本阳性获得菌株进行分析。相同患者，若分离2次均为相同菌株，则不予二次记入。

1.2 仪器与试剂 全自动血培养仪：BACTEC9050，购自美国BD公司；微生物分析系统：Phoenix 100，购自美国BD公司；ATB FUNGUS3药敏条：购自法国生物梅里埃公司；麦康凯以及血琼脂等多种培养基，均购自郑州安图生物公司。

1.3 病原菌培养、药敏试验 把血培养瓶放在血培养仪中进行培养，仪器自动报警提示阳性，则转种在血琼脂平板中，放在35 ℃环境下进行培养，时间为24 h。若发现有菌生长，则要持续进行鉴定，选择单个菌落，采用Phoenix 100微生物分析系统，来对细菌进行鉴定和药敏，若5 d仪器没有提示阳性，需给出阴性报告。真菌药敏试验，选择ATBFUNGUS 3药敏条。所有操作严格执行标准操作规程，判断标准以CLSI2014年为准。

1.4 质量控制 质控菌株采用铜绿假单胞菌（ATCC27853）、大肠埃希菌（ATCC25922）以及金黄色葡萄球菌（ATCC29213），标准菌株均购买于卫生部检验中心。

1.5 统计学处理 WHONET 5.6软件进行耐药性分析。

2 结果

2.1 病原菌构成比 1307份血培养中，成功分离了182株病原菌，阳性检出率高达13.9%。革兰阴性菌所占比例为65.9%，革兰阳性菌所占比例为33.5%，而真菌则仅占比0.6%。分离出的病原菌大肠埃希菌占首位，其次为克雷伯菌属、金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌，分布情况见表1。

2.2 常见病原菌的耐药性分析

2.2.1 葡萄球菌属、肠球菌属对常用抗生素的耐药率 肠球菌属对红霉素、利福平以及庆大霉素等很多常用的抗菌药物均呈现较高耐药率，凝固酶阴性葡萄球菌和金黄色葡萄球菌均对青霉素100%的耐药率，对苯唑西林、克林霉素、红霉素的耐药率均大于40.0%，见表2。

2.2.2 大肠埃希菌和克雷伯菌属对常用抗生素的耐药率 大肠埃希菌以及克雷伯菌属均对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、庆大霉素、哌拉西林的有很高的耐药率，而产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分别检出为33株与8株，分别占大肠埃希菌和克雷伯菌属的47.8%（33/69）和26.7%（8/30），常表现为多重耐药，见表3。

2.2.3 真菌对常用抗生素的耐药性 1株真菌为白色念珠菌，对5-氟胞嘧啶、氟康唑、伏立康唑、两性霉素B、伊曲康唑这五种药物均敏感。

3 讨论

血流感染属于临床上常见、重度的感染性疾病，进展快、死亡率高，死亡率约为35%[5]，病原学结果直接和本病的临床诊治相关。业界有学者提出，频繁地应用抗生素，菌群很可能失调，使条件致病菌有机会繁殖而致病，同时，也可能导致严重的真菌二重感染，临床上多见于下呼吸道和血液感染[6]。本研究纳入的血培养阳性病患，大部分源于ICU、肾内科、内分泌科以及普外科等科室。这类患者，多有原发性疾病或者是侵袭性操作，导致感染的几率大大提升。通过统计本院1307份血培养标本，其阳性率高达13.9%。表1得知：阳性标本分离所得的182株病原菌中，检出的革兰阴性菌相较于革兰阳性菌明显更多，符合文献[7-9]培养分离病原菌的分布趋势中报道的结果，革兰阴性菌所占比例为65.9%，分离最多的见于大肠埃希菌，共检出菌株数69株，在病原菌中的比例高达37.9%；其中产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的检出数量共计33株，占大肠埃希菌的47.8%，基本符合文献[10]研究结果。笔者推测：广谱头孢菌素频繁应用引起产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌大量增加，革兰阴性杆菌的耐药日趋严重。革兰阳性菌所占比例为33.5%，其中凝固酶阴性葡萄球菌占首位，近年来有报道指出该类细菌特别是表皮葡萄球菌的检出率逐年升高[11]，该菌在人体皮肤表面寄生，若血培养没有规范地操作，很容易发生污染。另一方面，若机体的抵抗力明显下降，易成为条件致病菌。血培养过程中，表皮葡萄球菌究竟属于致病菌，或是污染菌，这些均需由医师根据患者的状况或者是辅助检查，作出科学地判断。除上述外，该菌还将分泌大量的多糖黏附素或者是外黏液样物质。通过不同途径，能够直接在导管表面进行吸附，形成导管相关感染。此外，由于广谱抗菌药物的广泛使用以及免疫力低下患者增多，无毒和低毒菌株引起的血流感染有所增多[12]。真菌所占比例较低为0.6%，近些年，血培养中真菌的检出率也逐年升高，应当引起临床的重视，通过减少不必要的预防性用药，降低真菌感染。

本研究得知大肠埃希菌以及克雷伯菌属，均对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、庆大霉素、哌拉西林的有很高的耐药率。超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）是肠杆菌科细菌，尤其大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，对青霉素以及头孢菌素等临床常用的β-内酰胺酶类抗生素主要的耐药机制。尚未检出对亚胺培南、美罗培南耐药的大肠埃希菌和克雷伯菌，表明碳青霉烯类抗生素还是可当作对大肠埃希菌和克雷伯菌感染进行治疗的理想用药。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌对丁胺卡那霉素、哌拉西林/他唑巴坦的耐藥率为7.1%和0，可作为经验用药。

本研究同时发现革兰阳性菌共计检出61株，对抗生素均有不同程度耐药。凝固酶阴性葡萄球菌和金黄色葡萄球菌均对青霉素100%的耐药率，对苯唑西林、克林霉素、红霉素的耐药率均大于40.0%。耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）药敏结果均应报告对青霉素、头孢菌素、β-内酰胺类包括含酶抑制剂抗生素耐药[13]，以免误导临床用药。本研究中，未检出耐利奈唑胺、奎奴普丁/达福普丁的葡萄球菌，可为葡萄球菌属发生严重血流感染的理想药物，国外有关报道曾表明万古霉素对葡萄球菌敏感性降低[14]，但本研究中未发现耐万古霉素的葡萄球菌，所以目前还是抗MRS感染的保留药物。而肠球菌属，对红霉素、利福平以及庆大霉素等很多常用的抗菌药物均呈现较高耐药率，这需要引起临床医生高度重视，应严格限制药物的适应证以延长药物的使用寿命。万古霉素、利奈唑胺对肠球菌属敏感率较高，若肠球菌导致严重血流感染时，则可作为治疗的第一选择。

真菌药敏结果显示分离出来的1株白色念珠菌，对于常用的5种抗真菌药物均较敏感。然而，临床需引起重视的一点，两性霉素B容易出现很多的不良反应，应用时尤为谨慎。通过对三唑类抗真菌药物进行研究得知，抗真菌活性较为广谱且毒性较小。其中单用氟康唑需用较大剂量进行治疗才可见效[15]，同时，耐药率也有所上升。临床上可通过二联用药降低耐药，避免死亡。

综上所述，精准的血培养和药敏试验，可作为临床诊治败血症的重要依据。需定时监测分离所得的病原菌以及耐药结果，为及早治疗血流感染提供有利的参考数据，帮助医生制定合理的治疗方案，减少不必要的抗生素使用，促进规范用药。

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