刘贵旺， 徐大为， 张玮琼， 许锦煌， 郑沛中， 叶 培， 李建华， 黄建荣△

(1中山大学孙逸仙纪念医院骨科， 广东 广州 510235； 2广州医科大学生理教研室， 广东 广州 511436； 3广州市增城区人民医院骨科， 广东 广州 511300； 4佛山市南海区人民医院骨科， 广东 佛山 528200)

TRPC6在IL-1β诱导类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞增殖中的作用*

刘贵旺1， 徐大为1， 张玮琼3， 许锦煌3， 郑沛中3， 叶 培4， 李建华2△， 黄建荣1△

(1中山大学孙逸仙纪念医院骨科， 广东 广州 510235；2广州医科大学生理教研室， 广东 广州 511436；3广州市增城区人民医院骨科， 广东 广州 511300；4佛山市南海区人民医院骨科， 广东 佛山 528200)

目的： 应用RNA干扰技术研究瞬时受体电位通道6(TRPC6)对IL-1β诱导的类风湿关节炎(RA)成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)增殖的影响。方法: RT-qPCR法检测RA和骨关节炎(OA)患者滑膜组织中TRPC6 mRNA的表达水平。组织块联合酶消化法培养RA-FLS。流式细胞术鉴定RA-FLS。将不同浓度(0、0.25、0.5、1、2、4、8、16 μg/L)的重组人 IL-1β与 RA-FLS共培养36 h，CCK-8法检测细胞活力的改变；16 μg/L的IL-1β作用RA-FLS不同时间(12、24、36、48、60、72 h)，CCK-8法检测细胞活力的改变。特异性TRPC6-siRNA转染RA-FLS后，采用RT-qPCR和Western blotting 检测沉默效率。在IL-1β存在和不存在的条件下，CCK-8法、EdU标记法和流式细胞术检测TRPC6干扰组与对照组的细胞活力、EdU阳性细胞比率和(G2/M+S)期比率的差异。结果: RA患者滑膜组织中TRPC6的mRNA表达水平相对于OA患者明显增加(P<0.05)。TRPC6-siRNA能显著降低RA-FLS中TRPC6 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。IL-1β能诱导RA-FLS增殖(P<0.05)。沉默TRPC6后，在IL-1β的诱导环境下，特异性干扰组RA-FLS 的活力、EdU阳性细胞比率和(G2/M+S)期比率与空白组和对照组相比均明显降低(P<0.05)，而在不含IL-1β的条件下，干扰组与空白组和对照组相比差异均无统计学显著性。结论: TRPC6参与IL-1β诱导的RA-FLS增殖过程，沉默TRPC6能降低IL-1β诱导的RA-FLS增殖水平。

瞬时受体电位通道6； 类风湿关节炎； 滑膜细胞； 细胞增殖

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种以慢性多关节滑膜炎、骨及软骨破坏为主要特征的全身性自身免疫性疾病[1]。比较公认的基本病理机制为滑膜细胞的激活，分泌大量炎症因子、趋化因子，导致炎症细胞激活并募集于滑膜衬下间质。……