王金兰，李龙伟，孙英华，何仲贵*



美洛昔康二乙胺盐贴剂的制备及渗透性和释放度的考察

王金兰1，李龙伟2，孙英华2，何仲贵2*

（1. 沈阳药科大学 中药学院，辽宁 沈阳 110016；2. 沈阳药科大学 药学院，辽宁 沈阳 110016）

目的制备美洛昔康二乙胺盐贴剂，考察3种中药促渗剂对贴剂渗透性的影响，并进行释放度的测定。方法采用DURO-TAK®87-4098压敏胶为基质制备贴剂；采用卧式双室扩散装置，以离体兔皮为屏障，比较不同种类中药促渗剂和不同浓度薄荷醇贴剂的累积透过量24、渗透速率s、渗透系数、增渗倍数和时滞时间t，选出最佳促渗剂，验证处方，考察释放度。结果中药促渗剂的促渗能力依次为：薄荷醇＞冰片＞桉叶油；薄荷醇的促渗作用具有浓度饱和性，优选中药促渗剂质量分数5%薄荷醇的24为8.031×10-5g·cm-2，s为4.016 8 ×10-6g·cm-2·h-1，为5.08，t为0 h；3批贴剂24 h累积释放量分别为38.6%、39.5%和38.5%。结论制备的美洛昔康二乙胺盐贴剂具有良好的经皮渗透性和释放度。

药剂学；贴剂；中药促渗剂；美洛昔康二乙胺盐；渗透性；释放度

美洛昔康（meloxicam）是一种新型烯醇酸类非甾体抗炎药，有较强的抗炎、镇痛作用，可有效治疗类风湿性关节炎和骨炎等慢性疾病[1]。据报道，美洛昔康具有肝、肾毒性和不良反应[2]。因此，作者考虑将其制成经皮给药制剂。但是美洛昔康溶解性极差，不易制成贴剂，有文献报道[3]，美洛昔康与二乙胺合成有机盐能显著提高美洛昔康的透过速率，增加溶解度，进而增大药物的经皮吸收，故合成了美洛昔康二乙胺盐并制成贴剂。

经皮给药系统是一种有前途的新剂型，是第三代药物制剂开发研究的中心内容之一[4]。但是，由于皮肤的天然屏障作用，药物的经皮促渗效果并不明显。因此，加入促渗剂是一个较为理想的方法。中药促渗剂是一类天然的透皮促渗剂，有促渗效果好和刺激性小的优点[5]，故作者考察了薄荷醇、冰片、桉叶油3种中药促渗剂和薄荷醇用量对美洛昔康二乙胺盐贴剂体外透过的影响，通过经皮渗透结果，选出最佳促渗剂。释放度系指药物从缓释制剂、控释制剂、肠溶制剂及透皮贴剂等在规定条件下释放的速率和程度，是评价药物制剂质量的内在指标，也是制剂质量控制的重要手段[6]。故作者对渗透性良好的贴剂进行释放度考察，为美洛昔康二乙胺盐贴剂的质量控制提供参考依据。

1 仪器与材料

TM-1药物透皮吸收扩散装置（沈阳天美达科学仪器有限公司），SC-15超级恒温槽（宁波新芝科器研究所），Chromaster高效液相色谱仪（日本Hitachi 日历高新技术公司），AR1140电子天平（上海奥豪斯国际贸易有限公司），KQ-100超声波清洗器（昆山超声仪有限公司），DF-101S集热式恒温磁力搅拌器（巩义英峪予华仪器厂），宠物用电推剪KP-3000（深圳科德士电器有限公司），电动剃须刀（吉列博朗（上海）有限公司）。

