王强，马玲，陶洁，韩志刚

(新疆医科大学附属肿瘤医院，乌鲁木齐830011)

·临床研究·

恩度联合化疗对晚期非小细胞肺癌患者血清EPO、EPO-R mRNA水平的影响

王强，马玲，陶洁，韩志刚

(新疆医科大学附属肿瘤医院，乌鲁木齐830011)

目的 观察恩度联合化疗对晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清促红细胞生成素(EPO)、促红细胞生成素受体(EPO-R)mRNA水平的影响。方法 选择22例晚期NSCLC患者，在顺铂联合三代化疗药物的基础上加用恩度，共治疗2周期。采用RT-PCR法检测治疗前后血清EPO、EPO-R mRNA水平，采用RECIST1.0评价标准评价临床疗效，分析EPO、EPO-R mRNA水平与疗效的关系。结果 治疗后患者血清EPO、EPO-R mRNA水平均降低，与治疗前比较P均<0.05。治疗后有效9例，无效13例。有效患者血清EPO、EPO-R mRNA水平较治疗前降低(P均<0.05)，无效患者治疗前后无明显变化(P均>0.05)。结论 恩度联合化疗可降低晚期NSCLC患者血清EPO、EPO-R mRNA水平，EPO、EPO-R mRNA水平变化对疗效评价有参考意义。

非小细胞肺癌；促红细胞生成素；促红细胞生成素受体；重组人血管内皮抑制素；药物疗法

恩度(重组人血管内皮抑制素)为血管抑制素类新生物制品，具有多靶点发挥抗肿瘤血管生成的作用。其作用机制是通过抑制形成血管的内皮细胞迁移而抑制肿瘤新生血管的生成，阻断肿瘤的营养供给，从而抑制肿瘤增殖或转移。促红细胞生成素(EPO)是细胞因子超家族成员，与促红细胞生成素受体(EPO-R)结合，在红细胞的生成过程中发挥主要调节作用。研究表明，EPO与EPO-R在人类肿瘤细胞中的表达具有重要作用，可以调节肿瘤细胞的生长发育，引起恶性肿瘤新生血管的生长，与肿瘤的复发、转移及预后密切相关[1]。目前，恩度联合化疗已广泛用于NSCLC的临床治疗。肿瘤患者使用恩度治疗后，血液中血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平下降[2]。本研究通过观察NSCLC患者采取恩度联合化疗治疗前后血清EPO、EPO-R mRNA的变化，探讨血清EPO、EPO-R mRNA水平与疗效的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择我院2015年1月～2016年1月收治的初诊NSCLC患者22例，男15例、女7例，年龄30～77岁、中位年龄64岁。均经病理检查确诊，鳞癌6例、腺癌16例，ⅢB期8例、Ⅳ期14例，ECOG评分0～1分。患者均经CT或PET-CT证实有可测量的肿瘤病灶，均按计划连续完成2个周期化疗，血常规、肝肾功能及心电图无明显异常，排除其他恶性肿瘤病史。患者均签署知情同意书。

1.2 治疗方法 在顺铂联合三代化疗药物的基础上加用恩度，共治疗2个周期。其中6例给予GP方案联合恩度注射液，16例给予PP方案联合恩度注射液。GP方案：吉西他滨1 000 mg/m2静滴第1、8天，顺铂75 mg/m2静滴1 d或总量分2～3 d注射，21 d为1个周期。PP方案：培美曲塞500 mg/m2静滴第1天，顺铂75 mg/m2静滴1 d或总量分2～3 d注射，21 d为1个周期。恩度注射液于治疗周期的第1天开始使用300 mL推注泵持续泵入，连用10 d。

1.3 疗效评价标准 采用WHO实体肿瘤疗效评价(RECIST1.0)标准，病灶消失且持续4周为完全缓解(CR)；肿瘤最大长径之和减少≥30%，并保持4周以上为部分缓解(PR)；出现新病灶或基线病灶长径之和增加≥20%为疾病进展(PD)；病灶增加未达到PD或缩小未达到PR为病灶稳定(SD)。化疗敏感为CR+PR，非敏感为SD+PD。以CR+PR计算有效率，CR+PR+SD计算疾病控制率。

