倪晓婷， 吴耀东， 郑文斌,3， 马剑钢,3， 张晓轩,3， 孙晓林， 朱兴全， 周东辉

(1.中国农业科学院兰州兽医研究所 ， 甘肃兰州730046 ； 2.甘肃农业大学动物医学院 ，甘肃兰州730070 ； 3.吉林农业大学动物科学技术学院 ， 吉林长春130118)

宁夏奶牛球虫病流行病学调查与虫种鉴定

倪晓婷1,2， 吴耀东1， 郑文斌1,3， 马剑钢1,3， 张晓轩1,3， 孙晓林2， 朱兴全1， 周东辉1

(1.中国农业科学院兰州兽医研究所 ， 甘肃兰州730046 ； 2.甘肃农业大学动物医学院 ，甘肃兰州730070 ； 3.吉林农业大学动物科学技术学院 ， 吉林长春130118)

奶牛球虫病是由艾美耳属和等孢属球虫寄生于肠道引起的一种常见疾病。该病主要发生于犊牛，呈世界性分布，丹麦的一次调查结果显示，艾美耳球虫在奶牛中的感染率高达96.2%，其中犊牛的感染率为60.9%[1]，给养牛业造成了巨大的经济损失。近年来，我国各地奶牛球虫感染情况十分普遍[2-4]，报道的感染率范围为12.3%～75.0%。但宁夏至今尚未有奶牛球虫感染情况的报道。有鉴于此，我们调查了宁夏3个规模化奶牛场的球虫感染情况，旨在为防制该病提供科学依据。报告如下。

1 材料与方法

1.1 奶牛粪便样品 2015年5月从宁夏自治区3个规模化奶牛场(NX1～NX3)采集1月龄到1岁左右的荷斯坦奶牛粪便样品共426份，分别装入干净塑料自封袋带回实验室，放入4 ℃冰箱中待检。

1.2 检测方法 采用饱和盐水漂浮法检测奶牛粪便中的球虫卵囊。每份粪样混匀后取2 g放入60 mL烧杯中，加入50 mL饱和食盐水；轻轻搅匀静置15～20 min后，取其漂浮液直接涂片镜检，观察球虫卵囊[5]。1.3 卵囊计数方法 取球虫阳性粪样2 g，放入60 mL烧杯中，加入50 mL水，60目铜筛过滤，滤液经3 000 r/min离心10 min，弃上清；将沉淀移入烧杯，先加水5 mL，搅拌混匀后加饱和盐水至60 mL，混匀后吸取粪液滴注于改良麦克马斯特计数板的计数室内，静置5 min后，显微镜下计数每克粪便卵囊数(OPG)(OPG=A×100，A为改良麦氏记数板下数到的卵囊数)[6-8]。1.4 卵囊的收集与培养 取球虫阳性粪便2 g，加清水60 mL搅拌均匀，用60目筛网过滤，将滤液置于离心机中3 000 r/min离心10 min，弃上清；取沉淀物用饱和盐水漂浮，静置20 min，3 000 r/min离心5 min，弃上清；加10倍量的清水，3 000 r/min离心10 min，弃上清；取沉淀物放入装有2.5%重铬酸钾溶液培养皿中，置于28 ℃恒温箱中培养，至95%以上卵囊完全孢子化，置4 ℃保存[6-8]。

1.5 卵囊形态观察与虫种鉴定 取孢子化后的卵囊液制片后，在40×显微镜下观察孢子化卵囊的结构。根据卵囊、孢子囊和子孢子的形态、结构、大小等情况，参考文献[5-10]进行虫种鉴定。

2 结果与分析

2.1 不同奶牛场的球虫感染率与感染强度 3个奶牛场均存在球虫感染，感染率分别为40.85%、28.00%和13.58%。在检出的117头阳性奶牛中，感染强度最大OPG值为85 800，各奶牛场平均OPG值为3 496，其中NX2牧场为最高，平均OPG值为4 794(表1)。

表1 不同奶牛场的球虫感染率与感染强度

2.2 球虫卵囊鉴定 通过对孢子化球虫卵囊进行种类鉴定，此次调查共查出12种艾美耳属球虫和1种等孢属球虫，艾美耳属球虫分别是牛艾美耳球虫(Eimeriabovis)、奥博艾美耳球虫(Eimeriaauburnensis)、邱氏艾美耳球虫(Eimeriazuernii)、阿拉巴艾美耳球虫(Eimeriaalabamensis)、亚球形艾美耳球虫(Eimeriasubspherica)、椭圆艾美耳球虫(Eimeriaellipsoidalli)、加拿大艾美耳球虫(Eimeriacanadensis)、圆柱状艾美耳球虫(Eimeriacylindrica)、怀俄明艾美耳球虫(Eimeriawyomingensis)、巴西艾美耳球虫(Eimeriabrasiliensis)、广西艾美耳球虫(Eimeriakwangsiensis)、库斯提艾美耳球虫(Eimeriakosti)，但调查中发现的1种等孢属球虫卵囊，检出率低，尚未定种。