美洛昔康原料药（宁夏康亚药业有限公司，纯度质量分数＞99.7%，批号4020107），美洛昔康二乙胺盐（MXDEAL，自制，批号20140324），DURO-TAK®87-4098压敏胶（美国国民淀粉公司），薄荷醇、冰片、桉叶油（药用级，江西恒诚天然香料油有限公司），乌拉坦（天津光复精细化工研究所）。二乙胺（分析纯，天津科密欧化学试剂有限公司），氯仿、乙酸铵、氢氧化钠（分析纯，天津博迪化工股份有限公司），无水乙醇（分析纯，天津富宇精细化工有限公司），丙酮（分析纯，天津凯信化工工业有限公司），甲醇（色谱纯，天津康科德科技有限公司），磷酸二氢钾（分析纯，西陇化工股份有限公司）。

日本大耳白雄性家兔，体质量1.5～2.0 kg，10只，沈阳药科大学实验动物中心提供，合格证号 SCXK（辽）2011-0002。

2 方法与结果

2.1 美洛昔康二乙胺盐贴的制备

2.1.1 美洛昔康二乙胺盐的制备

将美洛昔康混悬于氯仿中，搅拌下滴加相当于美洛昔康5倍摩尔量的二乙胺，溶液变澄清。旋转蒸发，得到黄色油状黏稠物。用丙酮重结晶。将得到黄色油状黏稠物加入适量丙酮加热回流至全溶，趁热抽滤，滤液放置析晶。得到黄色美洛昔康二乙胺盐固体。

2.1.2 美洛昔康二乙胺盐贴剂的制备

将自制美洛昔康二乙胺盐加入洁净的烧杯中，加入适量丙酮和无水乙醇，超声使药物溶解，加入处方量的促渗剂搅拌使混合均匀，加入DURO-TAK®87-4098压敏胶，置于磁力搅拌器上搅拌2 h，待药物溶液与压敏胶混匀后，静置脱气泡，在防黏层上铺成约0.9 mm厚度的湿胶，室温下自然挥干20 min后，表面覆盖上背衬层，裁剪，得到贴剂(4 cm × 5 cm)。

2.2 离体兔皮的制备

取健康雄性家兔(1.5~2.0 kg)，用200 g∙L-1乌拉坦溶液耳缘静脉注射麻醉后，立即用宠物电推剪剪去腹部皮肤的兔毛，再用剃须刀小心除去短毛。将处理好的家兔耳缘静脉注射空气处死，剥离腹部皮肤，并剪成合适大小。将取下的皮肤角质层朝下平铺固定于木板上，用眼用手术小剪刀除去皮下脂肪层及结缔组织，用生理盐水冲洗干净后，置于密封塑料袋中，放入-20 ℃冰柜中保存（2周内使用）[7]。实验前检查兔皮完整性，确保皮肤没有任何损伤。

2.3 离体经皮渗透试验方法的建立

2.3.1 液相色谱条件

色谱柱：Waters C18反相柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-1 g∙L-1乙酸铵（体积比55∶45）；柱温：室温；检测波长：360 nm；流速：1.0 mL·min-1；进样量：20 µL[8]。理论塔板数按美洛昔康计不少于2 000，在该色谱条件下，经皮渗透样品峰形良好，且阴性无干扰，其结果见图1。

Fig. 1 The chromatograms of the blank solution with rabbit skin (A) and meloxicam reference (B)

2.3.2 对照溶液的制备

取美洛昔康约75 mg，精密称定。置于100 mL 量瓶中，用碱性甲醇溶液（甲醇与1 mol·L-1NaOH的体积比为50∶3）使其溶解，并定容至刻度，摇匀。再精密移取1 mL置于100 mL 量瓶中，用pH值7.4磷酸盐缓冲液定容至刻度，制得质量浓度约为7.5 mg·L-1的美洛昔康对照溶液。

2.3.3 标准曲线的制备

取美洛昔康二乙胺盐约24 mg，精密称定，用甲醇配成质量浓度为20.12 mg·L-1（以美洛昔康计）储备液。取上述储备液逐级稀释，制得质量浓度分别为0.10、1.01、3.02、10.06、14.08 和20.12 mg·L-1的美洛昔康二乙胺盐系列标准溶液，按“2.3.1”条色谱条件测定，以峰面积（）对质量浓度（）进行线性回归，得回归方程为=5.184 5×104+928.16，=0.999 9。结果表明，药物的质量浓度在0.10~20.12 mg·L-1内与峰面积线性关系良好。

