周建平，李志芳，梁笠轩，徐 德

(1.攀枝花学院医学院，四川攀枝花 617000；2.攀枝花学院附属医院，四川攀枝花 617000)

肺癌细胞系中KEAP1与NRF2相互作用区域基因突变的检测*

周建平1,2，李志芳1，梁笠轩1，徐 德2

(1.攀枝花学院医学院，四川攀枝花 617000；2.攀枝花学院附属医院，四川攀枝花 617000)

目的 检测非小细胞肺癌细胞系中KEAP1及NF-E2相关因子2(NRF2)相互作用结构域基因的突变情况。方法 以6个非小细胞肺癌细胞系为材料，检测KEAP1基因的第2至第6外显子及NRF2的DLG和ETGE基序编码序列的碱基序列突变情况，推测相应的氨基酸序列变异。同时检测供试细胞系的细胞内活性氧浓度，分析目标序列突变对肺癌细胞抗氧化系统的影响。结果 在KEAP1基因第4外显子区域发现4个所有癌细胞系共有的突变,部分细胞系的第3外显子区域还存在错义突变，所有NRF2-ETGE基序编码序列均存在多重遗传变异。活性氧检测发现供试细胞系活性氧浓度均高于肺胚细胞。结论 KEAP1和NRF2基因相互作用结构域的基因突变在供试细胞系内普遍存在，非小细胞肺癌细胞系对细胞内活性氧浓度失去调控能力是普遍现象。

NF-E2相关因子2；非小细胞肺癌；KEAP1

NF-E2相关因子2(NRF2)是细胞氧化应激反应中的关键转录因子，通过与抗氧化反应元件(antioxidant response element，ARE)相互作用，调控抗氧化蛋白和Ⅱ相解毒酶的表达[1]。NRF2的转录活性受胞浆蛋白(kelch-like ECH-associated protein-1，KEAP1)的负调控[1]。KEAP1通过其BTB区结合Cul3、Kelch区结合NRF2，将NRF2连接到E3复合体，使泛素从E3转移到NRF2的赖氨酸残基(位于ETGE基序、DLG基序之间)，泛素化的NRF2被迅速降解[2-3]。发生氧化应激时，KEAP1特定的半胱氨酸残基被氧化修饰，导致DLG基序与KEAP1的亲和力减弱而分离，从而使NRF2免于泛素化降解。……