黄晓波，邵 萍，王建锋，祁春雷，朱 静，刘 露，任红岩，陈丽君，许 旺

·临床研究·

宁夏回汉族ACE基因I/D多态性与OSAHS合并高血压关联性的研究

黄晓波，邵 萍，王建锋，祁春雷，朱 静，刘 露，任红岩，陈丽君，许 旺

目的 探讨宁夏回族、汉族血管紧张素转换酶(ACE)基因I/D多态性与阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)合并高血压的关联性。方法 入选宁夏回族OSAHS患者112例、汉族OSAHS患者157例，根据是否合并高血压分为2组，即单纯OSAHS组、OSAHS合并高血压组；选同期无基础疾病的回族60例、汉族92例为健康对照组。应用聚合酶链反应(PCR)检测ACE基因I/D多态性。结果 回族、汉族间进行比较，对照组、单纯OSAHS组、OSAHS合并高血压组其Ⅱ基因型频率、I等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。回族单纯OSAHS组、OSAHS合并高血压组Ⅱ基因型频率及I等位基因频率高于回族对照组(P<0.05)；汉族单纯OSAHS组、OSAHS合并高血压组Ⅱ基因型频率及I等位基因频率高于汉族对照组(P<0.05)。回族、汉族单纯OSASH组与OSASH合并高血压组同民族间进行比较，Ⅱ基因型及I等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 ACE基因I/D多态性在宁夏回族、汉族人群间分布无显著性差异，ACE基因Ⅱ基因型及I等位基因与宁夏回族、汉族OSAHS发病及OSAHS合并高血压存在关联性。

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征；高血压； 血管紧张素转换酶； 基因； 回族； 汉族

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者夜间睡眠打鼾伴呼吸暂停，出现白天嗜睡及其他临床症状并导致多种心脑血管并发症，其中高血压与OSAHS关系尤为密切。研究报道OSAHS患者43%合并高血压，OSAHS是高血压的独立危险因素[1]；无论性别、年龄、种族情况如何，OSAHS均与高血压有相关性[2]。目前OSAHS与高血压密切相关的机制尚不明确，以上两种疾病均呈现家族聚集现象，遗传因素可能是发病的原因之一，两种疾病的易感基因可能有部分重叠；另一方面，在相同环境中生活的不同民族其疾病的患病率存在差异，例如宁夏地区鼾症及高血压患病率汉族均高于回族，提示遗传背景差异可能是导致回族、汉族以上疾病发率不同的原因[3-4]。血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性被认为与原发性高血压密切相关，另一方面ACE基因与肥胖相关从而间接参与OSAHS的发病。本研究应用聚合酶链式反应(PCR)检测ACE基因I/D多态性，探讨ACE基因I/D多态性在宁夏回族、汉族人群之间分布是否存在差异，分析ACE基因I/D多态性与OSAHS合并高血压的关联性。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选取2012年1月-2016年2月本院确诊的回族OSAHS患者112例、汉族OSAHS患者157例，根据是否患高血压病分组。回族单纯OSAHS组52例，男44例，女8例；年龄20～71岁，平均(43.1±11.1)岁；回族OSAHS合并高血压组60例，男54例，女6例；年龄27～80岁，平均(50.4±12.9)岁。汉族单纯OSAHS组72例，男66例，女6例，年龄26～65岁，平均(49.1±10.4)岁；汉族OSAHS合并高血压组85例，男79例，女6例；年龄27～69岁，平均(49.1±10.4)岁。同期体检排除基础疾病的回族60例、汉族92例为健康对照组，其中回族男52例，女8例，年龄20～76岁，平均(40.5±14.4)岁；汉族男80例，女12例，年龄20～74岁，平均(42.0±12.9)岁。研究纳入的所有回族受试对象均3代内无其他民族血缘关系，且3代内均居住于宁夏回族自治区境内。

1.2 诊断标准：OSAHS诊断标准，有典型睡眠打鼾伴呼吸暂停、日间嗜睡、Epworth嗜睡量表(ESS)≥9分等症状，存在上气道任何部位狭窄或阻塞，AHI>5次/h；日间嗜睡不明显(ESS评分<9分)者，AHI≥10 次/h或AHI≥5 次/h，且存在认知功能障碍、高血压、冠心病、脑血管疾病、糖尿病及失眠等1项或1项以上合并症[5]。高血压诊断标准：未使用降压药物的情况下，非同日3次测量血压，收缩压≥140 mmHg和(或)舒张压≥90 mmHg；或患者既往明确诊断高血压，目前正在使用降压药物，血压低于140/90 mmHg的患者[6]。