2.3 各种球虫在奶牛场的感染率 本次调查鉴定的12种艾美耳属球虫和1种等孢属球虫在奶牛场的感染率见表2。

2.4 各奶牛场不同月龄段奶牛球虫感染率及优势种 由表3可知，3个规模化牧场奶牛1岁以内平均感染率最高的年龄段为7～12月龄，平均感染率为36.91%(55/149)；其次是1～3月龄，平均感染率为21.67%(36/83)；最低的是4～6月龄，平均感染率为17.99%(18/48)。

表2 各种球虫在整个奶牛场的感染率

表3 各奶牛场不同月龄段奶牛球虫感染率 / %

1～3月龄奶牛主要感染圆柱状艾美耳球虫、奥博艾美耳球虫和椭圆艾美耳球虫；4～6月龄奶牛主要感染圆柱状艾美耳球虫、牛艾美耳球虫和奥博艾美耳球虫；7～12月龄奶牛主要感染圆柱状艾美耳球虫、邱氏艾美耳球虫和广西艾美耳球虫；大于12月龄奶牛主要感染圆柱状艾美耳球虫、广西艾美耳球虫和椭圆艾美耳球虫。本次调查发现，圆柱状艾美耳球虫为宁夏奶牛感染的最优势种。

3 讨论

本研究调查发现，宁夏各奶牛场均存在不同程度的球虫感染，平均感染率为27.46%，与郑州(29.60%)[10]、新疆奎屯(34.14%)[11]、河南(37.70%)[12]等地的感染情况相近。本次调查发现，大于12月龄奶牛的感染率最高(61.11%)，其次是7～12月龄奶牛(36.91%)，1～3月龄奶牛(21.67%)；4～6月龄奶牛感染率最低(17.99%)，与新疆奎屯奶牛的感染情况相似。但石冬梅等[13]发现球虫病主要发生于犊牛，尤其是1～3月龄犊牛；出现这种差异的原因可能与采样数量、采样季节和奶牛场管理方式等有关，本次大于12月龄奶牛仅有11份样品。

全世界报道的牛球虫有23种，但公认的有15种[13]，目前中国报道的牛球虫确定种的有13种艾美耳属球虫，另有2个等孢属未定种[10]。本次调查发现，宁夏银川地区奶牛感染艾美耳球虫12种。其中1～3月龄奶牛主要感染圆柱状艾美耳球虫、奥博艾美耳球虫和椭圆艾美耳球虫；4～6月龄奶牛主要感染圆柱状艾美耳球虫、牛艾美耳球虫和奥博艾美耳球虫；7～12月龄奶牛主要感染圆柱状艾美耳球虫、邱氏艾美耳球虫和广西艾美耳球虫；大于12月龄奶牛主要感染圆柱状艾美耳球虫、广西艾美耳球虫和椭圆艾美耳球虫。总体来讲，圆柱状艾美耳球虫、邱氏艾美耳球虫和椭圆艾美耳球虫的感染率较高，为奶牛球虫感染的优势种，感染率最高的是圆柱状艾美耳球虫(43%)这与国外相关研究结果存在一定差异[14、25]。

此次调查发现了奶牛混合感染球虫的情况，在成功孵化出的107份阳性样品中，只感染一种球虫的有59份，发生混合感染的有48份，其中同时感染了两种球虫的有28份，同时感染了3种球虫的有20份。本次调查发现1种等孢属球虫，但由于卵囊数极少无法确切定种。张龙现等[10]对郑州地区奶牛球虫感染情况调查时发现2种等孢球虫，并报道牛体内发现的等孢球虫是一种假性寄生拉氏等孢球虫，这种球虫主要寄生于一些野鸟，如麻雀体内，牛粪便中会发现，极可能是麻雀等野鸟粪中的卵囊污染了牛饲料或饮水被牛吞人而随牛粪排出的，但都无法肯定，有关奶牛是否真能感染等孢球虫有待进行进一步研究。这是宁夏自治区奶牛球虫感染情况的首次报道，本次研究可见，宁夏地区奶牛感染球虫普遍存在，应引起有关部门重视。

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2016-02-26

国家科技支撑计划项目(2012BAD12B07)

倪晓婷(1990-)，女，硕士，研究方向为动物寄生虫学，E-mail：wwwnxt.126@163.com

周东辉,E-mail：zhoudonghui@caas.cn

文献标志码：B 文章编号：0529-6005(2017)02-0044-03