沈嫣婧 齐 艳 楼正青

浙江省杭州市中医院 浙江 杭州 310007

黄连解毒汤对腹透患者感染病原菌的作用研究*

沈嫣婧 齐 艳 楼正青

浙江省杭州市中医院 浙江 杭州 310007

目的：研究黄连解毒汤对腹透患者感染的病原菌的作用。方法：对腹透患者感染的病原菌进行鉴定和药敏分析，采用连续倍比试管稀释法测定黄连解毒汤对腹透液中常见病原菌的最小抑菌浓度（MIC），结合抗菌药物的耐药情况为临床用药提供参考依据。结果：送检的208例腹膜透析液中共检出病原菌59株，其中革兰阳性球菌占69.5%，对喹诺酮类敏感性较高；革兰阴性杆菌占23.7%，对三代头孢菌素、碳青霉烯类和喹诺酮类敏感性较高。黄连解毒汤对金黄色葡萄球菌的MIC为250mg/ml，对表皮葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、肠球菌和大肠埃希菌的MIC均大于1000mg/ml。结论：黄连解毒汤在体外对腹膜透析患者感染的金黄色葡萄球菌有显著的抗菌活性。

黄连解毒汤 腹透感染 病原菌 耐药性

细菌的耐药性和抗生素的副作用严重困扰着医药学界，单靠单一化学药物治疗目前已无法解决这一难题。中药在治疗细菌性感染疾病具有副作用小、细菌耐药性较少等优势，越来越受到人们的重视。黄连解毒汤具有清热解毒之功效，临床常用于治疗败血症、脓毒血症、肺炎等[1]，在腹膜透析相关感染中的作用研究较少。笔者探讨黄连解毒汤对腹透感染常见病原菌的作用，以期对推动抗菌中药的研究和开发提供帮助。

1 材料与方法

1.1 标本来源:选取杭州市中医院肾内科2015年5月至2016年4月就诊治疗的腹膜透析患者208例，年龄在20～80岁。

1.2 标本处理:由肾内科医师无菌操作抽取透析液8～10ml，分别注入需氧瓶和厌氧瓶中，送微生物室。收到标本后立即放入全自动血培养仪中进行培养，若标本阳性则仪器自动报警，后转种血平板、巧克力平板或厌氧平板中进行培养鉴定。若培养5天未报警，则表示该标本无细菌和真菌生长。

1.3 病原菌鉴定和药敏试验:严格按照《全国临床检验操作规程》进行操作。应用法国生物梅里埃公司Vitek-2鉴定仪及配套鉴定卡进行菌种鉴定，采用K-B法进行药敏试验。质控菌株为大肠埃希菌（ATCC25922）、铜绿假单胞菌（ATCC27853）、金黄色葡萄球菌（ATCC25923）和粪肠球菌（ATCC29212），均由浙江省临检中心提供。

1.4 黄连解毒汤的制备:分别称取中药饮片黄连、黄芩、黄柏和栀子9g、6g、6g、9g（质量比为3∶2∶2∶3）混合，加10倍量纯化水浸泡30min，煎煮60min，8层纱布滤过，药渣再加5倍纯化水煎煮60min，8层纱布滤过，将两次煎煮滤液合并，离心后浓缩为10ml，即每毫升浓缩液相当于原生药3g。将浓缩液作为黄连解毒汤储备液置100℃，20min饱和蒸汽高压灭菌后，4℃保存。实验时，用营养肉汤稀释至适宜浓度。

1.5 供试菌液的制备:将培养阳性的透析液（实验菌）纯化后接种于营养肉汤中，37℃培养24h，菌液用3ml营养肉汤校正浓度至0.5cfu，作为供试菌液。

1.6 抗菌作用检测:采用连续倍比试管稀释法，取营养肉汤培养基配制好后，分装于8根试管中并编号。1号试管加入4ml营养肉汤培养基，2～8号试管每管均加3ml营养肉汤培养基，于121℃，15min高压灭菌后备用。取黄连解毒汤2ml加入1号试管中充分摇匀，浓度为1000mg/ml。从1号试管中吸取3ml药液置2号试管中充分混匀。3～6号试管采用该法依次倍比稀释1/4、1/8、1/16、1/32，使1～6号试管药液浓度依次为1000、500、250、125、62.5、31.25mg/ml；然后每根试管加入0.3ml供试菌液。同时，7号试管加入0.3ml灭菌营养肉汤作为空白对照组，8号试管加入0.3ml供试菌液作为阳性对照组。将1～8号试管充分摇匀后，于35℃孵育16～24小时。以在试管内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为最小抑菌浓度（MIC）。