1.3 研究方法

1.3.1 多导睡眠图(PSG):受试对象均采用美国凯迪泰SM-SW2000型多导睡眠仪行夜间7 hPSG检查，系统自动分析后由睡眠专职医师进行复核。记录呼吸暂停低通气指数(AHI)、夜间最低血氧饱和度(LSaO2)、夜间平均血氧饱和度(MSaO2)等指标。

1.3.2 ACE(I/D)多态性检测:用PSG的次日晨取外周静脉血3 mL，10 000 r/min离心1 min，吸去上清液，以天根生物科技有限公司TIANamp试剂盒提取DNA。应用聚合酶链反应(PCR)方法扩增ACE基因16内含子，引物设计正向5′-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3′，反向5′-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3′。PCR反应总体积25 μl，其中预混液12.5 μl，2种引物均为1 μl，模板1 μl，无菌双蒸水9.5 μl；按94 ℃预变性4 min，94 ℃变性30 min，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，循环35次。PCR产物经凝胶电泳分离，紫外灯下鉴定基因型。基因型判读：显现490 bp 1条区带者为Ⅱ基因型；显现190 bp 1条区带者为DD基因型；490 bp和190 bp 2条区带均显现者为ID基因型，见图1(目录后)。

2 结果

2.1 回族、汉族几组研究对象一般指标及PSG指标比较：回族、汉族研究对象各组间性别构成比差异无统计学意义(χ2=0.75、2.01，P>0.05)。回族OSAHS合并高血压组年龄、收缩压高于其他2组，BMI、AHI、MSaO2、LSaO2、舒张压3组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。汉族OSAHS合并高血压组年龄、收缩压、舒张压高于对照组及单纯OSAHS组(P<0.05)；单纯OSAHS组、OSAHS合并高血压组BMI高于对照组(F=23.1，P<0.05)；AHI、MSaO2、LSaO23组间比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

2.2 回族、汉族ACE(I/D)基因检测结果：回族、汉族对照组ACE基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡，具有群体代表性(χ2=0.01、1.6，P>0.05)。回族、汉族之间进行比较，对照组、单纯OSAHS组、OSAHS合并高血压组其Ⅱ基因型频率、I等位基因频率差异均无统计学意义(χ2=0.63、1.63、0.5、0.01、0.5、0.01，P>0.05)。回族单纯OSAHS组、OSAHS合并高血压组Ⅱ基因型频率及I等位基因频率高于回族对照组(χ2=6.5、9.2，8.2、11.7，P<0.05)；汉族单纯OSAHS组、OSAHS合并高血压组Ⅱ基因型频率及I等位基因频率高于汉族对照组(χ2=6.2、11.2、6.7、15.3，P<0.05)。回族、汉族单纯OSASH组与OSASH合并高血压组同种族间比较，Ⅱ基因型及I等位基因频率差异均无统计学意义(χ2=0.2、0.5、0.2、1.4，P>0.05)，见表2。

表1 回族、汉族研究对象一般指标及PSG指标的比较±s)

表2 回族、汉族研究对象ACE基因型及等位基因频率[n(%)]

2.3 不同ACE(I/D)基因型回族、汉族OSAHS患者PSG指标比较：回族、汉族Ⅱ基因型OSAHS患者最长呼吸暂停时间较长(F=5.61、6.15，P<0.05)、LSaO2较低(F=4.64、5.75，P<0.05)，见表3。

表3 不同ACE基因型回族、汉族OSASH患者PSG指标

3 讨论

ACE是肾素-血管紧张素-醛固酮系统中的重要组成部分，血浆ACE浓度主要受到ACE基因影响，ACE基因位于17号染色体长臂2区3带，由26个外显子及25个内含子组成[7]。ACE基因第16内含子中插入或缺失一个长度为287 bp的碱基片段，从而ACE基因呈现DD、Ⅱ、ID 3种基因型，D、Ⅰ 2种等位基因，这种ACE基因存在2个以上基因型的现象被称为ACE基因I/D多态性[8]。遗传背景的不同可能导致同一地区生活的不同民族人群疾病患病率呈现差异。有研究报道，ACE基因DD基因型是宁夏回族冠心病发病的独立危险因素；脂联素基因基因+45T/G多态性与宁夏回族人群代谢综合征发病有相关性，而与汉族无相关性[9-10]。流行病学调查显示，宁夏地区汉族鼾症及高血压患病率分别为21.6%、27.6%，回族分别为17.7%、24.5%，汉族均高于回族，但本研究结果显示ACE基因I/D多态性在宁夏回族、汉族人群间分布无差异性。

