李小杰，李淑君，李成军，陈玉国，王海涛，邱 睿，胡亚静

(河南省农业科学院 烟草研究所，河南 许昌 461000)

烟草青枯菌Tn5突变体库的构建及突变位点分析

李小杰，李淑君*，李成军，陈玉国，王海涛，邱 睿，胡亚静

(河南省农业科学院 烟草研究所，河南 许昌 461000)

为了从烟草青枯菌全基因组范围内发掘致病性相关基因，采用电转化法构建了一个Ez-Tn5转座子介导的烟草青枯菌TXLLJ14-3菌株插入突变体库，该突变体库包含1.2万个突变子，经烟草上的致病性检测，共得到216个无致病力或弱致病力突变菌株。利用TAIL-PCR扩增获得其中15个无致病力烟草青枯菌的Tn5侧翼序列，并对其插入位点进行了分析，结果表明，15个突变菌株的插入位点分别位于核苷酸水解酶、糖基转移酶、转座酶和合成酶等具有不同功能的基因上，这些基因受到干扰或破坏后，可能会抑制致病相关物质的表达或分泌，或者诱导烟草对病原菌产生抗性，从而表现出无致病力特征。

烟草青枯菌； Tn5插入突变； 无致病力菌株； TAIL-PCR； 突变位点

青枯雷尔氏菌(Ralstoniasolanacearum)引起的烟草青枯病是危害世界烟草生产的主要根茎部细菌性病害，目前在河南省信阳、驻马店等夏季高温多雨地区已有发生，其中信阳罗山县，驻马店确山县、遂平县和泌阳县烟区的个别地块烟株发病率较高，达到80%左右，严重的地块出现大面积死亡[1]。青枯雷尔氏菌侵染寄主范围广，可对多种经济作物的生产造成严重危害，且具有明显的生理分化现象和菌系多样性[2-3]。

青枯雷尔氏菌基因组大小约为5.8 Mb，具有很高的G+C含量和约5 120个可能的编码基因。……