徐飞 郑秀化++李春映 施季森 甄艳

摘要：为建立适合鹅掌楸胚性愈伤大规模蛋白质组研究，比较分析4种蛋白质提取方案：Mg/NP-40-三氯乙酸（简称TCA）/丙酮、TCA/丙酮、裂解液-Clean-up、裂解液-TCA/丙酮，并进行蛋白质的聚丙烯酰腚凝胶电泳（简称SDS-PAGE）和双向电泳分析。SDS-PAGE图谱显示：裂解液-Clean-up、裂解液-TCA/丙酮法分离高分子量蛋白质条带相对于Mg/NP-40-TCA/丙酮、TCA/丙酮法少；Mg/NP-40-TCA/丙酮法和裂解液-Clean up法低分子量提取、分离效果较差。在SDS-PAGE基础上对Mg/NP-40-TCA/丙酮、TCA/丙酮法提取蛋白质样品进行双向电泳，结果表明：TCA/丙酮法得到的凝胶图蛋白质点分布均匀、背景清晰且纵横条纹较少，且TCA/丙酮法相对于Mg/NP-40-TCA/丙酮法来说在小分子量蛋白质、碱性蛋白质分离方面有优势。同时随机选取双向电泳分离的蛋白质进行质谱分析，结果显示，TCA/丙酮法较适合鹅掌楸胚性愈伤蛋白质组的大规模分析。

关键词：鹅掌楸；愈伤组织；蛋白质组；SDS-PAGE；双向电泳

中图分类号：S718.3 文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2016）12-0252-04

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收稿日期：2015-10-28

基金项目：江苏省高校自然科学重大研究项目（编号：12KJA220002）；江苏省政府优势学科（林学）建设项目。

作者简介：徐飞（1993—），男，江苏泰州人，研究方向为植物蛋白质组。E-mail：1291146127@qq.com。

通信作者：甄艳，博士，副教授，研究方向为植物蛋白质组。E-mail：zhenyongni30@aliyun.com.cn。

2005年《Science》杂志的特刊列出125个重要的科学问题，而1个体细胞如何成为1株完整的植株是其中的一個重要的科学问题[1]。体胚发生生理与分子生物学事件的研究是一个非常有趣的科学问题，胚性愈伤组织的形成是植物体胚发生的第一步，它起源于单细胞，很多具有全能性的愈伤组织可以发育成完整的植株。……