2 结果

2.1 病原菌分布和构成:208例送检标本中阳性标本为52例，阳性率为25.0%。其中革兰阳性球菌41例占69.5%，革兰阴性杆菌14例占23.7%。所分离的细菌主要为革兰阳性球菌，尤以凝固酶阴性葡萄球菌为主占32.2%，其次为链球菌属、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌。见表1。

表1 病原菌分布和构成

表2 腹透液分离的59株病原菌耐药率

表3 腹透液中葡萄球菌属的耐药情况

2.2 病原菌的耐药性分析:表2、3显示，腹透液中的革兰阳性球菌对喹诺酮类敏感性较高，革兰阴性杆菌对三代头孢菌素、碳青霉烯类、喹诺酮类敏感性较高。凝固酶阴性葡萄球菌的检测株数和耐药株数均高于金黄色葡萄球菌，两者均对抗菌药物多药耐药。

2.3 黄连解毒汤的抗菌试验结果:除对金黄色葡萄球菌的MIC为250mg/ml外，其余均大于1000mg/ml。可见黄连解毒汤在体外对腹膜透析患者感染的金黄色葡萄球菌具有显著的抗菌活性。

3 讨论

中药及其复方制剂的抗菌作用不仅体现在方剂有效成分对细菌的直接抑制,同时还表现在方剂中各味药多种成分相互作用的综合效应上[2]。黄连解毒汤中黄连、黄芩、黄柏、栀子均性寒味苦，具有清热燥湿，泻火解毒的功效。四药联合，协同作用更强。据报道[3]，黄连和黄芩在体外具有明显的抑菌作用，可能与增强白细胞及肝网状内皮系统的吞噬能力有关；黄柏对金黄色葡萄球菌的抑菌效果最好，其抗菌原理主要为抑制细菌的呼吸和RNA的合成。本研究发现黄连解毒汤对金黄色葡萄球菌具有显著的抗菌活性。

本研究中感染率最高的为凝固酶阴性葡萄球菌、链球菌属和肠球菌属，均为人体的正常菌群，可能与腹膜透析侵入性操作有关。腹腔内置管作为异物置入后，破坏了原有密闭的腹膜腔内环境，加之透析患者体内多种免疫功能减退，使人体的正常寄生菌乘虚而入造成感染。中医学认为，任何疾病的发生发展过程都是致病因素作用于人体，引起正邪斗争，导致阴阳气血偏盛偏衰或脏腑经络机能失常的结果。故中药的治疗作用主要是扶正驱邪、消除病因、纠正紊乱的脏腑气机及阴阳气血的偏盛偏衰现象，恢复脏腑经络的正常生理功能，达到治愈疾病的目的。由于中药及其复方制剂成分复杂多样,所以不能单纯从体外抑菌、杀菌试验的效果来评价中药在体内的作用。因此，黄连解毒汤对金黄色葡萄球菌的作用机制、在腹透感染患者体内是否发挥抗感染作用及其作用机制仍需进一步探讨。

[1]张鹏晖,张建亭.黄连解毒汤药理作用研究进展[J].浙江中医杂志,2012,47(6):458-460.

[2]刘云宁,李小凤,班旭霞,等.中药抗菌成分及其抗菌机制的研究进展[J].环球中医药,2015,8(8):1012-1017.

[3]徐涛.中药黄柏的现代药理作用研究[J].中国中医药咨讯,2010,34(2):111.

2016-08-18

国家自然科学基金资助项目质粒介导产KPC酶大肠埃希菌的克隆流行及传播机制研究，编号：81301490