1.4 血清EPO、EPO-R mRNA检测 采用RT-PCR法。于首次化疗前7 d内及化疗2个周期后，采集患者清晨空腹外周静脉血3～5 mL，EDTA抗凝，离心分离血清，-80 ℃保存。使用TRIzol试剂盒抽提RNA，逆转录合成cDNA，进行PCR扩增。GAPDH引物序列：上游5′-TGGGTGTGAACCATGAGAAGT-3′，下游5′-TGAGTCCTTCCACGATACCAA-3′；EPO基因引物序列：上游5′-CCTGTTGGTCAACTCTTCCC-3′，下游5′-CAGAGCCCGAAGCAGAGT-3′；EPO-R基因引物序列：上游5′-TTGTGGTATCTGACTCTGGCA-3′，下游5′-GCTGGGATAAGGCTGTTCTC-3′。扩增条件：94 ℃ 10 min；94 ℃ 20 s，55 ℃ 20 s，72 ℃ 20 s，共40个循环。以目的基因与内参基因GAPDH的比值表示目的基因的相对表达量，采用2-ΔΔCt法分析各组目的基因的表达差异。

2 结果

2.1 治疗前后血清EPO、EPO-R mRNA水平比较 治疗前后患者的血清EPO mRNA水平分别为0.88±0.09、0.81±0.13；EPO-R mRNA水平分别为0.91±0.09、0.84±0.07。治疗前血清EPO、EPO-R mRNA水平均高于治疗后(P均<0.05)。

2.2 血清EPO、EPO-R mRNA水平与疗效的关系 治疗后CR 1例，PR 8例，SD 8例，PD 5例，有效率为40.9%，疾病控制率为77.3%。有效患者治疗前后血清EPO mRNA的水平分别为0.90±0.09、0.79±0.05，EPO-R mRNA水平分别为0.97±0.09、0.80±0.09，治疗后均较治疗前降低(P均<0.05)。无效患者治疗前后血清EPO mRNA水平分别为0.86±0.10、0.82±0.07，EPO-R mRNA水平分别为0.86±0.06、0.87±0.04，治疗前后比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。

3 讨论

近年来，靶向治疗因其可靠的疗效及较轻的不良反应，已成为NSCLC最受关注和最有前途的治疗手段之一。但适用于靶向治疗的患者有限，而且靶向治疗患者多数会出现耐药现象，因此需要在合适的时机引入化疗。然而化疗的疗效已达到平台期，因此需要寻找新的治疗方法进一步提高疗效。研究显示，在晚期恶性肿瘤临床试验中，抗血管生成药物如贝伐单抗、恩度、沙利度胺等对肿瘤周围新生血管有明显的抑制作用，与其他化疗药物联合具有协同效应[3]。恩度具有广谱抗血管生成活性，已成为SFDA批准使用的新型血管内皮抑制剂。研究显示，恩度联合标准化疗方案可提高晚期NSCLC患者化疗的有效率和临床收益率，改善局部晚期和晚期NSCLC患者的中位生存时间和总生存率，且不增加化疗的严重不良反应[4～7]。有研究[8，9]报道，恩度联合长春瑞滨与顺铂具有协同作用，能明显提高晚期NSCLC的生存率，延长中位肿瘤进展时间，且安全性高。本研究采用恩度联合标准化疗方案治疗晚期NSCLC患者的总有效率为40.9%，疾病控制率为77.3%，高于采用传统化疗方案治疗晚期NSCLC的有效率及疾病控制率[10，11]。

肿瘤的生长转移依赖于血管生成，血管生成促进因子和血管生成抑制因子在肿瘤新生血管的生成过程中起重要的调节作用。VEGF是最重要的血管生成促进因子，NSCLC肿瘤组织中的VEGF mRNA表达显著高于正常肺组织，其表达与患者预后具有显著相关性[12]。EPO属于内源性血管生成因子，参与多种人类恶性肿瘤的发生发展[2]。EPO与其特异性受体EPOR结合后，细胞内生物学效应的产生通过多个信号途径，包括细胞增殖、凋亡和对放化疗的敏感性，促使与其相连的激酶激活。我们的前期研究显示，EPO、EPO-R mRNA表达在NSCLC组织中明显高于癌旁组织及肺良性病变组织，提示EPO、EPO-R mRNA参与了NSCLC的发生。EPO、EPO-R mRNA可能通过调控血管生成，参与了肿瘤血管的形成。本研究结果显示，晚期NSCLC患者在使用标准化疗方案基础上，联合恩度治疗后，血清EPO、EPO-R mRNA水平降低。分析其机制可能为：恩度是血管生成抑制剂，它作用于微血管的内皮细胞，抑制其迁移，诱导其凋亡，从而抑制血管生成和肿瘤生长。有研究发现，恩度可直接下调VEGF mRNA表达，阻断VEGF受体的信号转导，阻止VEGF与内皮细胞结合,从而抑制VEGF介导的内皮细胞迁移和血管生成[13]。

