王驭风，钱卫，夏澍

(盐城市第三人民医院，江苏盐城224021)

HBV不同感染状态者血清IL-21、IFN-γ水平变化及其临床意义

王驭风，钱卫，夏澍

(盐城市第三人民医院，江苏盐城224021)

目的 探讨不同HBV感染状态者血清IL-21、IFN-γ水平变化及其临床意义。方法 选择HBV感染者74例，根据感染状态分为急性乙肝组15例、慢性HBV携带组17例、慢性乙肝组23例、非活动性HBsAg携带组19例，另选体检健康者20例作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测各组血清IL-21、IFN-γ。结果 急性乙肝组血清IL-21、IFN-γ水平明显高于对照组、慢性HBV携带组、慢性乙肝组和非活动性HBsAg携带组(P均<0.05)；慢性乙肝组血清IL-21水平明显高于慢性HBV携带组(P<0.05)，对照组、慢性HBV携带组、慢性乙肝组和非活动性HBsAg携带组血清IFN-γ水平组间比较均无统计学差异(P均>0.05)。对照组、急性乙肝组、慢性HBV携带组、非活动性HBsAg携带组血清IL-21与IFN-γ水平均呈正相关(r分别为0.896、0.734、0.693、0.701，P均<0.05)，慢性乙肝组血清IL-21与IFN-γ水平无相关性(r=0.359，P>0.05)。结论 血清IL-21和IFN-γ水平可反映HBV感染状态，可作为判断乙肝严重程度的指标。

乙型肝炎病毒感染；白介素21；γ干扰素；发病机制

HBV感染是一个严重的公共卫生问题。据统计，全世界人口中约1/3曾感染HBV，每年约有100万人死于HBV感染所致的疾病[1]。HBV感染慢性化是由病毒本身和宿主免疫状态共同决定的，其中宿主免疫状态是决定HBV感染转归的关键[2]。在急性自限性HBV感染者体内，T细胞介导的免疫反应强烈，可控制和清除病毒，防止宿主再次发生感染；而慢性HBV感染者体内相应T细胞反应缺失，T细胞数量和功能降低，是导致HBV感染慢性化的重要原因[3]。IL-21是由活化的CD4+T细胞分泌的细胞因子，可促进CD8+T细胞增殖并强化其细胞应答反应，而CD4+T细胞辅助CD8+T细胞在控制HBV感染慢性化过程中发挥重要作用[4]。2014年1月～2016年1月，我们观察了HBV感染不同状态者外周血IL-21、

IFN-γ水平及CD4+T细胞、CD8+T细胞在HBV感染慢性化过程中的变化。现分析结果并探讨其机制。

1 资料与方法

1.1 临床资料 同期选择我院收治的HBV感染者74例，其中急性乙肝患者15例(急性乙肝组)，男9例、女6例，年龄(48.82±9.53)岁；慢性HBV携带者17例(慢性HBV携带组)，男12例、女5例，年龄(49.13±10.62)岁；慢性乙肝患者23例(慢性乙肝组)，男15例、女8例，年龄(47.91±8.64)岁；非活动性HBsAg携带者19例(非活动性HBsAg携带组)，男13例、女6例，年龄(48.78±8.39)岁。所有患者符合《慢性乙型肝炎防治指南》(2010年版)中的诊断标准[5]：急性乙肝：无乙肝病史，HBsAg阳性，血清HBcAg-IgM阳性，血清ALT、 总胆红素升高或正常；慢性HBV携带：血清HBcAb、HBeAg、HBsAg和HBV-DNA阳性，肝功能检测指标正常，肝脏B超未见异常；慢性乙肝：血清HBcAb、HBeAg、HBsAg和HBV-DNA阳性，ALT持续升高，乙肝病程超过半年；非活动性HBsAg携带[6，7]：血清HBsAg阳性、HBeAg阴性、抗HBe阳性或阴性，HBV DNA检测不到(PCR法)或低于最低检测限，1年内连续随访3次以上，ALT均在正常范围。排除标准：合并甲肝、丙肝、丁肝、戊肝者；有遗传性肝病、胆汁淤积性肝病和自身免疫性肝炎者；入组前6个月接受过抗HBV和免疫调节治疗者。选择同期在我院体检健康者20例(对照组)，男13例、女7例，年龄(46.8±9.2)岁。各组性别、年龄具有可比性。各组血清ALT、AST水平及乙肝五项检测结果见表1、2。本研究经医院伦理委员会批准，患者均知情同意。

表1 各组血清ALT、AST水平比较

注：与对照组比较，*P<0.05；与急性乙肝组比较，#P<0.05；与慢性HBV携带组比较，△P<0.05；与慢性乙肝组比较，▲P<0.05。

表2 各组乙肝五项检测结果(例)

1.2 血清IL-21、IFN-γ检测 各组均采集晨起空腹静脉血5 mL，3 500 r/min离心10 min，分离血清，-20 ℃冰箱保存。采用双抗体夹心ELISA法检测IL-21、IFN-γ。ELISA试剂盒购于上海恒远生物有限公司，严格按照试剂盒说明操作[6]。分析不同HBV感染状态者血清IL-21与IFN-γ的关系。

