陈志平+王岚枫+胡蓉

＼[摘要]目的 分析THP-1巨噬细胞中过表达GPR119对脂质代谢相关基因表达的影响。方法 构建过表达GPR119载体，转染THP-1细胞，用佛波酯（160 nmol/L，48 h）分化成巨噬细胞。NC组：空载体转染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h；GPR119（H）组：过表达GPR119转染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h。检测过表达GPR119转染THP-1巨噬细胞后脂质代谢相关基因表达。结果 过表达GPR119组SR-B1、APOE、LCAT基因表达显著高于NC组表达（P=0.000）。结论 过表达GPR119能引起脂质代谢相关基因表达变化。

[关键词]GPR119；脂质代谢；基因表达；THP-1巨噬细胞

[中图分类号] R446.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）01（c）-0138-03

[Abstract]Objective To investigate the effects of overexpression of GPR119 on expression of genes related to lipid metabolism in THP-1 macrophages.Methods Expression vector GPR119，and transfected into THP-1 cells with phorbol ester （160 nmol/L，48 h） to differentiate into macrophages were constructed.NC group：the empty vector transfected into THP-1 Dil-oxLDL （50 g/ml） 48 h；GPR119 （H） group：over expression of GPR119 transfected with THP-1 Dil-oxLDL （50 g/ml） 48 h.detection of lipid metabolism related genes expression in GPR119 transfected macrophages after THP-1.Results The expression of GPR119 in group SR-B1，APOE，LCAT gene expression were significantly higher than those of control group （P=0.000）.Conclusion Over expression of GPR119 can cause changes in the expression of genes related to lipid metabolism.

[Key words]GPR119；Lipid metabolism；Gene expression；THP-1 macrophage

GPR119是一个新的可能参与调节体内脂质代谢的膜受体[1-2]。GPR119属于G蛋白偶联受体A家族，有7个跨膜区，在胞浆内与三个亚单位（α、β、γ）所组成的G蛋白偶联，主要表达在胰島和胃肠道细胞[3-4]。人源性GPR119的基因定位于Xq26.1，该基因的开放阅读框架仅有一个外显子，不含内含子，编码335个氨基酸。GPR119在治疗2型糖尿病及肥胖的作用有比较深入的研究，并提示GPR119可能参与脂质代谢[5-8]。本文旨在探讨GPR119是否参与脂质代谢，研究过表达GPR119后脂质代谢相关基因的表达。

1资料与方法

1.1细胞培养

THP-1细胞从American Type Culture Collection （ATCC，Manassas，VA，USA）获得，用RPMI-1640培养基培养，RPMI-1640培养基包含10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素，培养环境为37°C，5%CO2。细胞被种植于6孔板或12孔板或60 mm平皿，并且生长到铺满平皿达80%～90%时待用。NC组：空载体转染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h；GPR119（H）组：过表达GPR119转染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h。

1.2主要仪器与试剂

CO2培养箱（美国Thermo公司）；超净工作台（美国Thermo公司）；7500 Fast荧光定量仪（美国ABI公司）；胎牛血清（四季青公司）；Lipofectamine 2000（美国Invitrogen公司）；PrimeScript RRT Enzyme MixI和SYBRRPremix Ex TaqTMII等基因检测试剂（购自Takara公司）。

1.3转染

Lipofectamine 2000过表达GPR119，转染THP-1细胞（按美国Invitrogen公司说明书操作），用佛波酯（160 nmol/L，48 h）分化成巨噬细胞。

1.4基因检测

THP-1巨噬细胞PBS清洗3遍，提取总RNA，并将mRNA反转录成cDNA。……