訾永宏, 姬 乐, 陈红梅, 李艳东

(1延安大学附属医院普外科， 延安 716099； 2延安职业技术学院护理系； 3西安医学院第一附属医院病理科)

Arl4c在结肠癌中的表达及其临床意义

訾永宏1, 姬 乐1, 陈红梅2, 李艳东3

(1延安大学附属医院普外科， 延安 716099；2延安职业技术学院护理系；3西安医学院第一附属医院病理科)

目的 探讨ADP-核糖基化样因子4C(ADP-ribosylation factor-like 4C，Arl4c)在结肠癌中的表达以及与临床病理特征的关系。 方法 收集结肠癌组织标本70例和正常结肠黏膜组织标本70例，采用免疫组织化学方法检测结肠癌组织及正常结肠黏膜中Arl4c的表达情况，并对其表达进行临床病理特征分析。 结果 Arl4c在结肠癌组织中阳性表达率为55.7%，而在正常结肠黏膜中为11.4%，差异具有统计学意义(P<0.05)。Arl4c在结肠癌中的表达在不同病理分化程度间差异有统计学意义(P<0.05)，在不同性别、不同年龄、不同临床分期及有无淋巴结转移的患者中差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 Arl4c在结肠癌中过表达，可能参与了结肠癌的发生发展，将可能成为结肠癌诊断治疗的新靶点。

Arl4c； 结肠癌； 靶向治疗

ADP-核糖基化样因子4C(ADP-ribosylation factor-like 4C，Arl4c) 是Arl家族的成员，是ADP-核糖基化因子(ADP-ribosylation factor，Arf)的亚家族成员之一[1]。Arl在细胞内的囊泡运输和信号转导过程中具有重要作用，但其在体内的具体功能还没有进一步的深入研究，近来Arl的生物学功能成为研究的热点[2,3]。研究显示Arl4c在肺癌中过表达[2]，关于结肠癌中Arl4c的研究报道较少，本课题对Arl4c在结肠癌中的表达进行研究，期望对结肠癌的诊断治疗带来新的思路，为对Arl4c的进一步研究奠定基础。

1 材料和方法

1.1 材料

收集延安大学附属医院2011-06～2014-03经手术病理检查的存蜡块标本，其中结肠腺癌组织标本70例，癌旁正常结肠黏膜标本70例。兔抗人Arl4c抗体购自英国Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学染色 将经多聚甲醛固定、石蜡包埋的组织标本连续切片， 脱蜡、抗原修复，进行免疫组化检测。免疫组化采用SP法，按照试剂说明书进行，DAB显色，苏木素复染，每组染色均用PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.2.2 免疫组化结果判定 Arl4c阳性产物呈棕黄色颗粒状，定位于细胞质，选取10个高倍视野，按照阳性细胞比例：阴性为0分，阳性细胞数<10%为1分，阳性细胞数10%-50%之间为2分，阳性细胞数50%-80%为3分，阳性细胞数>80%为4分；染色强度按着色程度分为：无染色为0分，黄色为弱阳性为1分，浅棕色为2分，棕褐色为3分，总分为2项评分之和，取总分≥4分为阳性表达。

1.3 统计学处理

采用SPSS13.0统计软件对实验结果进行统计学分析，采用χ2检验及Fisher确切概率法,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Arl4c在结肠腺癌中的表达

免疫组织化学染色显示Arl4c主要表达于结肠癌细胞胞质，70例结肠腺癌中Arl4c阳性表达为39例，阳性率为55.7%，而正常结肠黏膜仅8例表达，阳性率11.4%(见图1，表1)。结果显示Arl4c在结肠腺癌中的表达明显高于正常结肠黏膜中的表达，其差异具有统计学意义(P<0.05)。

表1 结肠癌和正常结肠黏膜组织中Arl4c的表达情况 例(%)

Table 1 Expression of Arl4c in colon cancer and normal colon epithelium cases(%)