2.3.4 精密度和回收率试验

取“2.3.3”条下质量浓度为3.02 mg·L-1的美洛昔康二乙胺盐标准溶液，连续测定6次，计算得峰面积的RSD＜2%，表明仪器精密度良好。按“2.3.3”条方法配制低（2.4 mg·L-1）、中（3.0 mg·L-1）、高（3.6 mg·L-1）3种质量浓度的供试溶液（以美洛昔康计），另配制质量浓度约为3.0 mg·L-1的美洛昔康二乙胺盐溶液作为对照溶液，同法测定。结果美洛昔康二乙胺盐的回收率在98%～102%内，表明该方法准确可靠。

2.3.5 稳定性试验

取“2.3.3”条下质量浓度为3.02 mg·L-1的美洛昔康二乙胺盐溶液于室温下避光放置，并在0、2、4、6、8、10、12和24 h分别进样分析，计算得峰面积的变化率RE＜2%，表明溶液在室温避光条件下24 h内稳定性良好。

2.4 贴剂的体外经皮渗透试验方法

采用卧式双室扩散池进行体外经皮渗透试验，有效扩散面积为0.95 cm2。首先将离体皮肤解冻，滤纸拭干水分，贴剂贴敷在角质层上，皮肤内侧朝向接收池，固定在卧式双室扩散池之间，在接收池中加入pH值7.4的PBS缓冲溶液3.6 mL作为接收液，(32±0.5) ℃恒温水浴，并用磁力搅拌器恒速搅拌。在2、4、6、8、10、12和24 h分别取样2 mL，然后向接收池补加等量的空白接收液，样品于1.3×104r∙min-1低温离心10 min后，用0.22 μm微孔滤膜过滤。精密量取续滤液20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。另取“2.3.2”条下对照溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

2.5 数据处理

药物的累积透过量可按以下公式计算：

，= 1, 2, 3, …

其中为单位面积累积透过量，为扩散池的体积 (3.6 mL)，V为每次取样体积(2 mL)，ρ1和ρ分别为第-1次和第次取样时接收液中药物的质量浓度，为有效扩散面积 (0.95 cm2)。以单位面积的累积透过量对时间作图，直线部分的斜率即为稳态通透速率(s, g·cm-2·h-1)，直线与轴的交点为滞后时间 (t,h)。

2.5 压敏胶的选择

在贴剂中，压敏胶不仅仅是黏合剂，同时还担任药库或载体的角色，对贴剂的透过性能起着至关重要的作用[9]。聚丙烯酸类压敏胶中的羧基能够与药物分子中的氢受体或供体发生氢键作用，使药物与压敏胶结合得更为紧密，而不易从压敏胶中释放。实验中选择了不含任何功能基团的DURO-TAK®87-4098丙烯酸酯类压敏胶。

2.6 含药量的选择

一般而言，随着含药量的增加，药物的经皮渗透性也会相应提高。本实验中，当药物的质量分数为10%时，药物在搅拌过程中会析出；当药物的质量分数为7%时，搅拌过程中药物不析出，但室温放置4 h后，胶液会变混浊；当药物的质量分数为5%时，药物不会析出，胶液放置后也不会变混浊。因此，将含药的质量分数定为5%，此时，24为 (15.79±0.31)×10-6g·cm-2，s为7.369×10-7g·cm-2·h-1，因此，考虑加入促渗剂以增加药物的经皮渗透性。

2.7 中药促渗剂对美洛昔康二乙胺盐贴经皮渗透的影响

2.7.1 单一中药促渗剂对美洛昔康二乙胺盐贴经皮渗透的影响

按“2.1.2”条方法操作，在贴剂中分别加入质量分数为5%的薄荷醇、冰片、桉叶油制备成贴剂后，按“2.4”条方法进行离体经皮渗透试验，结果见表1。

Table 1 The penetration parameters of MXDEAL-patch with different Chinese herbal penetration enhancers (n=3, ± s)

