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花生基因的克隆、序列分析与载体构建

2017-05-02王云云孙全喜王秀贞唐月异

江苏农业科学 2017年3期

王云云++孙全喜+王秀贞++唐月异++吴琪 张青云 曹广英 祁雪 张君 王传堂

摘要:脱落酸(ABA)在植物生长发育中起着重要的作用,9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶基因(NCED)是其合成途径中的关键基因。采用逆转录PCR(RT-PCR)技术在花生种子中克隆到其同源基因[WTBX][STBX]AhNCED1,预测该基因开放阅读框为1 806 bp,编码601个氨基酸,蛋白质的分子质量为66.8 ku,等电点为8.49。通过生物信息学分析表明,该基因含有2种跨膜区,但均不明显;由17个丝氨酸、8个苏氨酸、5个酪氨酸参与磷酸化过程;同源比较发现,该基因与来自拟南芥、柱花草等的NCED具有较高的同源性,进化分析表明该基因与柱花草NCED的亲缘关系最近。笔者成功构建了该基因的亚细胞定位载体[WTBX][STBX]AhNCED1-GFP和超表达载体pCambia2300EC-[WTBX][STBX]AhNCED1,为进一步研究花生中[WTBX][STBX]AhNCED1基因的功能奠定了基础。

关键词:花生;[WTBX][STBX]AhNCED1基因;生物信息学;载体构建

中图分类号:Q782;S565.201文献标志码:A

文章编号:1002-1302(2017)03-0020-04

收稿日期:2015-12-22

基金项目:国家花生产业技术体系(编号:CARS-14);山东省农业科学院青年科研基金(编号:2016YQN17、2015YQN13);山东省农业科学院重大科技成果培育计划(编号:2014CGPY09)。

作者简介:王云云(1989—),女,内蒙古乌兰察布人,硕士研究生,主要从事花生生物技术等研究,E-mail:13001661900@163.com;共同第一作者:孙全喜(1983—),男,山东章丘人,博士,副研究员,主要从事花生遗传改良等研究,E-mail:sunqx1983@163.com。

通信作者:王传堂,博士,研究员,主要从事花生分子育种等研究,E-mail:chinapeanut@126.com;张君,博士,教授,主要从事花生生物技术等研究,E-mail:zhangjun@jlau.edu.cn。

花生栽培种(Arachis hypogaea L.),别称落花生,是我国重要的油料和经济作物,在油料生产和国际贸易中占有举足轻重的地位。……

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