本研究还显示，临床疗效达到有效的患者，治疗后血清EPO、EPO-R mRNA水平较治疗前降低，而无效患者治疗前后无明显变化。提示血清EPO、EPO-R mRNA水平可能与临床疗效有关，临床治疗有效的患者，体内肿瘤负荷相对减少，进入血液循环中肿瘤组织生成的EPO、EPO-R也相应减少，故推测其变化可能为疗效评价提供参考。

综上所述，恩度联合化疗可降低晚期NSCLC患者血清EPO、EPO-R mRNA水平，监测EPO、EPO-R mRNA在治疗前后的变化有助于判断疗效。由于肿瘤血管生成不仅是这两种因子起作用，而是若干因素综合作用的结果，多个信号传导通路参与其中，故今后还需进行更大规模的多中心、大样本、随机临床观察。

[1] Aapro M, Jelkmann W, Constantinescu SN, et al. Effects of erythropoietin receptors and erythropoiesis-stimulating agents on disease progression in cancer[J]. Br J Cancer, 2012,106:1249-1258.

[2] Doleschel D, Mundigl O, Wessner A, et al. Targeted near-infrared imaging of the erythropoietin receptor in human lung cancer xenografts[J]. J Nucl Med, 2012,53(2):304-311.

[3] 王慧敏,韩宝惠.抗肿瘤血管生成治疗在非小细胞肺癌治疗中的应用进展[J].世界临床药物,2011,32(2):69-74.

[4] Folkman J. Antiangiogenesis in cancer therapy-endostatin and its mechanism of action[J]. Expt Cell Res, 2006,312(5):594-607.

[5] 许健,陈波,曹建民,等.重组人血管内皮抑素联合吉西他滨、顺铂方案双途径给药治疗晚期非小细胞肺癌的临床研究[J].临床肿瘤学杂志,2011,16(8):709-714.

[6] 魏启宏,丁惠珍,陶玉坚,等.重组人血管内皮抑素联合GP方案治疗晚期非小细胞肺癌近期疗效观察[J].实用临床医药杂志,2010,14(1):36-38.

[7] 夏凯艳.先声药业发布恩度Ⅳ期临床研究最新进展[J].中国医疗前沿,2010,5(4):96.

[8] 王金万,孙燕,刘永煜,等.重组人血管内皮抑素联合NP方案治疗晚期NSCLC随机、双盲、对照、多中心Ⅲ期临床研究[J].中国肺癌杂志,2005,8(4):283-290.

[9] 刘永煜.重组人血管内皮抑素治疗晚期非小细胞肺癌Ⅲ期临床研究[J].中国肿瘤,2005,14(6):398-400.

[10] Wang J, Zhang Y, Liao DB, et al. Clinical observation of Endostar combined with TP chemotherapy in the treatment of advanced stage NSCLC[J]. J Clin Med Prac, 2010,14(13):65-73.

[11] Zhao X, Mei K, Cai X, et al. A randomized phase II study of recombinant human endostatin plus gemcitabine/cisplatin compared with gemcitabine/cisplatin alone as first-line therapy in advanced non-small-cell lung cancer[J]. Invest New Drugs, 2011,12(7):243-249.

[12] Ellis LM, Hicklin DJ. VEGF-targeted therapy: mechanisms of anti-tumour activity[J]. Nat Rev Cancer, 2008,8(8):579-591.

[13] Poltorak Z, Cohen T, Sivan R. VEGF145 a secreted vascular endothelial growth factor that binds to extraeellular matrix[J]. J Biol Chem, 2007,272(11):7151-7158.

新疆医科大学科研创新基金项目(XYDCX201474)。

韩志刚(E-mail: 1378213986@qq.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.06.012

R734.2

B

1002-266X(2017)06-0038-03

2016-08-28)