李强

摘要 为了研究枸杞叶片中类黄酮含量的变化规律，确定枸杞叶片的最佳采收时期，采用超声波辅助法提取不同采收期枸杞叶片中的类黄酮，在291.5 nm处测定其吸光度，计算出不同采收时期枸杞叶片中类黄酮的含量。结果表明：5月中旬前后枸杞叶片中的类黄酮含量最高，6月、 7月以后叶片中的类黄酮含量缓慢减少。直到8月、9月采收的枸杞叶片的黄酮含量又会显著增加，最高点在5月采收的枸杞叶片中，类黄酮含量达到61.32 mg/g，因此这段时间的叶片最适宜采收。

关键词 采收期；枸杞叶片；类黄酮；含量

中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）22-0059-02

Abstract The changes of flavonoids content of Lycium barbaruml leaves in different picking periods was researched in order to find out the best picking periods of Lycium barbaruml leaves.Ultrasonic assisted extraction was used to extract total flavonoids in Lycium barbaruml leaves with different picking periods，mearsuring the absorbance at 291.5 nm，the total flavonoids in different picking periods was calculated and the changing rule of flavonoids content was obtained.The results showed that the total flavonoids content from June to July picking period was decreasing.after July，the total flavonoids content began to increase，until the end of September.f.The total flavonoids content on May 15 reached the high point which was 61.32 mg/g.Thus，the best picking period of Lycium barbaruml leaves was in May.

Key words picking periods；Lycium barbaruml Leaves；total flavonoids；content

枸杞作为宁夏富民强区的优势产业，近年来发展势头迅猛，到“十三五”末时，宁夏枸杞种植面积将稳定在6.67万hm2左右，总产值达到300亿元以上。近些年来，随着百姓生活水平提高，对健康的越发重视，保健食品的消费量急剧增加。一直以来枸杞子都是重要的保健食品，是日常保健消费的主流，而对于宁夏枸杞叶的基础性研究和开发却相对较少。据《本草纲目》记载，枸杞叶又名“天精草”，祛五劳七伤。现代科学研究证明枸杞叶具有养肝明目、软化血管、清除体内自由基和抗衰老之效用[1-2]。目前，在宁夏当地已经开发出枸杞叶茶和保健蔬菜，但是与其枸杞的种植面积相比，开发的比例还很低。因此，加强对枸杞叶的基础研究和应用研究是十分必要的。

查閱相关文献[3-5]，枸杞叶富含天然抗氧化成分类黄酮化合物，枸杞是中国特有树种，主要在中国西北地区种植，国内外对枸杞叶本身研究较少。超声波技术是利用超声波在液体中的空化作用来加速植物有效成分的浸出提取，具有时间短、适应性广等特点。本研究采用超声波法提取宁夏枸杞叶片中抗氧化活性成分的类黄酮，确定提取类黄酮的工艺参数并测定不同采收期枸杞叶片中的类黄酮含量，比较不同采收期枸杞叶片中类黄酮含量的变化规律，确定枸杞叶最佳的采收时期。

1 材料与方法

1.1 试验材料

研究材料：采收不同时期的宁夏枸杞鲜叶（采摘时间定在5月、6月、7月、8月、9月中旬进行），采自宁夏银川南梁农场枸杞种植基地。

供试仪器与设备：U410超低温冰柜（英国NEW BRUN-SWICK SCI-ENTIFIC）、索氏脂肪提取器（上海洪纪仪器设备有限公司）、电子天平（郑州长城工贸有限公司）、722E 型可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）、 RE-52A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）、JY92-Ⅱ 超声波细胞粉碎机、DHG-9140A 电热鼓风干燥箱（上海佳胜实验设备有限公司）、DK-S28 型电热恒温水浴锅（上海精密实验设备有限公司）、FDV DVTOUT-2HD 超微粉碎机（专利第115669号佑崎有限公司）、真空泵布氏漏斗以及安全实验室常用仪器。

