谭炜 朱锦德 郭敬强 李卓锴 姜川

浙江省丽水市中心医院肝胆胰外科 (浙江 丽水, 323000)

原发性肝癌是临床上最常见的消化系统恶性肿瘤，其发病率和死亡率有逐年升高的趋势[1,2]。原发性肝癌起病隐匿、早期症状不明显，不易于临床诊断；同时肝癌的进展迅速，给临床诊断和治疗带来较大的难度，不利于患者的预后[3,4]。动脉化疗栓塞术是临床治疗肝癌的常用方法，对原发性肝癌患者的临床治疗具有较好的疗效。高强度聚焦超声治疗也是临床上治疗恶性肿瘤的常用手段。ERK信号转导通路是细胞外信号向细胞内转导的重要通路，也是肝癌等恶性肿瘤发生、发展、转移及凋亡过程的重要调控通路[5,6]。本研究对经动脉化疗栓塞联合高强度聚焦超声治疗高龄原发性肝癌患者的临床效果进行研究，为临床治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 200例患者为本院2012年1月至2016年12月期间诊治的高龄原发性肝癌患者，均符合卫生部颁布的《原发性肝癌诊疗规范》(2011年版)中原发性肝癌的诊断标准。200例患者中男111例，女89例，年龄63～75岁，平均(68.5±7.5)岁。以本院同期200例健康体检者为对照组。排除标准：肝癌介入治疗禁忌患者；原发性肝癌终末期患者；已行外科切除术者；严重的心肾功能异常者。两组患者在一般临床资料方面比较差异无统计学意义。所有患者均知情并签署知情同意书，研究经院伦理委员会批准。

1.2 分组与治疗方法 200例高龄原发性肝癌患者分为两组：A组(100例)采用动脉化疗栓塞术治疗，B组(100例)采用动脉化疗栓塞联合高强度聚焦超声治疗。

1.3 观察指标 观察两组患者治疗前及治疗不同时间段(6个月、12个月、24个月)的Child-Pugh评分与生存率。评分标准为：肝脏功能损害程度轻，肝储备能力较好：5～6分；肝脏功能损害程度较重，肝储备能力一般：7～9分；肝脏储备能力较差：≥10分。并分析患者治疗前后血清中ERK通路蛋白表达变化及炎症因子水平变化。

1.4 试验试剂 P53检测试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司；Caspase6、Caspase9检测试剂盒购自Abcam公司；Laminin5γ2、E-cadherin检测试剂盒购自R&D公司；β-catenin检测试剂盒购自Sigma公司；Ras、Raf蛋白检测试剂盒购自Omega公司；MEK及ERK1/2蛋白检测试剂盒购自Lab Sciences公司；HIFα和COX2蛋白检测试剂盒购自Amresco公司；基质金属蛋白酶MMP2及MMP9蛋白检测试剂盒购自天根生物工程有限公司；TIMP1及TIMP2蛋白检测试剂盒购自碧云天生物工程有限公司；C-myc检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所。所有操作均按照试剂盒说明书进行。

