叶翠萍++王文倩++赵明明++曾勇 古锐

【摘要】目的：研究藏藥渣驯及其不同萃取部位的抗胃溃疡、抗肝损伤作用，初步探讨其药效物质基础。方法：采用消炎痛致小鼠胃溃疡模型考察渣驯及其不同萃取部位的抗胃溃疡作用；采用刀豆蛋白A（ConA）致小鼠肝损伤模型考察渣驯及其不同萃取部位抗肝损伤作用。结果： 渣驯及其水萃取部位、正丁醇部位能明显降低消炎痛所致胃溃疡小鼠的溃疡指数（P<005），能够明显降低ConA所致的肝损伤小鼠的肝脏指数（P<005），显著降低血清中ALT、AST含量（P<001）。结论： 藏药渣驯及其水萃取部位、正丁醇部位可能为渣驯治疗胃溃疡和肝损伤的有效物质基础，其作用机制有待进一步研究。

【关键词】渣驯； 萃取部位； 消炎痛； 胃溃疡； 刀豆蛋白A； 肝损伤

【中图分类号】R2855【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）07-0039-03

Comparative Study ofAntiulcerogenic and Anti-liver Injury Effects of Different Fraction from Tibetan Medicine Brag-zhun

YE CuipingWANG WenqianZHAO MingmingZENG Yong*GU Rui

Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 611137，China

Abstract：Objective To investigate the protective effectof different fraction from Tibetan medicine Brag-zhun on ulcerogenic andliver injury，primary discussion for the efficacy material base.Methods The gastric ulcer model induced by indomethacin was adopted in the research of antiulcerogenic effect，and the liver injury modelinduced by Concanavalin A was observed in the study of anti-liver injuryeffect. Results Brag-zhun and its water extraction parts， n-butyl alcohol parts can obviously reduce the ulcer index of indomethacin-induced gastric ulcer in mice （P<005）， can significantly reduce liver index of Con A-induced liver injury in mice（P<005）， significantly lower serum ALT， AST levels （P<001）.Conclusion Tibetan brag-zhunand its water extraction parts， n-butyl alcohol parts maybe the efficacy material base for the treatment of the gastric ulcer and the liver injury ， its mechanism needs further research.

Keywords：Brag-zhun； Fraction；Indomethacin；Ulcerogenic；Concanavalin A； Liver Injury

藏药渣驯，因产地和各地语言不同，名称各异，目前在国际上尚无统一的名称。英文文献中多以mumie，shilajit等名出现，在哈萨克族传统医学中名为“塔斯马依”[1]，国内主要分布在新疆阿尔泰山、天山及西藏地区。药理研究表明，渣驯具有抗炎、抗溃疡、抗氧化应激、抗菌、抗焦虑、抗过敏、免疫调节、促进组织再生等药理作用[1]，此药应用广泛，疗效确切。GOEL RK[2]及Ghosal S[3]报道，渣驯能够增加碳水化合物与蛋白质之比而降低胃溃疡指数，通过增加黏液屏障发挥抗胃溃疡作用。VaishwanarI等[4]发现渣驯能够促进四氯化碳所致肝损伤动物肝组织的再生。但国内对该药的研究及报道甚少，课题组前期研究结果表明藏药渣驯对小鼠无水乙醇型胃溃疡有较好的治疗作用[5]。藏药渣驯具有明确的抗胃溃疡、抗肝损伤作用，但发挥该药理作用的药效物质基础尚不明确，本研究拟对这一问题进行探讨。

1仪器与材料

11仪器T500型电子天平（常熟市双杰测试仪器厂）；FA1104分析电子天平（上海良平仪器仪表有限公司）；沪制02050123游标卡尺（无锡锡工量具有限公司）；VARIOSKAN FLASH 243全波长多功能读数仪（美国Thermo公司）。

12材料渣驯药材购自四川省阿坝州马尔康县，经成都中医药大学降拥四郎主任藏医师鉴定为正品。盐酸雷尼替丁胶囊（批号：141003，北大医药股份有限公司）；吲哚美辛肠溶片（批号：141102，山西太原药业有限公司）；刀豆蛋白A（Con A，批号：SLBJ7401V，美国sigma公司）；联苯双酯滴丸（批号：A02150303，万邦德制药集团股份有限公司）；丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂盒（批号：20160419）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒（批号：20160422）购于南京建成生物工程研究所。

