鲁永兰 杨文秀

(贵州医科大学病理教研室，贵州 贵阳 550004)

PAX5表达对神经内分泌肿瘤临床病理特征和预后的影响研究

鲁永兰 杨文秀△

(贵州医科大学病理教研室，贵州 贵阳 550004)

目的 探讨PAX5表达与神经内分泌肿瘤临床病理特征和预后的关系。方法 收集神经内分泌肿瘤病例的临床资料和石蜡包埋的档案肿瘤组织，用免疫组化染色检测PAX5的表达，随访研究病例，分析PAX5表达与神经内分泌肿瘤临床病理特征和预后的关系。结果 PAX5的总阳性表达率为50%；PAX5表达在不同部位的NEN中有明显差异，以肺NEN的阳性表达率最高(68.2%)；PAX5表达在神经内分泌癌(NEC)与神经内分泌瘤(NET)病例之间、早期(Ⅰ期和Ⅱ期)与晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)病例之间、淋巴结转移与无转移病例之间差异有统计学意义(P<0.05)。在晚期临床分期、NEC病例和伴有淋巴结转移的NEN中PAX5表达明显增多。生存分析：NENs的获访率98.2%(55/56),多因素Cox-Regression分析发现肿瘤分级(P=0.003)、分期(P=0.049)、部位(P=0.000)、淋巴结转移(P=0.014)、PAX5(P=0.015)是神经内分泌肿瘤患者预后的独立影响因素。PAX5阳性与阴性表达的NEN病例的生存状况差异有统计学意义(P<0.05)，阳性表达病例的生存状况较差。结论 PAX5阳性表达对NENs的临床病理特征有一定影响，可能是NEN不良预后的相关因子。

PAX5; 神经内分泌肿瘤； 预后

神经内分泌肿瘤(neuroendocrine neoplasm，NEN)是一类起源于肽能神经元和神经内分泌细胞的异质性肿瘤。NEN最常见的发病部位是消化系统和肺，但是近年来研究[1]表明，其可发生于全身多个器官和组织。PAX5又名B细胞特异性激活蛋白(B cell-specific activator protein, BSAP)，在正常B细胞的增殖、同型转换、免疫球蛋白基因转录[2]、细胞分化过程起到重要调控活化作用，因此既往PAX5主要用于标记大多数B细胞淋巴瘤(如慢性淋巴细胞白血病,套细胞白血病、滤泡淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤等)。而近来有研究[3]表明，PAX5可在神经内分泌肿瘤中表达，尤其用于评估上呼吸道和胰腺神经内分泌肿瘤[4]，但在身体其他部位神经内分泌肿瘤中的研究较少，对于神经内分泌肿瘤患者预后的影响更少见报道。我们收集了一组不同部位的NEN 病例，采用免疫组化检测肿瘤细胞中PAX5的表达，收集其临床资料并随访。分析PAX5表达与神经内分泌肿瘤临床病理特征及生存状况的关系，为发现NEN预后的相关因子提供相关依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集安顺市人民医院2009年1月至2013年7月经病理证实为神经内分泌肿瘤的标本56例,并收集相关的临床和病理资料。NEN 分级[5]：第一级(G1)，核分裂<2/ 10 高倍视野和(或)Ki67 指数≤2%；第二级(G2)，核分裂2～20/10 高倍视野 和(或) Ki67指数3%～20%；第三级(G3)： 核分裂 >20/10高倍视野 和/(或)Ki67指数>20%。G1和G2统称神经内分泌瘤，G3称为神经内分泌癌。

1.2 研究方法 采用Sp法，以高压方法进行抗原修复，切4 μm厚打胶白片，经烘烤、脱蜡、抗原修复、血清封闭后，加入一抗(PAX5稀释度1∶25，Ki67稀释度1∶100，均购自北京中杉金桥生物技术有限公司) 4 ℃孵育过夜，pH7.2、0.01M的PBS清洗，加入二抗37 ℃孵育30 min，PBS清洗，DAB染色，自来水冲洗、脱水透明、封片。以pH7.2、0.01M的PBS代替一抗做空白对照，以组织中的淋巴细胞做PAX5内对照。结果判读：PAX5阳性染色为细胞内具有清晰可见和定位准确的棕黄色颗粒。主要采用电话随访或信访，以病人初次入院确诊为随访开始时间，2015年7月31日为随访结束时间。

1.3 统计方法 本研究中涉及的数据都采用SPSS19.0统计软件处理，计数资料之间的比较采用卡方检验，以P<0.05为差异有统计学意义。部分项目统计采用秩和检验方法。生存分析比较采用了多因素Cox-Regression分析，单因素分析采用Log-rank检验，用Kaplan-meier方法绘制生存曲线。

2 结 果

2.1 临床病理资料 56例NEN病例中男性37例，女性19例；年龄20～86岁，中位年龄52岁。发生部位：胃10例、肠8例、肺22例、宫颈3例、卵巢2例、食道2例、鼻咽3例、皮肤4例、膀胱1例、胰腺1例。

2.2 PAX5表达与神经内分泌肿瘤临床病理特征的关系 56例神经内分泌细胞来源的肿瘤中28例表达PAX5，见图1、图2，阳性表达率为50%(28/56)。PAX5表达与NENs部分临床病理特征的关系见表1。

表1 PAX5与NEN部分临床病理特征的关系

比较参数nPAX5表达阳性阴性χ2P部位胃肠1899肺2215711．680．02其它16412淋巴结转移有3223913．270．00无24519分期Ⅰ和Ⅱ期195146．450．01Ⅲ和Ⅳ期372314分级Ⅰ303Ⅱ11386．090．01Ⅲ422517