表1 不同中药促渗剂对美洛昔康二乙胺盐的经皮渗透性(n=3, ± s)

Table 1 The penetration parameters of MXDEAL-patch with different Chinese herbal penetration enhancers (n=3, ± s)

Enhancers1×106Q24/(g·cm-2)Regression equationR1×106Js/(g·cm-2·h-1)P/(cm·h-1)tlag/hER Blank15.79±0.31Q =0.736 9 t -0.97560.997 40.736 97.5×10-31.323 91.00 Eucalyptus oil23.59±2.02Q =1.094 0 t-1.62900.998 31.094 01.11×10-20.465 91.49 Borneol51.46±29.04Q =2.529 6 t +1.01680.996 72.529 62.56×10-203.26 Menthol80.31±4.93Q =4.016 9 t +2.45310.996 34.016 94.06×10-205.08

结果表明，3种中药促渗剂均能促进药物的经皮吸收，促渗能力依次为：薄荷醇＞冰片＞桉叶油。

2.7.2 不同质量分数的薄荷醇对美洛昔康二乙胺盐贴剂经皮渗透的影响

按“2.1.2”条方法操作，在贴剂中分别加入质量分数1%、3%、5%和7%薄荷醇，按“2.4”条方法进行离体经皮渗透试验，结果见表2。

Table 2 The penetration parameters of MXDEAL-patch with different percentages of menthol (n=3, ± s)

表2 不同质量分数的薄荷醇对美洛昔康二乙胺盐贴的经皮渗透性(n=3, ± s)

Table 2 The penetration parameters of MXDEAL-patch with different percentages of menthol (n=3, ± s)

w(menthol)/%1×106Q24/(g·cm-2)Regression equationR1×106Js/(g·cm-2·h-1)P/(cm·h-1)tlag/hER 117.55±1.32Q =0.917 9 t-1.316 40.997 10.917 99.3×10-31.434 11.11 339.13±2.86Q =1.929 9 t-1.618 10.998 01.929 91.95×10-20.838 42.48 580.31±4.93Q =4.016 9 t +2.453 10.996 34.016 94.06×10-205.08 789.39±6.25Q =4.01 9 t +0.702 70.998 74.019 04.06×10-205.66

结果表明，随着薄荷醇质量分数的增大，其促透作用逐渐增强，当薄荷醇质量分数增加到7%时，其24与质量分数5%的24相比无明显增加，且渗透系数相同，均无时滞时间，说明薄荷醇的促渗能力具有浓度饱和性，综合考虑，选择质量分数5%薄荷醇作为优选单一促渗剂。

2.8 美洛昔康二乙胺盐贴剂释放度的考察

按上述筛选的最优处方制备美洛昔康二乙胺盐贴剂3批（每批200贴），根据《中华人民共和国药典》2010版二部附录XD中所载的第三法，搅拌桨、溶出杯按溶出度测定法（附录XC第二法），但是另外需要用网碟组成其桨碟装置。

以脱气的pH值7.4的PBS 900 mL为释放介质，预温至( 32 ±0.5) ℃，转速50 r·min-1，贴剂面积为20 cm2，将贴剂固定于两层网碟之间，释放面朝上，再将网碟置于溶出杯下部，并使贴剂与桨底旋转面平行，网碟上表面与桨底旋转面之间的距离为( 25±2) mm。设置完成后，开始搅拌，并于第2、4、6、8、10、12和24 h分别取样5 mL，取样位置在介质液面与桨叶上端之间正中，离杯壁不得少于l cm。取样后补充等量的空白释放介质。将样品经0.22 μm的微孔滤膜滤过，收集续滤液，精密量取20 μL注入液相色谱仪，按“2.3.1”条色谱条件进行测定，记录峰面积。另取美洛昔康适量，精密称定，用释放介质配成质量浓度约为10 mg·L-1的对照溶液，与样品溶液在相同条件下测定，记录峰面积，按外标法计算样品浓度，结果见图2。