13动物昆明种小鼠，SPF级，体重18～22g，由成都达硕生物科技有限公司提供，合格证号：SCXK（川）2008-24。6～8周龄雄性Balb/C小鼠，SPF级，体重18～22g，由成都达硕实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK（川）2015-030。

2方法

21渣馴及其不同萃取部位的制备按照《藏药炮制规范2008年版》制备渣驯膏[6]，取适量正品渣驯样品用100℃开水浸泡并过滤3次，收集滤液后用16层纱布滤过。将得到的滤液浓缩至浓稠状态，后将浓稠液在水浴锅中挥至流膏状为渣驯膏。取适量渣驯膏水溶解液用正丁醇在5000mL分液漏斗中进行萃取分离。多次萃取直到萃取层呈无色状，得渣驯正丁醇部位及水萃取部位。

22渣驯及其不同萃取部位对消炎痛致小鼠胃溃疡的保护作用昆明种小鼠56只，雌雄各半，预先置于动物房中饲养3d适应环境，按体重分层随机分为7组，即正常对照组，模型组、阳性组、正品渣驯组、渣驯水萃取部位组、渣驯正丁醇部位组、渣驯代用品组，每组8只。各组动物以20mL/kg（以体重计）连续灌胃给药7d，1次/d，空白对照组及模型组给予同体积的蒸馏水，阳性组给予40mg/kg雷尼替丁[7]，其余各给药组给药剂量折合成渣驯生药量为333mg/kg，相当于临床给药量的10倍。于末次给药1h后，腹腔注射消炎痛40mg/kg[8]，给药体积为10mL/kg进行造模，造模前，禁食不禁水24h。造模后6h，打开腹腔，结扎幽门和贲门，摘取全胃，胃内注射10%甲醛固定液1mL，并置于10%的甲醛固定液中，固定10min后，沿胃大弯剪开全胃，计算溃疡指数及抑制率。

23渣驯及其不同萃取部位对Con-A致小鼠肝损伤的保护作用将56只Balb/C小鼠随机分成7组，分组及给药（除阳性组灌胃给予200mg/kg联苯双酯[9-11]）同22。末次给药后1h，除空白对照组，其余各组尾静脉注射Con A 20mg/kg[9-11]，给药体积为10mL/kg进行造模，

禁食不禁水8h后，称量小鼠体重；眼球取血，分离血清，酶标仪法测定血清中ALT、AST含量。取血后所有动物脱臼处死，摘取肝脏并用冰生理盐水漂洗除去积血，表面拭干后称重，计算肝脏指数。

24指标检测及计算方法

241溃疡指数及溃疡抑制率计算方法将固定后的胃放于10倍放大镜下计数溃疡点数，并计算溃疡指数[5]：溃疡点或面1mm以下者，计1分；1～2mm者，计2分；2～3mm者计3分；3～4mm者，计4分；大于4mm者，计5分；若病灶内径>2mm者计分加倍，将计分相加即为该动物的溃疡指数。并计算溃疡抑制率：溃疡抑制率（%）=（模型对照组溃疡指数-给药组溃疡指数）/模型对照组溃疡指数×100%。

242血清中ALT、AST检测方法准确称取小鼠肝脏组织01g，按重量（g）∶[KG-*3/5]体积（mL）=1∶9的比例加入09mL的生理盐水，冰水浴下匀浆，2500r/min，离心10min，取上清液待测；96孔板预设的对照孔中加入已预温的（ALT/AST）基质液002mL，测定孔中加入基质液002mL和0005mL待测样本，反复吸打混匀后，37℃水浴30min后，分别加入2，4-二硝基苯肼液002mL，对照孔中加入待测样本0005mL，37℃水浴20min后分别加入04mol/L氢氧化钠液02mL，轻轻水平摇动96孔板混匀，室温放置15min，波长510nm，酶标仪测定各孔OD值，计算绝对OD值（绝对OD值=测定孔OD值-对照孔OD值），查标准曲线，求得相应的ALT/AST含量。

243肝脏指数计算方法肝脏指数（%）=肝脏全重（g）/动物体重（g）×100%。

25统计学处理采用SPSS 170统计软件，采用单因素方差分析方法和非参数两个独立样本t检验方法进行分析，P<005表示差异有统计学意义。

3结果

31渣驯及其不同萃取部位对消炎痛致小鼠胃溃疡的影响与空白对照组比较，模型组小鼠溃疡指数显著升高（P<001），说明小鼠胃溃疡模型制备成功。与模型组比较，正品渣驯、渣驯水萃取部位及渣驯正丁醇部位能明显降低小鼠胃溃疡指数（P<005），且组间无统计学差异（P>005）。