2 结果

2.1 两组患者治疗前后Child-Pugh评分及生存率情况 见表1。

表1 两组患者治疗前后Child-Pugh评分及生存率情况

与A组同时间点比较，#P<0.05

2.2 两组患者治疗前后细胞凋亡相关蛋白表达情况 见表2。

表2 两组患者治疗前后细胞凋亡相关蛋白表达比较

与本组治疗前比较，*P<0.05；与A组治疗前后比较，#P<0.05

2.3 两组患者治疗前后Laminin5γ2、E-cadherin及β-catenin蛋白表达情况 见表3。

表3 两组患者治疗前后Laminin5γ2、E-cadherin及β-catenin蛋白表达比较

与本组治疗前比较，*P<0.05;与A组治疗前后比较，#P<0.05

2.4 两组患者治疗前后Ras及Raf蛋白表达情况 见表4。

表4 两组患者治疗前后Ras及Raf蛋白表达比较

与治疗前比较，*P<0.05;与A组治疗后比较，#P<0.05

2.5 两组患者治疗前后MEK及ERK1/2蛋白表达情况 见表5。

表5 两组患者治疗前后MEK及ERK1/2蛋白表达比较

与本组治疗前比较，*P<0.05

2.6 两组患者治疗前后基质金属蛋白酶及其抑制剂表达情况 见表6。

表6 两组患者治疗前后基质金属蛋白酶及其抑制剂表达情况

与本组治疗前比较，*P<0.05;与A组治疗后比较，#P<0.05

3 讨论

原发性肝癌是临床上消化道系统中的常见恶性肿瘤，且随着人口老龄化的加剧及饮食习惯的改变，其发病率和死亡率有逐年升高的趋势。经动脉化疗栓塞术是临床上治疗原发性肝癌的首选措施，且已经显示了较好的优越性。本研究在对经动脉化疗栓塞联合高强度聚焦超声治疗高龄原发性肝癌的临床效果进行研究时发现，与动脉栓塞治疗组患者相比，经动脉化疗栓塞联合高强度聚焦超声治疗高龄原发性肝癌患者后Child-Puge评分明显降低，且生存率明显高于动脉栓塞治疗组患者(P<0.05)；治疗后患者血清中促凋亡蛋白P53、Caspase6、Caspase9、Laminin5γ2、E-cadherin、β-catenin、ERK通路蛋白、HIFα和COX2及基质金属蛋白酶表达明显升高，而C-myc表达明显降低。因此，经动脉化疗栓塞联合高强度聚焦超声治疗高龄原发性肝癌的效果与其抑制患者体内激活的ERK通路有关。

MAPK/ERK信号转导通路参与了细胞外信号向细胞核转导的过程，也是恶性肿瘤发生、发展及转移的主要途径[7，8]。但是目前尚未见到关于该信号通路在动脉栓塞联合高强度聚焦超声治疗高龄原发性肝癌的报道。在分析RNAi介导的IGF1R基因沉默对肝癌细胞生长、迁移与侵袭影响的研究中发现,ERK信号转导通路蛋白表达的被抑制是该手段影响肝癌细胞病理过程的关键[9]。在地西他滨联合丙戊酸钠促进肝癌细胞凋亡的研究中也证实二者能够通过抑制ERK通路蛋白Ras、Raf及MEK和ERK1/2蛋白的表达发挥促肝癌细胞凋亡的作用[10]。以往的研究也发现，Ras癌基因能够诱导肝肿瘤的发生，且此过程中有活性氧的参与[11]，而上皮细胞转化序列2能够通过调控细胞内Rho/ERK信号转导通路促使肝癌早期复发[12]。同时，As2O3联合AZT对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭调节作用也与其抑制细胞内MAPK/ERK通路蛋白有关[13]，且mTOR与ERK是Hep3B细胞cyclin D1表达的协同调控分子[14]。本研究也发现，与A组相比，B组患者MEK及ERK1/2蛋白表达明显降低，提示激活的ERK通路也与原发性肝癌的发病相关，而B组患者的效果与抑制该通路相关蛋白的过表达相关。

炎症因子是细胞内最常见的细胞因子，也是肿瘤细胞多种生理和病理学过程的共同通路，且已有的证据显示颈动脉栓塞治疗与调节体内炎症因子水平有关[15]。在研究肝动脉化疗栓塞术联合射频消融术治疗原发性肝癌的疗效时发现栓塞治疗的效果与其调控患者血清中炎症反应因子水平有关[16]，且肝动脉化疗栓塞术治疗肝癌的疗效也主要通过影响血清中炎症反应因子的水平实现[17]。另外，在分析高强度聚焦超声治疗小鼠皮下瘤效果时发现高强度聚焦超声的治疗效果与其调控血清白细胞介素IL-6和IL-10的表达有关[18]，而益脾养肝方联合肝动脉化疗栓塞术治疗原发性肝癌的疗效也主要通过影响患者体内炎症因子水平实现[19]。本研究发现与A组患者相比，B组患者Laminin5γ2、E-cadherin及β-catenin蛋白表达明显升高，表明动脉化疗栓塞联合高强度聚焦超声治疗高龄原发性肝癌患者的效果也与其调控患者体内炎症因子水平相关。

因此，经动脉化疗栓塞术联合高强度聚焦超声治疗高龄原发性肝癌患者的效果可能与其抑制患者体内激活的ERK通路有关。

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