盛琦++刘素娟++冯峰++邵艳秋++孙++航

摘要：建立对食品中8种添加剂（柠檬酸钠、乙酸、糖精钠、咖啡因、苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯）分离测定的高效液相色谱法。色谱柱为Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇和0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液，梯度洗脱，流速为1.5 mL/min，紫外-可见检测器可变波长程序检测，柱温30 ℃，一次进样，15 min内完成分析过程。方法简单，快速，对实际样品测定结果满意。

关键词：高效液相色谱；食品添加剂；同时测定

中图分类号：O657.7+2；TS202.3 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）21-5620-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.21.047

Simultaneous Determination of 8 Food Additives By HPLC

SHENG Qi， LIU Su-juan， FENG Feng， SHAO Yan-qiu， SUN Hang

（Department of Chemistry and Industry， Mudanjiang Normal University， Mudanjiang 157011， Heilongjiang， China）

Abstract： A high performance liquid chromatography（HPLC） was developed for the separating and determination of eight food additives（sodium citrate，acetic acid，saccharin sodium，caffeine，benzoic acid，ethyl p-hydroxybenzoate，propyl p-hydroxybenzoate，and butyl p-hydroxybenzoate. A Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm） was used as separation column with methanol and 0.02 mol/L monopotassium phosphate solution as mobile phase in gradient elution. By variable wavelength UV-vis detection，the flow rate was 1.5 mL/min and the column temperature was 30 ℃. 8 additives could be separated in 15 min by one sampling. The method was fast，accurate，and the measured result of practical samples was satisfactory.

Key words： high performance liquid chromatography； food additives； simultaneous determination

食品添加劑适当使用可以改善食品质量，防止食物变质，保持食物营养[1，2]，但乱用或滥用会损害消费者健康，研发食品添加剂快速检测方法有重要的现实意义。随着社会发展，食品安全逐渐得到重视，中国颁布了食品添加剂使用标准规范其使用[3]。检测食品添加剂的方法主要有液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法、衍生光谱法和色谱-质谱联用方法[4-7]，多存在检测标底较为单一的缺陷。本研究设计的梯度洗脱可变波长高效液相色谱法1次可检测8种添加剂，减少了药品和人工，缩短了检测时间。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

LC-15C性液相色谱仪（日本岛津制作所）；KQ-100E型超声波清洗器（昆山市超声波仪器有限公司）；TB-214型电子分析天平（北京赛多利斯仪器有限公司）；8种防腐剂柠檬酸钠、乙酸、糖精钠、咖啡因、苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯标准品均购自Sigma公司，其他试剂均为HPLC级；试验用水均为娃哈哈纯净水。

1.2 标准溶液的制备

准确称取柠檬酸钠、乙酸、糖精钠、咖啡因、苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯定容成1.000 mg/mL的标准溶液。

1.3 色谱条件

LC-15C型液相色谱仪配备LC-15C型高压泵、DGU-20A型在线脱气机、CTO-15C型柱温箱、SPD-15C型紫外-可见检测器，LC-solution15C型色谱工作站。色谱柱Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm， 5 μm）；柱温30 ℃，进样量为10 μL。

1.4 实测样品

雪碧和康师傅水晶葡萄购自当地超市。超声波脱气5 min，取10 mL定容50 mL，进样前经0.45 μm滤膜过滤。

2 结果与分析

2.1 检测波长的确定

筛选试验发现在表1条件下检测灵敏度高、干扰小，且有最大吸收。

2.2 流动相的选择

流动相主要是缓冲盐和有机相混合。缓冲盐选磷酸盐；有机相选甲醇、乙腈。分别以甲醇与水，甲醇与磷酸盐溶液，乙腈与水，乙腈与磷酸盐溶液为流动相，进行效果测试。结果表明以KH2PO4溶液与甲醇分离效果较好。逐步调节流动相梯度，发现表2条件下，分离效果最佳。

2.3 缓冲盐浓度及其pH的选择

以0.01、0.02、0.05、0.10 mol/L的KH2PO4溶液进行检测。结果浓度为0.010 mol/L时分离效果不好，0.05、0.10 mol/L溶液对色谱柱有损害，0.02 mol/L溶液可满足需求。控制流动相的pH有稳定缓冲作用，设置不同的pH（1.5、2.5、3.5、4.5）溶液进行检测。结果表明，溶液pH过高时，分离不完全；溶液pH过低，降低色谱柱寿命；溶液pH为2.5时色谱峰较高，分离正常，检测效果佳。故选取pH为2.5的0.02 mol/L的KH2PO4溶液进行分离检测。

2.4 流速的选择

考察溶液流速为0.5～2.0 mL/min时8种添加剂混合液色谱分离情况。随着流速增大，保留时间缩短。当流速大于1.6 mL/min时，糖精钠和咖啡因会出现明显重叠，且高流速下泵压力增大，并不能明显缩短保留时间。综合考虑，选择流速为1.5 mL/min。

2.5 混合标样分离效果

以确定的最佳条件对食品添加剂进行检测，得标准样品色谱，见图1。

2.6 标准曲线、相关系数及检出限

将食品添加剂标准混合液逐级稀释成1～50 μg/mL系列混合溶液进行测定，以峰面积（x）和相应质量体积分数（y）作线性回归。结果表明，各组分回归方程相关系数均接近1（表3），其相关关系良好。

2.7 回收率及精密度测定

以康师傅水晶葡萄为代表样品，添加高、中、低3个浓度的8种食品添加剂，按优化的色谱条件进行平行6次分析，考察回收率和精密度，结果见表4。平均回收率为93.6%～105.4%，相对标准偏差为1.5%～4.1%。试验结果达到了分析检测要求。

2.8 实际样品的检测

采用试验確定方法检测康师傅水晶葡萄与雪碧，食品添加剂种类见图2和图3。添加剂含量见表5。3 结论

以甲醇和磷酸二氢钾为流动相进行梯度洗脱，辅以可变波长程序对8种食品添加剂的标准混合溶液进行高效液相色谱法检测。结果表明，在1～50 μg/mL浓度范围内线性良好，相关系数均接近1，检出限为0.08 mg/L，平均回收率为93.6%～105.4%，相对标准偏差为1.5%～4.1%。该方法具有分离效果好，快速、便捷、准确的特点，实用性强。对实际样品检测，结果满意，可用于食品的日常检测。

参考文献：

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[2] 孙金沅，孙宝国.中国食品添加剂与食品安全问题的思考[J].中国农业科技导报，2013，15（4）：1-7.

[3] GB 2760-2011，食品添加剂使用标准[S].北京：中国标准出版社，2011.

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[5] 冯 峰，杨 烁，凌 云，等.超高效液相色谱-串联质谱快速筛查葡萄酒中14种禁用食品添加剂[J].分析化学研究报告，2011，39（11）：1732-1737.

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[7] 刘 英，尹 州，邹晓筱，等.高效液相色谱法同时测定蜜饯中的16种食品添加剂[J].分析测试学报2011，30（6）：651-655.