董斌+陈海超 杨伦 耿文学 熊晓妍 孙兴臣+李敏婕+陈闻+蒋家森

摘要：为构建新型H7亚型禽流感HA基因的原核表达载体，并在大肠杆菌中进行表达。从NCBI数据库下载H7亚型禽流感HA全基因序列，合成HA基因；定向克隆到原核表达载体pET-32a（+）的多克隆位点中，构建重组原核表达质粒pET-32a（+）-HA；转化入大肠杆菌BL21（DE3）中经IPTG诱导表达，表达产物经SDS-PAGE和Western-blot法鉴定。结果显示，重组质粒经双酶切及基因测序鉴定构建正确；重组的HA融合蛋白约为84 ku，大小与预期融合蛋白大小一致；重组HA融合蛋白可以与His标签单克隆抗体特异性结合，与H7阳性血清有较强的反应原性。成功构建了HA基因原核表达载体，并在大肠杆菌BL21（DE3）中获得重组HA融合蛋白表达。

关键词：H7N9禽流感病毒；HA基因；pET32a（+）；原核表达；反应原性分析

中图分类号： S852.65文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2016）10-0049-04

收稿日期：2015-09-01

基金项目：江苏省句容市科委项目（编号：NY2013029）；江苏省镇江市农业科技支撑项目（编号：SBK2014022021）；南京农业大学教改项目（编号：2013Y021）；南京农业大学动物医学院教育教学改革研究项目；江苏高校优势学科建设工程资助项目。

作者简介：董斌（1990—），男，黑龙江哈尔滨人，硕士研究生，研究方向为预防兽医学。E-mail：1135220155@qq.com。

通信作者：许家荣，教授，硕士生导师，主要从事学兽医流行病学研究、畜禽传染病防治、生物制品研制。E-mail：xjr@njau.edu.cn。[HJ]

[ZK）]

H7N9型禽流感病毒感染人事件于2013年3月底在华东地区（上海和安徽2地）率先发生，感染以迅速进展的肺炎、呼吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征（ARDS）和致死性转归为特点[1]。目前，已经在鸡、鸽子中检测到H7N9型禽流感病毒，但这些家禽不表现明显的临床症状。……