2 结果

急性乙肝组血清IL-21、IFN-γ水平显著高于慢性HBV携带组、慢性乙肝组和非活动性HBV携带组(P均<0.05)；慢性HBV携带组和慢性乙肝组血清IL-2、IFN-γ水平显著低于急性乙肝组；见表3。Pearson直线相关分析显示，对照组、急性乙肝组、慢性HBV携带组、非活动性HBsAg携带组血清IL-21与IFN-γ水平均呈正相关(r分别为0.896、0.734、0.693、0.701，P均<0.05)；而慢性乙肝组血清IL-21与IFN-γ水平无相关性(r=0.359，P>0.05)。

表3 各组血清IL-21、IFN-γ水平比较

注：与对照组比较，*P<0.05；与急性乙肝组比较，#P<0.05；与慢性HBV携带组比较，△P<0.05。

3 讨论

HBV感染的临床表现呈多样性。HBV感染是乙型肝炎疾病进展的始发因素，HBV感染后患者的免疫因素在病毒清除、持续感染及肝细胞损伤过程中有重要作用，但其免疫作用机制仍不十分明确。一般认为HBV感染机体后的免疫应答反应(主要是CD4+T细胞和CD8+T细胞参与的免疫机制引起肝细胞的损伤)可影响疾病的演进及转归过程[7，8]。

CD8+T细胞是HBV感染模型中清除病毒最主要的效应T细胞，感染早期由HBV刺激产生的特异性CD8+T细胞具有一定的抗病毒作用，且CD8+T细胞的生成需要活化的HBV相关CD4+T细胞辅助，而慢性HBV感染患者体内往往出现CD4+T细胞功能耗竭[11]。有研究发现，HBV合并HCV感染者CD4+T细胞、CD8+T细胞相互作用共同起到清除病毒作用，故提高慢性HBV感染患者体内CD4+T细胞和CD8+T细胞数量、恢复其功能以达到清除HBV是乙肝治疗的理想终点[12]。

IL-21是2000年发现的一种细胞因子，由活化的CD4+T细胞分泌，在自身免疫性疾病、肿瘤性疾病及控制病毒感染过程中发挥重要作用。有研究证实，IL-21能够促进CD3抗体活化的胸腺细胞，成熟外周血T细胞的增殖，可通过增强CD8+T细胞的活化、增殖促进功能耗竭的CD8+T细胞对病毒的控制，显著提升CD8+T细胞功能，促进B细胞分泌抗体，继而有效清除病毒[13～15]，IL-21水平与HBc18～27特异性的产IFN-γ的CD8+T细胞相关，IL-21可维持CD8+T细胞的抗病毒作用。另有研究发现，在一定程度上病情严重程度与Th17细胞是否处于功能活跃状态呈正相关，Th17细胞是重要的IL-21分泌细胞，可通过IL-21产生相应的免疫效应，在HBV感染炎症损伤严重的重度慢性乙肝的发病机制中起重要作用，在慢加急性肝功能衰竭中较高水平的IL-21可以活化T细胞或B细胞清除病毒感染或通过释放炎性因子损伤肝细胞，也可通过活化肝星状细胞影响HBV感染相关的肝损伤，因此中和IL-21可能是治疗HBV感染相关肝损伤的有效措施。本研究急性乙肝组血清IL-21水平显著高于慢性HBV携带组、慢性乙肝组、非活动性HBsAg携带组和对照组，表明IL-21在急性HBV感染患者体内发挥了促进机体抗病毒免疫反应的作用。本研究HBV携带组(即免疫耐受期患者)血清IL-21水平显著降低，提示IL-21表达降低在HBV感染慢性化中发挥重要作用，慢性乙肝患者体内存在CD4+T细胞功能降低、数量减少，无法发挥其免疫增强功能，抗病毒能力受到抑制[16]。IFN-γ是重要的抗病毒免疫调节细胞因子，其除可通过调节机体免疫反应来抑制HBV的合成外，还可通过非溶细胞机制直接抑制HBV复制。在转基因小鼠的试验中，CD8+T细胞、Th细胞和NK细胞在识别HBV的病毒抗原后会通过分泌IFN-γ抑制肝脏中的HBV复制。Suri等[17]研究发现，IFN-γ除能通过调节机体免疫反应抑制HBV的转录和复制外，还能通过非细胞溶解/损伤机制直接抑制肝细胞内HBV的复制[18]。本研究急性乙肝组血清IFN-γ水平明显高于HBV携带组和非活动性HBsAg携带组，IFN-γ水平变化呈现急性乙肝组>慢性乙肝组>HBV携带组的趋势，与以往研究报道相似。

本研究还发现，IL-21和IFN-γ在不同HBV感染者体内具有良好的相关性，其原因可能为IL-21主要由CD4+T细胞分泌，能促进CD8+T细胞增殖并且强化CD8+T细胞抗病毒功能，而IFN-γ是CD8+T细胞功能活化的指标，可以反映CD8+T细胞功能，CD4+T细胞活化产生大量IL-21，从而促进了CD8+T细胞的抗病毒能力。

综上所述，血清IL-21和IFN-γ水平可反映HBV感染状态，可作为判断乙肝病情严重程度的指标。

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