李佳杏++孙蓉��

【摘要】目的：建立控制健脾颗粒的质量标准。方法：采用薄层色谱法对健脾颗粒中白术、橙皮苷进行鉴别；用高效液相色谱法测定制剂中橙皮苷的含量，采用十八烷基硅烷键合硅胶柱（Agilent XDB C18柱；4.6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液（19∶[KG-*3/5]81），流速为1.0mL/min，柱温为30℃，检测波长：283nm。结果：定性鉴别方法能检出白术、橙皮苷，且薄层色谱中阴性无干扰，专属性强；橙皮苷的线性范围为0.131～4.192mg，平均加样回收率为100.26%，RSD为2.21%。结论：该方法简便、准确，重现性好，可用作健脾颗粒的质量控制。

【关键词】健脾颗粒；橙皮苷；白术； HPLC

【中图分类号】R914.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）01-0023-03

Abstract：

Keywords：

健脾颗粒的处方来源于部颁中药成方制剂第二册[1]（标准号：WS3-B-0381-90），由党参、炒白术、陈皮等6味药组成，具有健脾开胃的功效，临床用于脾胃虚弱，脘腹胀满，食少便溏。原标准中无含量测定项和薄层色谱鉴别项，为了能全面地控制其药品质量，本文通过对处方中的组分进行薄层色谱鉴别试验研究，确定白术、橙皮苷的薄层色谱鉴别方法。同时对陈皮、枳实中橙皮苷进行了含量测定试验。通过多次反复试验，确定该方法简捷，效果好，可用于本品的质量控制方法。

1仪器与材料

1.1仪器B3200S-T超声机（上海必能信超声）；高效液相色谱仪（美国Agilent 1100液相色谱仪系统）。

1.2材料橙皮苷对照品（批号：110712-201010）、白术对照药材（批号：120925-201109）等均购自中国药品生物制品检定所；健脾颗粒（昆明中药厂有限公司提供，规格：5g/袋）；高效进样使用的乙腈、甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1薄层色谱鉴别

2.1.1白术的薄层色谱鉴别取本品10g，研细，加40mL乙酸乙酯和5mL水，振摇2min，倾取上清液，残渣续加乙酸乙酯30mL，振摇1min，合并上清液，每次分别用20mL 3%碳酸钠溶液振摇提取3次，取碱水液，用浓盐酸调pH值至2～3，每次用20mL乙酸乙酯振摇提取3次，分取乙酸乙酯液，用水30mL洗涤，分取乙酸乙酯液，蒸至近干，加甲醇0.5mL制成供试品溶液[2]。另外取0.5g白术对照药材，加30mL水置150mL烧杯中煮沸，保持微沸30 min，滤过后保留残渣继续加水20mL煮沸，保持微沸20min，用脱脂棉滤过煎液，合并剩余的煎液并浓缩至约1mL，放冷，加乙酸乙酯15mL混合，“自振摇2min”起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验[3]，吸取上述供试品溶液15～20μL，白术对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（7∶3）为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热3～5 min，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果见图1。

2.1.2橙皮苷的鉴别取适量本品研细，称取2g，加20mL甲醇，超声30min，用定性滤纸滤过，将滤液蒸至近干，加2mL甲醇溶解制成供试品溶液。另取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液[2]。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验[3]，吸取供试品溶液2～4μL，对照品溶液4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（100∶[KG-*3/5]17∶[KG-*3/5]13）为展开剂，展开至约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20∶[KG-*3/5]10∶[KG-*3/5]1∶[KG-*3/5]1）的上层溶液为展开剂，展至8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果见图2。

2.2含量测定

2.2.1色谱条件色谱柱：采用十八烷基硅烷键合硅胶柱（Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱），流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液（19∶[KG-*3/5]81），流速为1.0mL/min，柱温为30℃，检测波长：283nm。按橙皮苷峰的理论塔板数计算应不应低于2000。见图3。

2.2.2对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇溶解，制成每1mL含524μg的溶液，即得[2]。

2.2.3供试品溶液的制备取本品适量，研细，取2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25mL，密塞，称定重量，超声处理（功率160W，频率50kHz）30min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4阴性对照溶液的制备取处方中除陈皮、枳实外的其他药材，按处方剂量及制法和工艺要求制备缺陈皮、枳实的空白样品，照含量测定项下供试品溶液的制备方法制成阴性对照样品溶液，同法进行测定，结果在与对照品橙皮苷相同的保留时间位置，无其他干扰峰出现，表明除陈皮、枳实外的其他药材和辅料对橙皮苷测定无干扰。见图3。

2.2.5线性关系考察精密取上述对照品溶液分别稀释成13.1、26.2、52.4、104.8、209.6、419.2g/mL的对照品溶液，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积；以峰面积积分值为纵坐标，以橙皮苷进样量（mg）为横坐标作线性回归，绘制标准曲线，得回归方程：Y=1471.42326X-10.75587（r=0.99974），结果表明，橙皮苷在0.131～4.192mg之间呈良好线性关系。

2.2.6精密度试验按照测定方法，制备同一橙皮苷对照品溶液，精密吸取10μL重复进样8次，测定其峰面积值。相对标准偏差（RSD）为0.03%。

2.2.7稳定性试验取141106批同一供试品溶液，设定分别在0、2、4、6、8、10h进样10μL，按以上色谱条件进行测定。测得其峰面积值，RSD=0.252%，结果表明，在10h内供试品溶液中的橙皮苷稳定。

2.2.8重复性试验取批号为141106（5g/袋，相当于饮片4g）的健脾颗粒，供试品制备方法分别制备9份供试品溶液，测定橙皮苷含量，平均含量为1.1133mg/g，RSD为1.48%。

2.2.9加样回收率试验取已知含量的健脾颗粒样品（批号：141106，橙皮苷含量：1.1133mg/g），添加橙皮苷对照品，按正文中含量测定方法测定橙皮苷含量，计算回收率，表明法有良好的回收率。结果见表1。

2.2.10样品测定取6批健脾颗粒样品分别按上述含量测定方法测定橙皮苷含量。测定结果见表2。

3讨论

研究以党参对照药材作为对照，参照中国药典一部党参项下相关内容进行本品TLC试验。试验结果：斑点模糊，色谱通道颜色较深，特征斑点不易检视。又多次试验其他提取方法和展开剂，结果：阴性有干扰。

在山楂的薄层鉴别中，参照药典方法，以山楂对照药材作对照，试用过多种提取方法和展开剂，进行薄层色谱试验研究。结果：供試品色谱中均无明显对应斑点。

在麦芽薄层鉴别，以麦芽对照药材作为对照，参照《中国药典》一部麦芽项下相关方法进行本品TLC试验。试验结果：供试品色谱在与麦芽对照药材的色谱相对应的位置上显相同颜色荧光斑点，阴性供试品无相对应的斑点，但供试品色谱中对应斑点不明显，增加取样量后，斑点无明显改善，故此方法未采用。

参考文献

[1] 国家药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂（第九册）.WS3-B-0381-90.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（四部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015.

（编辑：穆丽华）