张蓉蓉++艾地云++张腾飞++罗青平++温国元++王红琳++汪宏才++邵华斌

摘要：以C型产气荚膜梭菌中PCR扩增出β1毒素基因，构建了表达质粒pGEXKG-β1，将构建的KG-β1转化受体菌BL21（DE3），得到重组菌株BL21/KG-β1。对重组菌株诱导的表达产物进行了SDS-PAGE分析，结果表明重组菌株可以高效表达毒素蛋白。

关键词：产气荚膜梭菌；β1毒素；克隆表达

中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2016）09-0007-02

产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）在自然界中广泛分布，是人和动物肠道内的一种正常菌，能产生a、β、ε、ι四种主要毒素，根据产生这四种毒素种类的不同，可将产气荚膜梭菌分为A、B、C、D、E五种类型[1]。该菌在家禽中主要是能引起坏死性肠炎，鸡源产气荚膜梭菌主要是A型，但也有C型，C型产气荚膜梭菌主要产生a和β两种毒素。其中β毒素具有细胞毒性和致死性的特点，是重要的致病因子[2]。课题组在前期进行了鸡源产气荚膜梭菌a毒素的克隆表达及免疫原性研究[3]，本研究旨在进一步对β毒素进行克隆表达，为其诊断试剂和亚单位疫苗的研究提供基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株与载体 C型产气荚膜梭菌、受体菌大肠杆菌DH5a和BL21（DE3）和pGEX-KG载体由湖北省农业科学院畜牧兽医研究所保存。

1.1.2 主要试剂 限制性核酸内切酶BamH I和Xho I、PCR试剂盒均购自宝生物工程（大连）有限公司；RNaseA、Taq DNA聚合酶均购自宝生物工程（大连）有限公司；细菌DNA提取试剂盒购自OMEGA公司。

1.2 方法

1.2.1 引物合成 参照NCBI中产气荚膜梭菌β1毒素全基因组序列，设计1对β1毒素基因引物，上游引物CPb01： 5′-ACGGGATCCTTAGTTATAGTTAGTTCACTTT-3′，下游引物CPb02：5′-ACGCTCGAGCTAAATAGCTGTTACTTTATG-3′，目的片段大小为1 008 bp，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。……