分组n阳性阴性χ2P结肠腺癌7039(55．7)∗31(44．3)30．78<0．01正常结肠黏膜708(11．4)62(88．6)

与正常结肠黏膜相比，*P<0.05

图1 Arl4c在结肠癌组织及正常结肠黏膜中免疫组织化学的表达Figure 1 Immunohistochemical expression of Arl4c in colon cancer and normal colon epithelium

2.2 结肠癌组织中Arl4c蛋白的表达水平与临床病理因素的关系

Arl4c在结肠腺癌中的表达在不同性别、不同年龄、不同临床分期及是否有淋巴结转移的患者中差异无统计学意义(均P>0.05)，但在不同病理分化程度间差异有统计学意义(P<0.05，见表2)。

3 讨论

Arl4c，也称为Arl7，是含有192个氨基酸的属于小GTP酶的蛋白[4]。Arl4c是Arf和Arl家族成员中的特殊成员，其特殊性在于其是唯一mRNA表达由肝脏X受体 - 类视黄醇X受体激动剂或人巨噬细胞中的胆固醇负载诱导，Arl4c可能在AI(apoA-I)依赖性胆固醇分泌过程中起作用并且可以通过与微管的相互作用调节细胞内囊泡运输[5]。Arl4c蛋白在其C-末端含有核定位信号，在细胞膜、细胞质中都可以存在，其功能和定位取决于它们受控的GTP的结合和水解[6]。研究显示Arl4c可能在胆固醇代谢紊乱中起着重要的角色[7]。

Arl4c与肿瘤的关系及其生物学功能仍然很大程度上未知，Fujii等[2]研究显示Arl4c在肺癌中高表达，而在正常肺组织中未见表达，认为Arl4c参与肺癌的发生，并且可能用于抑制肺癌细胞增殖和侵袭的新的靶向治疗，同时认为Arl4c表达的增加是由于APC、β-连环蛋白及Ras的遗传改变，使得Wnt和EGF信号通路被活化，促进肿瘤的发生。但是Su等[3]研究显示高表达Arl4c可以抑制卵巢癌细胞的迁移，但是对肿瘤细胞的增殖没有影响，并且高表达Arl4c mRNA的卵巢癌患者具有良好的预后。因此Arl4c在不同肿瘤中表达情况不同犹如其庞大的未知的生物学功能一样值得探讨。

表2 Arl4c的表达与临床病理因素的关系

Table 2 Relationship between Arl4c expression in colon cancer and clinicopathological characteristics

项目n阳性阴性χ2P性别0．035>0．05 男372116 女331815年龄0．875>0．05 ≤60岁341717 >60岁362214分化11．199<0．05 高分化26818 中分化332211 低分化1192临床分期0．849>0．05 Ⅰ1367 Ⅱ311714 Ⅲ+Ⅳ261610淋巴结转移0．466>0．05 有21138 无492623

本研究显示Arl4c在结肠癌中过表达，表达率为55.7%，而在正常结肠黏膜中表达率仅为11.4%。这一结果与Fujii等[2]的研究结果是基本一致的，其研究中正常黏膜不表达。Matsumoto等[8]报道Wnt和生长因子信号传导诱导Ar14c表达。 Arl4c在结肠癌与正常黏膜中表达的差异为以Arl4c为靶点的结肠癌的靶向治疗带来了期望。

结肠癌是胃肠道常见的肿瘤，严重危害着人类生命健康，随着诊断技术及治疗的进步，5年生存率仅为50%。结肠癌的发生是多基因多阶段的过程，现代靶向技术的不断进步，使得对结肠癌相关基因的探讨变得更有意义。

本研究显示Arl4c的表达在结肠癌不同性别、不同年龄、不同临床分期及有无淋巴结转移的患者中差异无统计学意义，而在不同病理分化的患者中差异有统计学意义。因此Arl4c过表达可能在结肠癌的发生及早期发展中起到重要作用，提示其可能是有价值的肿瘤治疗的新靶点。有研究认为Ar14c是通过Wnt /β-连环蛋白通路参与上皮-间质转化，这一转化途径是肿瘤发生的起始事件[9,10]。Arl4c有太多的未知需要我们去研究，Arl4c在结肠癌发生发展中的作用及机制，需要我们进一步深入研究。

[1] Gillingham A,Munro S.The small G proteins of the Arf family and their regulators[J].Annu Rev Cell Dev Biol,2007,23:579-611.

