李 伟， 龚劲松， 李 恒， 张旦旦， 陆震鸣， 许正宏， 史劲松

一株产蛋白酶不动杆菌的分离与酶学性质

李 伟， 龚劲松， 李 恒， 张旦旦， 陆震鸣， 许正宏， 史劲松*

（江南大学 药学院，江苏 无锡 214122）

以脱脂奶粉或羊毛粉为唯一碳氮源，从环境样品中筛选蛋白酶产生菌，首次获得一株高产蛋白酶的醋酸钙不动杆菌（Acinetobacter calcoaceticus）E9，初步发酵优化显示，该菌株的最适发酵产酶温度35℃，培养基初始pH 6.0，接种量为质量分数4%，培养时间30 h；发酵培养基：蔗糖10 g/L，牛肉膏15 g/L，K2HPO4·3H2O 7 g/L，KH2PO43 g/L，MgCl2·6H2O 1 g/L。酶学性质初步研究表明，不动杆菌E9所产的蛋白酶属于中性蛋白酶，最适作用温度50℃，最适pH 8.0，在pH 5.0~8.0及40℃以下时具有良好的稳定性，酶反应动力学参数Km为7.067 mg/mL，Vmax为966.7 μg/（mL·min）。

蛋白酶；筛选；鉴定；醋酸钙不动杆菌；酶学性质

蛋白酶广泛分布于动物、植物和微生物中，是生命活动中一类极为重要的水解酶。1945年Jaag等人在地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis中发现了碱性蛋白酶[1-2]，从此微生物源蛋白酶逐步成为蛋白酶研究的热点。微生物繁殖速度快，种类繁多，培养方法简单，易于大批量生产和提取。因此，微生物蛋白酶的筛选和应用研究一直是生物催化与转化领域的一个十分重要的工作。然而，近30年来，并没有很多新的蛋白酶品种投入到工业应用中，目前应用的主要品种仍然芽孢杆菌蛋白酶，如地衣芽孢杆菌2709[3]和C1213[4]、短小芽孢杆菌289和209[5]，上述蛋白酶大都为中温、碱性品种，普遍存在中性催化活力低、温度稳定性不好、粗品气味较大等缺点。随着众多工业领域对新型酶制剂的需求，未来蛋白酶的研究发展将主要集中于：（1）继续筛选新来源的蛋白酶菌种和基因资源，为蛋白酶在制革、纺织等领域的应用提供新的素材；……