（天津市动物疫病预防控制中心天津300402）

副猪嗜血杆菌PCR与荧光定量PCR检测方法的建立与比较

张颖，王建春

（天津市动物疫病预防控制中心天津300402）

本试验以副猪嗜血杆菌的农业标准为准绳，将常规PCR和荧光PCR试剂盒进行比对试验，结果显示，二者的特异性均为100%，其灵敏性，常规PCR达1×10-10稀释度，荧光PCR达1×10-12稀释度，后者是前者的100倍，且试验所需时间短，不需要电泳分析，减少核酸染料对人体及环境的污染，是一种安全可靠的检验方法，对该病的确诊及防控由重大意义。

常规PCR；荧光定量PCR；比对

副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌引起的以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为主要特征的全身性疾病。该菌多与其它病原如猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒等混合感染，严重危害了断奶仔猪和保育猪的健康，给养猪业带来巨大的经济损失。

近年来，PCR以其快速、敏感、准确等优点而被广泛用于各种病原微生物的检测。为了优化实验室对该病的检测方法，现将运用常规PCR和荧光PCR法对疑似副猪嗜血杆菌病进行检测，并对其特异性、灵敏性等进行比对，结果报告如下：

1 材料和方法

1.1 样品

1）副猪嗜血杆菌标准菌株（CCVA3729）：购自中国兽医微生物保藏中心；

2）金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌均为本实验室保存；

3）疑似样品来源于临床病例。

1.2 试剂

1）副猪嗜血杆菌核酸扩增检测试剂盒（PCR-荧光探针法）购自广州维柏鑫生物科技有限公司，批号：20160718；

2）副猪嗜血杆菌核酸检测试剂盒购自广州维柏鑫生物科技有限公司，批号：20160718；……