供试试剂：芦丁标准品；乙醇、石油醚、AlCl3、甲醇，均为分析纯，国药集团化学试剂有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 枸杞叶片中总黄酮的提取[6-8]。将枸杞鲜叶放置在自然光下晾晒5 d，然后置于烘箱中干燥2 h（保持105 ℃）后再粉碎至1 mm成枸杞叶粉末，待用。精确称量10 g枸杞粉末，将其置于索氏脂肪提取器内，加入200 mL石油醚90 ℃回流浸提脱脂约2 h至无色，取出包有样品的滤纸置于烘箱中烘干。按固液比1∶50（g/mL）加入70%乙醇，在420 W、55 ℃的条件下于超声波细胞粉碎机中处理60 min。再用真空抽滤，上清液用95%乙醇定容至100 mL备用[9]。

1.2.2 标准曲线的绘制。将芦丁充分干燥至恒重，再用电子天平准确称量10.000 mg（120 ℃干燥至恒重）的芦丁标准品，加入甲醇溶解并定容于100 mL的容量瓶中，得到质量浓度为0.1 mg/mL的芦丁对照标准液。准确吸取上述芦丁对照标准液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL于10 mL容量瓶中，分别加入1% AlCl3显色剂1 mL，加入95%乙醇至刻度，摇匀，放置15 min，配制成系列标准溶液，以第一管溶液作空白，在500 nm处分别测定吸光度[10]，以吸光度为横坐标，样品浓度为纵坐标，绘制出标准曲线[11]，得到线性回归方程，得吸光度A-质量浓度C的标准曲线（表1、图1），求得回归方程C=22.039A+0.002 4（R2=0.999 6）。

由标准曲线求出试样中类黄酮提取液的浓度，再计算样品中类黄酮的含量，计算公式如下：

m=C×10×10/W

式中：C为根据回归方程计算出类黄酮提取液的质量浓度（mg/mL）；10为提取液定容时的体积（mL）；10为显色反应时稀释的倍数；W为样品的质量（g）。

2 结果与分析

将不同采收时期枸杞叶片的吸光度，浓度值及类黄酮含量整理成表2。

为了对比方便，再将5—9月不同采收时期枸杞叶片中类黄酮含量的平均值绘制成柱形图来进行比较，结果见图2。

由图2可以看出，在5—9月采摘的枸杞叶片中类黄酮含量以5月最高，6月、7月开始降低，到8月、9月又显著增加的一个趋势，其中5月采摘的枸杞叶片中类黄酮含量高达61.32 mg/g，而到6月则降低到35.12 mg/g。

3 结论与讨论

该试验结果表明，5月中旬前后枸杞叶片中的类黄酮的含量最高，6月、 7月以后叶片中的类黄酮含量缓慢减少。直到8月、9月采收的枸杞叶片的黄酮含量又会显著增加，最高点在5月采收的枸杞叶片中，类黄酮含量达到61.32 mg/g，因此5月是最适宜采收枸杞叶片的时间。

5月采摘的枸杞叶片中的类黄酮物质处于最高值，即此时的枸杞叶片最嫩也最适宜采收，而到了8月、9月虽然类黄酮的含量也较高，但是此时叶片纤维化严重，并不适宜加工利用。出现这种情况的原因主要有2个方面：一是气候影响。宁夏位于中国西北，属于内陆干旱沙漠型气候，少雨、多风、光照充足、冬季漫长，每年的5月以后气温迅速回升、日照相对较强，农作物依靠黄河补水较足，枸杞植株喜热需水，在这个阶段生长最为旺盛，类黄酮物质也容易积累；二是5月的宁夏枸杞正处于春季萌芽期，而8月、9月初枸杞采果基本结束，叶片急剧老化，因而处于组织正在快速生长的嫩叶和逐渐纤维化的老叶对类似于类黄酮物质这样的功效成分积累量也有增加。

类黄酮化合物是一类天然产物，广泛存在于各种植物组织中，是许多天热产物中的有效成分。多种方法均可以测定枸杞叶片中的类黄酮含量，如热水浸提法、乙醇提取法、分光光度法、高效液相色谱法、二氧化碳超临界流体萃取法、离子交换法、大孔吸附树脂法、微波提取法等。该研究结果表明，超声波辅助提取法时间少、提取率高、成本较低、污染最小、实现产业化也较为容易。从保健及新資源食品开发角度来看，该结果可以指导研发人员在适宜的时间采收枸杞叶片来提取类黄酮化合物，达到事半功倍的效果，为枸杞叶的深度研究和产业开发起到基础性作用。

4 参考文献

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