—20141202; —20141119-1; ▲—20141119-2

由图2可知，贴剂于第2、8和24小时的累积释放量分别达到10%~15%、20%~30%和35%~45%。

3 讨论

3.1 接收液和释放介质的选择

人体皮肤及体液为近中性，经皮渗透性实验首选pH值7.4磷酸盐缓冲液作为接收液，且前期实验研究结果表明美洛昔康二乙胺盐在pH值7.4磷酸盐缓冲液中的平衡溶解度为6 053.07 mg·L-1，透皮装置有效扩散面积0.95 cm2，贴剂中的药物全部溶解于3.6 mL接收液中的质量浓度为98.96 mg·L-1，远远低于美洛昔康二乙胺盐的平衡溶解度，符合漏槽条件，同理，释放度测定中也符合漏槽条件，所以选择pH值7.4磷酸盐缓冲液作为接收液和释放介质。

3.2 渗透性和释放度

传统中药促渗剂具有良好的促渗作用，薄荷醇、冰片和桉叶油均能改变角质层的类脂双分子层结构，增加其流动性和药物在其中的分配[10]。本实验中薄荷醇和冰片均有较好的透皮促渗效果，而桉叶油的促渗能力最弱，这与文献的结果不一致[11-12]，说明中药促渗剂的促渗作用与药物的结构有关，其具体适用于哪种结构的药物还有待进一步的考察，对于美洛昔康二乙胺盐贴剂来说，薄荷醇有其优越的促渗效果。作者还对最优处方进行了释放度测定，结果显示，贴剂的释放度低，但是《中华人民共和国药典》规定，贴剂的释放度用于检查工业化生产的批间均一性，与经皮渗透性不完全相关，经释放度测定，得知贴剂均一性良好，为下一步贴剂的质量控制提供了参考依据。

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(本篇责任编辑：赵桂芝)

Preparation of MXDEAL-patches and investigation of penetration and release profiles

WANG Jinlan1, LI Longwei2, SUN Yinghua2, HE Zhonggui2*

(1.,,110016,; 2.,,110016,)

Objective To prepare meloxicam diethylamine salt patches and to investigate the effect of different Chinese herbal penetration enhancers on transdermal permeability of MXDEAL-patchand release rate. Methods MXDEAL-patches were prepared with DURO-TAK®87-4098 as matrix. Horizontal diffusion cells were adopted as theapparatus for the study ofpermeation using rabbits’skin.Various Chinese herbal penetration enhancers (5% menthol, 5% borneol, 5% eucalyptus oil) and differentpercentages of menthol (1%, 3%, 5%, 7%) were optimized based on penetration parameters of MXDEAL-patchessuch as cumulative permeation amount, penetration rate,permeability coefficient, enhancement ratio and delayed time. with the optimized formulation, MXDEAL-patches were prepared and studied concerning its releasing rate. Results The effect of three Chinese herbal penetration enhancers on the permeability of MXDEAL-patcheswas in the order: menthol＞borneol＞eucalyptus oil. Meanwhile, increase in menthol concentration resulted in the enhanced permeability. However, with the further increased concentration higher than 7%, the permeability was no longer altered. The 24 h cumulative permeation amount of MXDEAL-patches with 5% menthol was 8.031×10-5g·cm-2, the penetration rate was 4.016 8×10-6g·cm-2·h-1, the enhancement ratio was 5.08, and delayed time was 0 h; The 24 h cumulative release of three batches were 38.6%, 39.5%, 38.5%. Conclusion The MXDEAL-patches show good percutaneous permeability and release rate.

pharmaceutics; patch; Chinese herbal penetration enhancers; meloxicam diethylamine salt; permeability; releasing rate

（2017）01–0001–07

10.14146/j.cnki.cjp.2017.01.001

R94

A

2015-05-27

王金兰(1987–), 女(汉族), 山西吕梁人, 硕士研究生, E-mail 732097323@qq.com;

何仲贵(1965–),男(汉族),宁夏银川人,教授,博士,博士生导师,主要从事药剂学和生物药剂学的研究,Tel.024-23986321,E–mail hezhonggui@vip.163.com。