高效液相色谱-荧光检测法同时分析沼液中4种喹诺酮类抗生素

2017-03-18林晓旭何世妍叶永盛陈伟雪

化工管理 2017年2期

关键词：诺氟沙星类抗生素喹诺酮

林晓旭何世妍叶永盛陈伟雪

(1广东省测试分析研究所（中国广州分析测试中心）,广东广州 510070)

(2广州白云山敬修堂药业股份有限公司,广东广州 510130)

高效液相色谱-荧光检测法同时分析沼液中4种喹诺酮类抗生素

林晓旭1何世妍2叶永盛1陈伟雪1

(1广东省测试分析研究所（中国广州分析测试中心）,广东广州 510070)

(2广州白云山敬修堂药业股份有限公司,广东广州 510130)

检测沼液中的喹诺酮抗生素，可以避免抗生物污染问题。本文主要采用高效液相色谱-荧光检测法分析沼液中4种喹诺酮抗生素药物的含量。检测发现，沼液中喹诺酮含量最高可达478μg/L，说明沼液抗生素污染已经成为重点问题，需要加强关注和治理。

沼液；喹诺酮类抗生素；高效液相色谱；荧光检测法

动物由于难以吸收大部分抗生素，导致药物以代谢的形式流入到环境中，对环境及生物的成长造成了巨大的影响。喹诺酮类抗生素具有抗菌、结构简单以及低毒性等特点，目前已经广泛的应用于禽畜的饲养中[1]。但是在目前的研究中，动物粪便中的喹诺酮抗生素残留研究较多，而对沼液中的药物鲜有研究，因此，探究沼液中的喹诺酮抗生素具有重要的价值。

1 实验材料与方法探究

1.1 实验仪器

高效液相色谱仪；色谱柱（250*4.6mm，Shim-Pack，VPODS）；真空泵；十二孔固相萃取装置；超声波清洗仪；固相萃取柱；抽滤装置；玻璃纤维微膜（0.7μm）[2]

1.2 实验试剂

环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星以及恩诺沙星；四丁基溴化铵；氢氧化钠、磷酸氢二钠、磷酸、柠檬酸、盐酸等。

1.3 配置实验溶液

缓冲液：配置0.1、0.2和0.4mol/L浓度的Na2EDTA、柠檬酸以及Na2HPO4混合溶液。之后配置McIIvaine缓冲液，采用0.1mol/L浓度的柠檬酸以及Na2HPO4混合。将两种缓冲液混合，制作成Na2EDTA-McIIvaine缓冲液，PH为4.0.

1.4 样本收集

取3个地区的沼液，在室温下保存，运用滤纸过滤悬浮物，之后通过玻璃纤维过滤，取50ml，加入盐酸调节PH到4.0，以1ml/min速率通过固相萃取柱，之后用甲醇洗脱至离心管，40℃下蒸发后用2ml超纯水复溶，再过滤后存储待测。

1.5 色谱条件及标准溶液配制

色谱柱温度为30℃，流动相为10.1mol/L，荧光检测波长为280nm，发射波长设置为450nm。

标准溶液分别配制成0.002、0.005、0.1、0.2、1、2和5mg/L溶液。

回收率（%）=（抗生素浓度-对照浓度）/加标剂量*100%。

2 结果与分析

2.1 选择提取剂

经过综合分析，发现使用Na2EDTA可以降低杂质，且成本较低。

2.2 色谱分离条件

实验波长为280nm，发射波长为450nm，探究PH为2.0-4.0的分离效果。研究发现，PH=2.5-3.0时，可以较好的确定基线分离，出峰时间为25min左右。

在流速的确定方面，本次研究选择了0.6、0.8以及1.0ml/ min三个流速，经研究，发现1.0ml/min为最佳流速。

2.3 回收率

在样品中分别添加0.1、0.2、0.5、1.0、2.0和5.0mg/L溶液，每个样本取三份样品进行试验，探究样品回收率及偏差水平，发现4种喹诺酮抗生素的回收率在81.2%-104.6%之间，标准差＜10%，说明试验成功。

2.4 实际检测成果

利用上述试验对收集的样本进行喹诺酮抗生素检测，检验成果说明猪粪发酵的沼液中，喹诺酮抗生素含量约为478μg/L；牛粪发酵的沼液中，喹诺酮抗生素含量约为182.6μg/L；鸡粪发酵的沼液中，喹诺酮抗生素含量约为201.2μg/L；其可能是与兽药以及动物的消化系统相关，导致研究结果存在差异。另外，环丙沙星的浓度为7-18μg/L，恩诺沙星为62-161μg/L；诺氟沙星为59-201μg/L；标准差＜10%。其可能是由于诺氟沙星的水溶性较好，容易排出，因此在沼液中的含量相对较高。具体检测数值如表1所示。