猪瘟诊断技术研究进展

2017-04-05徐春志袁翠霞景书灏

兽医导刊 2017年16期

关键词：探针核酸猪瘟

陈红方英徐春志袁翠霞景书灏

（贵阳市动物疫病预防控制中心，贵州贵阳 550000）

猪瘟诊断技术研究进展

陈红方英徐春志袁翠霞景书灏

（贵阳市动物疫病预防控制中心，贵州贵阳 550000）

猪瘟是传染病流行的猪瘟病毒感染引起的一种急性、热性、接触猪，也被称为“烂肠瘟”。目前尚无有效的猪瘟药物，因此早期诊断猪瘟是减少该病造成的损失的有效措施。本文综述了猪瘟诊断技术的研究进展，为猪瘟的及时诊断提供参考。

猪瘟；诊断技术；进展

1 前言

猪瘟是由猪瘟病毒引起的具有高度传染性和致命性的病毒性疾病。世界动物卫生组织将被列为甲型传染病。中国的养猪业和巨大的危害，近年来，疫情已经发生了很大的变化和临床症状，通过大规模流行的波浪型散发性传染病，临床症状不典型、非典型猪瘟持续时间变长（或慢性脑猪瘟）已成为该病的主要形式，广泛的亚临床感染、持续性感染和猪瘟的预防免疫耐受的诊断带来了一定的困难。

2 猪瘟诊断技术研究进展

2.1 实验室诊断技术

猪瘟的实验室诊断可以及时准确地识别和诊断动物传染病。是控制猪瘟暴发流行的有效手段。猪瘟的病理变化和临床症状是猪瘟病毒数量密切相关，该菌株的毒力和免疫、感染动物的年龄和种类。除了猪瘟以外，其他类型的猪瘟也难以通过临床症状进行诊断。因此，有必要对疑似猪瘟病例进行实验室诊断。21世纪以来，免疫学和分子遗传学技术的迅速发展，丰富了实验室诊断技术，提高了实验室诊断技术水平。有猪瘟的实验室诊断方法很多，如直接免疫荧光法和逆转录聚合酶链反应和用于冰冻组织切片的抗原直接免疫荧光法快速检测ELISA技术检测结果，最快可在2h内获得，但这种方法的应用也有一定局限性，只有猪出血热病毒单克隆抗体的使用，可以得到准确的测试结果，否则无法鉴别猪瘟病毒和瘟病毒病毒。除了检测猪瘟病毒的表面抗原，RT PCR方法可用于检测猪瘟病毒的快速诊断和完整的遗传物质。RT-PCR技术可以识别相对相似的病毒种类。

2.2 分子生物学检测技术

首先是反转录聚合酶链反应在猪瘟病毒核酸诊断有针对性，根据猪瘟病毒特异性基因序列，合成一对引物，在引物逆转录酶和RNA介导的催化转化，成RNA的互补链c DNA，加热后c DNA与RNA链解离，并由DNA聚合酶催化引物延伸产生的双链DNA的目标，最后目标DNA扩增，扩增产物进行电泳，溴化乙锭染色后，在紫外光下（254nm）可以看到特异扩增带。该方法适用于各种有毒物质的检测，可用于临床诊断。本发明操作简单，特异性强，灵敏度高，重复性好，可快速检测。此外，逆转录巢式聚合酶链反应（PCR）也是一种常见的诊断技术，使用2对聚合酶链反应引物扩增完整片段。猪瘟病毒扩增的组织材料的含量低，细胞液，该方法可以在中国不同基因亚群病毒强毒株和疫苗病毒可以完全分离的流行，而不是与其他猪流感病毒、牛病毒性腹泻病毒有非特异性反应。可以快速准确地诊断猪瘟，并从接种过的猪身上迅速筛选出致命的病毒，并减少未感染的免疫猪被杀死的可能性。

2.3 DNA芯片诊断技术

DNA芯片诊断技术是近年来分子生物学与微电子学等多学科交叉融合而成的一项高新技术，其原型是20世纪80年代中期提出的。基因芯片的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的八核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG，与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列。据此可重组出靶核酸的序列。该技术为基因芯片技术为猪瘟诊断技术提供了新的技术理念，目前已经正进行这方面的研究，其研究成果将对我国猪瘟的防控具有深远意义。

3 猪瘟防控方式

猪瘟发生后，有必要采取相应的防控措施，有效控制猪瘟疫情的蔓延，彻底清除疫情。在防治猪瘟的防控措施，多种选择，包括受感染的猪和猪杀，猪接触限制交通，急救免疫预防设置隔离区，不同层次建立监测和疫情期间跟踪系统。多种防治措施和方案在防治效果上各有优势，但在各项防治措施的实施中都存在一些问题。这次捕杀是最有效和最有效的预防和控制猪瘟、猪瘟的方法，通过杀死受感染的猪和可能接触过的猪，可以实现对疫情的有效控制。随着动物福利意识的提高，实施狩猎政策具有成本巨大、灵活性差的特点，因此对这一有效的防控措施的实施也存在一定的争议。尽管在猪瘟大范围爆发的时间是非常有效的，但与动物保护和动物保护的人士，在实施捕杀工作的过程中，也存在一些争议的防治措施，疫情发生，造成运行平稳，速度补偿起着非常重要的作用。如果不能及时给予补偿，农民将不会全力配合捕杀，也不能完全消除传染源，从而导致疫情的蔓延。