藏药甘露酥油丸质量标准研究

2017-02-10次仁旺姆拥宗卓玛

中国民族民间医药 2017年1期

关键词：诃子酥油薄层

次仁旺姆拥宗卓玛

西藏自治区食品药品检验所，西藏拉萨 850000

药物研究

藏药甘露酥油丸质量标准研究

次仁旺姆拥宗卓玛

西藏自治区食品药品检验所，西藏拉萨 850000

目的：建立藏药甘露酥油丸的质量标准。方法：运用薄层色谱法对样品进行鉴别；采用高效液相色谱法测定没食子酸的含量：Waters Xselect C18(250 mm × 4.6 mm，5 μm)柱,流动相：甲醇-0.2%磷酸溶液(3∶97)，检测波长270 nm；柱温25℃；流速为1.0 mL/min，进样量10μL。结果：诃子、毛诃子、余甘子的薄层鉴别色谱图斑点清晰，分离度好，阴性对照无干扰；没食子酸浓度在0.5149～10.298μg范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系(R2=0.9999)，精密度、重复性、稳定性实验的RSD<2%，平均加样回收率为97.14%。结论：本研究制定甘露酥油丸的质量标准，为该品种的质量控制提供了参考依据。

甘露酥油丸；高效液相色谱法；薄层色谱；没食子酸

甘露酥油丸系藏族验方，收载于1995年版《中华人民共和国卫生部药品标准》藏药第一册。甘露酥油丸具有滋补强身、延年益寿等作用，临床用于气血亏虚，精液衰损，心悸失眠，老年虚弱，肢体僵直，经络不利，虚损不足之症[1]。在原标准中只有性状，检测方法有限，因此有必要对甘露酥油丸标准方法进行研究，以建立全面完善的质量标准。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Spectra system液相色谱仪(Waters公司)。Mettler XP205型(精密度为十万分之一)和Mettler XP504(精密度为万分之一)电子天平。

1.2 材料没食子酸对照品(批号：110831-200803，纯度为90.1%，中国生物制品检定研究院)；甘露酥油丸(西藏昌都光宇利民药业有限责任公司)此次样品收集到7批，见表1。 HPLC用色谱纯乙腈和甲醇为Tieda产品，水为纯净水，其它试剂为分析纯。

表1 甘露酥油丸样品来源一览表

2 薄层色谱鉴别

2.1 诃子薄层色谱鉴别[2]取本品5.0g，加无水乙醇30mL，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣用甲醇5mL使溶解，通过中性氧化铝柱(100～200目，5g，内径为1.5cm)用稀乙醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用水5mL溶解后通过C18(300mg)固相萃取小柱，用30%甲醇10mL洗脱，弃去30%甲醇液，再用甲醇10mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。取诃子对照药材，按供试品溶液制备方法制备，即得对照药材溶液。取缺诃子的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备，即得阴性样品溶液。按照中国药典2015版通则0502)[3]试验，分别吸取供试品溶液10μL和对照药材溶液5μL，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以甲苯-冰醋酸-水(12 ∶10 ∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同的蓝色斑点。见图1。

2.2 毛诃子薄层色谱鉴别取本品9.0g，加热水20mL搅拌使溶解，离心，取上清液，加乙醇30mL，充分搅匀，静置2h，滤过，滤液蒸至约10mL，搅匀，通过聚酰胺柱(30～60目，5g，内径为1.5cm，干法)，加水50mL洗脱，收集洗脱液，置水浴浓缩至约20mL，用醋酸乙酯提取2次，每次20mL，合并醋酸乙酯液，加水20mL，摇匀，放置分层，分取上层液蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。另取毛诃子对照药材1.0g，加热水20mL煮沸，保持微沸30min，滤过，滤液置水浴浓缩至约10mL，用醋酸乙酯提取2次，每次15mL，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，即得对照药材溶液。缺毛诃子的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备，即得阴性样品溶液。按照中国药典2015版通则0502[3]试验，吸取上述两种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-二氯甲烷-醋酸酯-甲醇(8∶5∶3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干。在紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同的荧光斑点。见图2。

2.3 余甘子薄层色谱鉴别取本品9.0g，加热水20mL搅拌使溶解，离心，取上清液，加乙醇30mL，充分搅匀，静置2h，滤过，滤液蒸至约10mL，搅匀，通过聚酰胺柱(30～60目，5g，内径为1.5cm,干法)，加水50mL洗脱，收集洗脱液，置水浴浓缩至约20mL，用醋酸乙酯提取2次，每次20mL，合并醋酸乙酯液，加水20mL，摇匀，放置分层，分取上层液蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。另取余甘子对照药材1.0g，加热水20mL煮沸，保持微沸30min，滤过，滤液置水浴浓缩至约10mL，用醋酸乙酯提取2次，每次15mL，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为对照药材溶液。取缺余甘子的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备，即得阴性样品溶液。按照中国药典2015版通则0502[3]试验，吸取上述两种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(9∶9∶3∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至浅黄色斑点出现，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同的荧光斑点。见图3。

3 含量测定

3.1 色谱条件色谱柱：Waters Xselect C18(250mm × 4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-0.2%磷酸溶液(3∶97)；检测波长270nm；柱温25℃；流速为1.0mL/min，进样量10μL。用紫外检测器检测。在此色谱条件下，没食子酸和其它组分均能达到分离。样品中没食子酸保留时间与对照品保留时间一致。见图4。

3.2 供试品溶液的制备取供试品，剪碎，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加50%甲醇溶液25mL，精密称定重量，超声处理30min，冷却至室温，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。

3.3 对照品溶液的制备取没食子酸对照品25.7451mg，用50%甲醇溶解，定容于50mL的容量瓶中，得对照溶液0.5149mg /mL。

3.4 线性范围的考察精密吸取没食子酸对照品溶液(0.5149mg/mL)各1、2、4、8、16、20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，得到相应的峰面积。以没食子酸对照品浓度为X坐标，以相应峰面积为Y坐标进行回归处理，得回归方程Y=3E+06X+44703，没食子酸线性范围为0.5149～10.298μg，R2=0.9999 (n=6)。见图5。