张树娜，李燕子，杨惠林，黄文军，腾小娜

(青海红十字医院，西宁 810000)

以往国内外研究提示长期处于高原低氧环境下，男性精液质量呈下降趋势[1-3]。目前高原低氧环境导致精子浓度降低的机制尚无统一定论。

国外研究[4]发现，精子DNA损伤与精子活力呈负相关性，这提示精子DNA受损是影响男性精液质量因素之一。长期暴露在高原低氧环境下，精子DNA的损伤程度呈加重趋势[5]。细胞周期检测点激酶1(Checkpoint kinase1，Chk1)是细胞周期检测点的转导因子，在DNA损伤引起的周期检测点调节中发挥重要的作用。研究者[6]发现，Chk1表达的下降或失活会影响细胞损伤的修复。西宁地区汉族人群男性不育患者精子中Chk1基因表达情况不明。本研究通过检测正常精子组、少精子组、弱精子组、少弱精子组Chk1基因表达差异，首次探讨中度海拔地区高原低氧环境影响男性精液质量是否与Chk1表达变化有关。

1 材料与方法

1.1 精液标本收集

选择在青海红十字医院生殖中心因不育就诊的世居西宁地区(海拔2250m)汉族男性患者。按《WHO人类精液检查与处理实验室手册》(2010年，第5版)标准[7]，依就诊者精液检查结果分为正常精子组、少精子组、弱精子组和少弱精子组，每组收集标本20份。世界卫生组织依据精子运动能力，将精子活力分为前向运动(Progressive motility，PR)、非前向运动(Non-progressive motility，NP)、不活动(Immotility，IM)三级。精子密度≥15×106/mL，PR≥32%时为正常精子组；精子密度<15×106/mL，PR≥32%时为少精子组；精子密度≥15×106/mL，PR<32%时为弱精子组；精子密度<15×106/mL，PR<32%时为少弱精子组。行精液检查前就诊者需禁欲2～7天，采用手淫取精法，将精液留取至无毒、无菌的取精杯中，然后放置于37 ℃水浴箱内，液化后(15～40分钟)检测pH值。

1.2 主要试剂和仪器选择

ABI-7500型实时检测扩增仪(美国ABI公司)，DYY-6C型电泳仪(北京六一仪器厂)。精液分析系统(WLJY9000，北京伟力公司)。兔单克隆抗体Chk1(EP691Y，凯基生物公司)，小鼠单克隆抗体β-actin(mAbcam 8226，凯基生物公司)。……