有研究报道，老年高血压患者DD基因型及D等位基因频率高于对照组，DD基因型及D等位基因是高血压发病的危险因素[11]；Meta分析显示DD基因型及D等位基因个体易患原发性高血压[12]；DD基因型携带者血清ACE水平约为Ⅱ基因型的2倍，不同基因型血浆ACE水平趋势为DD>ID>Ⅱ[13]；无论性别，DD基因型血浆ACE水平均高于ID及Ⅱ基因型[14]。由此认为，ACE基因型DD基因型及D等位基因与原发性高血压存在关联性。

本研究无论回族或汉族受试对象，单纯OSAHS及OSAHS合并高血压患者Ⅱ基因型及I等位基因频率均高于同民族对照组，而单纯OSAHS组与OSAHS合并高血压组进行同民族间比较，其Ⅱ基因型及Ⅰ等位基因频率无差异，提示Ⅱ基因型及I等位基因与宁夏回族、汉族OSAHS发病及OSAHS合并高血压存在关联性。国内外研究报道，Ⅰ等位基因与Ⅱ基因型是OSAHS发病及OSAHS合并高血压的危险因素[15-17]；Meta分析显示Ⅱ基因型是亚洲人群OSAHS合并高血压的危险因素[18]，以上研究结果均与本研究一致。研究报道携带I等位基因的OSAHS患者睡眠过程中快动眼睡眠期(REM 期)比例更高，REM期睡眠中呼吸暂停持续时间长、血氧饱和度下降显著，因此I等位基因与OSAHS严重程度呈正相关性[19]。本研究OSAHS患者中，Ⅱ基因型携带者呼吸暂停持续时间更长、缺氧更严重，提示Ⅱ基因型还与OSAHS严重程度存在一定关联性。

本研究显示，ACE基因I/D多态性与原发性高血压及OSAHS合并高血压的关联性不一致，而高血压及OSAHS均是复杂疾病，多基因及基因间交互作用与以上2种疾病的发生均相关，沿用单基因遗传病的研究方法可能存在不足。此外，OSAHS可导致继发性血压增高。研究报道OSAHS患者血浆ACE、血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)浓度增高，长期无创机械通气可使OSAHS患者血压及Ang Ⅱ水平下降[20-22]。为突出OSAHS合并高血压在发病机制、临床表现、治疗等方面与原发性高血压不同之处，我国专家共识提出“阻塞性睡眠呼吸暂停相关性高血压”这一概念，从而规范OSAHS合并高血压的诊断及治疗[23]。而分析OSAHS对血压的继发作用，需根据血清ACE、Ang Ⅱ等指标，结合对OSAHS有效治疗后以上指标变化，进一步探究OSAHS与高血压相关性的机制。

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StuRelationship between angiotensin converting enzyme gene polymorphism and OSAHS accompanied hypertension in the Hui and Han nationalities in Ningxia

HUANGXiaobo,SHAOPing,WANGJianfeng,QIChunlei,ZHUJing,LIULu,RENHongyan,CHENLijun,XUWang.

DepartmentofRespiration,TheFirstPeople’sHospitalofYinchuan,Yinchuan750001,China

XUWang，Email: hotdog_20081234@126.com

Objective To[Abstract] Objective To explore the association of angiotensin converting enzyme (ACE) gene polymorphism with obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome (OSAHS) accompanied hypertension in the Hui and Han nationality in Ningxia.Methods 157 Han and 112 Hui patients with OSAHS were divided into hypertensive group and normotensive group; and 60 Hui and 92 Han healthy subjects enrolled as normal control. DNA was extracted from blood sample and amplified by polymerase chain reaction, the distribution of ACE I/D allele and gene type were compared between different nationality and different group.Results The genotype and allele had no significantly different between different nationalities in three group (P>0.05). In Hui nationality, frequency of II genotype and I allele were higher in the hypertensive OSAHS and normotensive OSASH than those in the normal controls (P<0.05);And in Han nationality , II genotype and I allele were higher in the hypertensive OSAHS and normotensive OSAHS than those in the normal controls (P<0.05). The frequency of II genotype and I allele had no significantly different between the normotensive OSAHS patients and hypertensive OSAHS in same nationality (P>0.05).Conclusion The distribution of ACE gene hasd no significantly different between Hui and Han nationalities. The I allele and II genotype arewere correlatinged with Hui and Han OSAHS and OSAHS accompanied hypertension in Ningxia.

Obstructivesleepapnea-hypopneasyndrome;Hypertension;Angiotensinconvertingenzyme;Gene;Huinationality;Hannationality

10.13621/j.1001-5949.2017.04.0326

宁夏自然科学基金资助项目(NZ1280)

宁夏银川市第一人民医院呼吸内科，宁夏 银川 750001

许旺，Email：hotdog_20081234@126.com

http://kns.cnki.net/kcms/detail/64.1008.R.20170313.0935.026.html

R544

A

2016-09-23 [责任编辑]李 洁