卢文丽 宋秋佳 潘志强 方肇勤

上海中医药大学基础医学院 (上海, 201203)

原发性肝癌(PLC)是我国难治性恶性肿瘤之一，病死率高，肿瘤引发的侵袭、转移和术后复发是致死的主要原因[1]。在针对PLC的多种治疗方法中，基于辨证论治理论的中医药疗法，如健脾益气、行气活血、清热解毒等治则治法及方药，在预防和降低肝癌复发转移率等方面具有一定的优势[2～6]。我们前期研究发现：行气活血中药预知子(又名八月札)具有抑制肝癌细胞增殖作用，且影响到HepG2肝癌细胞众多基因，如整合素介导的细胞黏附通路基因表达。因此，我们拟进一步获得预知子籽乙醇提取物(ATKS)，设置不同的浓度和时间节点干预HepG2肝癌细胞，以观察对其增殖和形态的影响；同时筛选该通路上的高表达基因SEPP1及其上游基因CAPNS1、ITGA2、ITGAV、ITGB1和ITGB5，观察药物作用后mRNA表达变化，以及SEPP1蛋白表达变化。

1 材料与方法

1.1 细胞株 HepG2人肝癌细胞株购自中国科学院上海细胞所。细胞置于含10% 胎牛血清、100U/ml 青霉素和100 μg/ml 链霉素的RPMI 1640 培养液中，在37℃、5% CO2充分湿度的培养箱中培养，3～4 d 传代一次，取对数生长期的细胞用于实验。

1.2 药物与试剂 预知子购自上海康桥中药饮片有限公司。RPMI 1640培养液、胎牛血清、青霉素-链霉素(100×)、0.25%胰酶-EDTA和Pierce BCA蛋白浓度测定试剂盒均购自Thermo Fisher Scientific公司；四甲基偶氮哇蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)均购自Sigma公司；Trizol购自Invitrogen 公司。鼠抗人SEPP1单克隆抗体购自Abcam公司，兔抗人GAPDH单克隆抗体购自上海碧云天生物技术有限公司；辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(H+L)、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG(H+L)、RIPA裂解液、PMSF蛋白酶抑制剂、BeyoECL Plus(超敏ECL化学发光试剂盒)等均购自上海碧云天生物技术有限公司。……