[2] Fujii S,Matsumoto S,Nojima S,etal.Arl4c expression in colorectal and lung cancers promotes tumorigenesis and may represent a novel therapeutic target[J].Oncogene,2014,12:1-11.

[3] Su D,Katsaros D,Xu SH,etal.ADP-ribosylation factor-like 4C(ARL4C),a novel ovarian cancer metastasis suppressor,identified by integrated genomics[J].Am J Transl Res,2015,7(2):242-256.

[4] Burd C,Strochlic T,SR GS.Arf-like GT-Pases:not so Arf-like after all[J].Trends Cell Biol,2004,14:687-694.

[5] Wei SM,Xie CG,Abe Y,etal.ADP-ribo-sylation factor like 7(ARL7) interacts with alpha-tubulin and modulates intracellular vesicular transport[J].Biochem Biophys Res Commun,2009,384:352-356.

[6] Hofmann I,Thompson A,Sanderson C,etal.The Arl4 family of small G proteins can recruit the cytohesin Arf6 exchange factors to the plasma membrane[J].Curr Biol,2007,17:711-716.

[7] Sun D,Zhang J,Xie JH,etal.MiR-26 controls LXR-dependent cholesterol efflux by targeting ABCA1 and ARL7[J].FEBS Letters,2012,586:1472-1479.

[8] Matsumoto S,Fujii S,Sato A,etal.A combination of Wnt and growth factor signaling induces Arl4c expression to form epithelial tubular structures[J].EMBO J,2014,33:702-718.

[9] Gujral TS,Chan M,Peshkin L,etal.A noncanonical Frizzled2 pathway regulates epithelial-mesenchymal transition and metastasis[J].Cell,2014,159:844-856.

[10] Arend RC,Londono-Joshi AI,Straughn JM Jr,etal.The Wnt/beta-catenin pathway in ovarian cancer:a review[J].Gynecol Oncol,2013,131:772-779.

Expression of Arl4c in colon cancer and its clinical pathological significance

ZI Yonghong1,JI Le1,CHEN Hongmei2,LI Yandong3

(1DepartmentofGeneralSurgery,AffiliatedHospitalofMedicalCollege,Yan’anUniversity,Yan’an716099,China;2DepartmentofNursing,Yan’anVocationalandTechnicalCollege;3DepartmentofPathology,FirstAffiliatedHospital,Xi’anMedicalUniversity)

ObjectiveTo explore the expression of Arl4c in colon cancer and its relationship with clinical pathological parameter of colon cancer.MethodsA total of 70 cases of colon cancer and 70 cases of normal colon epithelium were collected. The expression of Arl4c was measured by immnohistochemistry. The relationship between the expression of Arl4c and the clinical pathological parameter of colon cancer was analyzed.ResultsThe positive expression rate of Arl4c in colon cancer tissues was 55.7%, significantly higher than that in normal colon epithelium(P<0.05).Positive expression of Arl4c was correlated with the differentiation(P<0.05),but not correlated with gender, age, stage and lymph node metastasis(P>0.05).ConclusionArl4c is overexpressed in colon cancer,and it may be involved in colon cancer progression, and is considered as an attractive target for novel anticancer therapy.Key words: Arl4c； colon cancer； target therapy

陕西省教育厅科研计划基金资助项目(12JK0765)

訾永宏, 男，1982-02生，本科，主治医师，E-mail：ziyonghong2016@163.com

2016-10-25

R735.35

A

1007-6611(2017)01-0044-03

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.01.010