王 敏，黄 翔，石 翾，刘小凤，曾检华，刘小红，陈瑶生，何祖勇

（1．中山大学生命科学学院/有害生物控制与资源利用国家重点实验室，广东 广州 510006；2．广东壹号食品股份有限公司，广东 广州 510620）

应用CRISPR/Cas9编辑广东小耳花猪MSTN基因

王 敏1，黄 翔1，石 翾1，刘小凤1，曾检华2，刘小红1，陈瑶生1，何祖勇1

（1．中山大学生命科学学院/有害生物控制与资源利用国家重点实验室，广东 广州 510006；2．广东壹号食品股份有限公司，广东 广州 510620）

MSTN基因是肌肉生长抑制基因，破坏MSTN基因的表达成为提高畜禽肌肉产量的有效途径。通过应用CRISRP/Cas9编辑技术对广东小耳花猪MSTN基因的外显子区域进行编辑，破坏MSTN基因的读码框来抑制其表达，从而提高广东小耳花猪的肌肉产量。共设计了6条靶向MSTN基因3个不同外显子的gRNA，经过T7E1酶切检测和TA克隆分析，发现其中3条gRNA能够发生有效切割，其中切割效率最高的达28.3%，最低为17.0%。gRNA1-1和gRNA3-3突变的广东小耳花猪PEF细胞系，突变效率均在50%以上，其中三号外显子上突变位点的突变率达到61.5%。试验结果为后续进行体细胞核移植，生产MSTN基因编辑的广东小耳花猪奠定了基础。

MSTN；CIRSPR/Cas9；广东小耳花猪；基因编辑

MSTN （Myostatin）基因是肌肉生成抑制基因，在机体中主要发挥肌肉生长的负调节作用。因此，破坏MSTN基因的表达成为提高畜禽肌肉产量的有效途径。MSTN基因是Mcpherron在研究转化生长因子（TGF-β）时发现的，并在随后试验中指出，MSTN在脊椎动物的骨骼肌中特异表达，MSTN基因功能的缺失能够有效增加小鼠的肌肉产量，靶向破坏MSTN基因的小鼠体重是野生小鼠体重的两倍［1］。……