4讨论

传统藏药渣驯（Brag-zhun）味甘、苦，性凉，功能清热。主要用于肝、肾、胃、小肠等热性疾病，木布病，虚弱劳损，痛风等。藏医典籍《月王药诊》中记载，“渣驯能干枯脓血，主治肝病，清诸热，诱发寒症”[12]。《论说续》中亦记载“渣驯能治疗一切热证，特别是清胃热、清肝热、清肾热等，疗效显著”[13]。藏医胃溃疡和肝损伤均属于藏医学中培根木布病的范畴[14-15]，而“木布病”是隆、赤巴、培根以及血液、黄水疾病混合在一起的综合性疾病，其发病的病因及病程复杂，治疗难度大，是藏区的一种常见病、多发病、慢性病。渣驯对胃溃疡[16]和肝损伤具有明确的治疗作用。本研究中，采用消炎痛致小鼠胃溃疡模型和刀豆蛋白A（ConA）致小鼠免疫性肝损伤模型考察渣驯及其不同萃取部位的抗胃溃疡、抗肝损伤作用，结果表明：渣驯及其水萃取部位、正丁醇部位能明显降低胃溃疡小鼠的溃疡指数（P<005），能够显著降低肝损伤小鼠血清中ALT、AST含量（P<001），明显降低肝损伤小鼠的肝脏指数（P<005），提示藏药渣驯及其水萃取部位、正丁醇部位可能为渣驯治疗胃溃疡和肝损伤的有效物质基础，其作用机制及具体的有效成分有待进一步研究，以期开发出更有效的抗胃溃疡、抗肝损伤的药物制剂。

参考文献

[1]木拉提·克扎衣别克.塔斯马依的研究进展[J].中国中药杂志， 2013，38（3）：443-448.

[2]Goel RK， Banerjee RS， Acharya SB. Antiulcerogenicandantiinflammatory studies with shilajit[J]. Journal of Ethnopharmacology， 1990， 29（1）：95-103.

[3]Ghosal S， Singh SK， Kumar Y， et al. Anti-ulcerogenic activity of fulvic acids and 4′-methoxy-6-carbomethoxybiphenyl isolated from shilajit[J]. Phytother Res， 1988， 2（4）：187.

[4]VaishwanarI， KowaleCN， Jiddewar GG. Effect of two Ayurvedic drugs shilajeet & eclinol on changes in liver & serum lipids produced by carbon tetrachloride[J]. Indian Journal of Experimental Biology， 1976， 14（1）：57.

[5]韦婷，曾勇，钟世红，等. 藏药渣驯对小鼠无水乙醇型胃溃疡的实验研究[J]. 中药与临床，2013，4（6）：32-33.

[6]洛桑多吉. 藏药炮制规范（2008年版）[M].西藏：西藏人民出版社， 2008：114-115.

[7]王丽娟，彭勍，王勇，等.独一味对实验性小鼠胃溃疡的影响[J].时珍国医国药， 2009，20（5）：1189-1190.

[8]王昌成.消炎痛和阿斯匹林对C57BL/6和Balb/c小鼠胃酸分泌的效应[J].世界华人消化杂志， 2005，13（14）：1717-1720.

[9]樊利娜. 藏药波棱瓜子总木脂素部位对实验性肝损伤保护作用及其机制探讨[D]. 成都：西南民族大学， 2014.

[10]张云城. 海珠益肝加味方对免疫性肝损伤小鼠的保护作用及其免疫调节机制的研究[D].武汉：湖北中医药大学， 2013.

[11]李常青，刘丽丽，莫传伟，等.苦参碱对刀豆蛋白A致小鼠肝损傷的保护作用[J].中药新药与临床药理， 2005，16（3）： 175-177.

[12]马世林，王振华，毛继祖.月王药诊（汉译版）[M]. 兰州：甘肃民族出版社， 1993：252-273.

[13]宇妥·元丹贡布. 四部医典（藏文版）[M].西藏：西藏人民出版社， 1982：66-75.

[14] 久西杰.论藏医木布病的分型与诊治[J].中国民族医药杂志， 2012， 18（6） ：26-27.

[15] 西珠嘉措. 略论藏医对肝和肝病的认识[J]. 中国藏学，2010（4）：155-158.

[16] 胡婷婷，代良萍，彭成，等.藏族药治疗消化性溃疡的研究进展[J].中国实验方剂学志， 2016，22（10）：204-208.

（收稿日期：2017-02-13编辑：程鹏飞）