不同部位的NENs中PAX5阳性表达有明显差异，肺NEN中PAX5阳性表达率最高，高达68.2%(15/22)；神经内分泌肿瘤细胞中PAX5的表达率在早期(Ⅰ期和Ⅱ期)与晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)病例之间、神经内分泌癌与神经内分泌瘤病例之间、淋巴结转移与未转移病例之间差异有统计学意义(P<0.05)。PAX5在神经内分泌癌中的阳性表达为59.5%(25/42)高于神经内分泌瘤的21.4%(3/14)；在晚期病例中的表达为62.2%(23/37)高于早期病例的26.3%(5/19)；有淋巴结转移的病例中PAX5的表达为71.9%(23/32)高于无转移病例的20.8%(5/24)。

2.3 生存分析 56例NEN中，55例获随访，获访率98.2%,随访时间24～78个月。患者中位生存时间18.0个月。治疗上36例接受了手术治疗，12例手术后进一步化疗和免疫治疗，3例采用非手术治疗，1例治疗方法不详。55例获访病例采用多因素Cox-Regression分析，分析了PAX5表达、肿瘤分级、分期、淋巴结转移、发生部位与肿瘤生存状况的关系，肿瘤分级(P=0.003)、分期(P=0.049)、部位(P=0.000)、淋巴结转移(P=0.014)、PAX5(P=0.015)是神经内分泌肿瘤患者预后的独立影响因素。对数和秩检验结果，PAX5阳性患者生存期中位数为12.8个月，阴性患者生存期中位数为28.0个月，阳性患者生存期比阴性患者明显缩短，差异有统计学意义(P=0.000)。根据PAX5表达情况绘制生存曲线见图3。

图3 PAX5对NEN患者生存时间的Kaplan-meier生存曲线

3 讨 论

作为一种特殊的异质性肿瘤，神经内分泌肿瘤(NEN)发病率较低，但发病范围较广，可发生于全身多个器官和组织,且近年来其发病率呈不断上升趋势[6]，故越来越受到关注。NEN根据肿瘤细胞是否具有内分泌功能，可以分为功能型和非功能型NEN。两者临床表现不尽相同。前者表现为相应激素样物质所产生的症状，后者表现为局部肿块和相应系统的症状。

PAX(the pair box)是一类由9个基因组成的高度保守的、对哺乳动物细胞分化及肿瘤形成具有重要调控作用的一组基因控制家族。在某些特定组织细胞的修复和再生过程中，PAX基因表现出了很关键的作用，因此，PAX基因可以在多种肿瘤细胞中表达。PAX5主要对B细胞特异性结合蛋白进行编码[7]，是一种B细胞发育和分化的重要转移因子。R.Nguyen等[8]检测了53例来自不同部位的小细胞癌PAX5蛋白，发现其阳性率为79.2%。本组病例检测结果为50%，这可能是与本研究中选取部位较多，而各部位病例数偏少有关。对于PAX5表达与NENs临床病理特征和预后的关系，本研究结果提示：在NEC中的PAX5的表达率明显高于NET中，存在淋巴结转移的病例PAX5阳性表达也明显升高，这与F.Panzuto等[9]的研究结果基本一致。本研究主要关注PAX5与神经内分泌肿瘤发病部位和患者存活期的关系。从研究结果中可以看出，不同部位的NENs中PAX5的阳性表达不同。其中肺NEN中PAX5阳性表达率最高，达68.2%。这可能对判断转移性肺NEN有一定参考价值。生存分析发现：PAX5阳性表达病例的生存状况明显较阴性表达病例差，这提示NEN中PAX5表达可能是NEN不良预后的预测相关因子。故PAX5阳性表达对NENs的临床病理特征如分级、分期、淋巴结转移、发生部位等有一定影响，可能是NEN不良预后的相关因子。

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Impacts of PAX5 expression on the clinicopathological features and prognosis in neuroendocrine tumors

LuYonglan,YangWenxiu.

DepartmentofPathology,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,China.

Objective To investigate the correlation between the expression of PAX5 protein and clinicopathological features and prognosis in neuroendocrine tumors. Methods Clinicopathological data and archivistic tumor tissue, which were embedded in paraffin, of neuroendocrine tumors. The expression of PAX5 was detected by immunohistochemistry stain Follow-up and statistical analysis was done. Results It was 50% that positive expression rate for PAX5 in 56 of cases with NENs, and there were statistical significantly differences of PAX5 expression in variant site of the NNEs Lung was the most common site of NENs (68.2%) in all sites. There were statistical significantly differences in PAX5 expression between neuroendocrine carcinoma and neuroendocrine tumors, early-and late-stage, with and without metastasis of lymph node, all P were less than 0.05. PAX5 expression was distinctly increased in the case of neuroendocrine neoplasm with late stage, high grade neuroendocrine neoplasm (neuroendocrine carcinoma), and metastasis of lymph node. Survival analysis: NENs received follow-up rate of 98.2%. Multiple factors Cox-Regression analysis showed that the factors, such as stage (P=0.014), grade (P=0.003), Lymph node metastasis (P=0.014), sites (P=0.000) and PAX5 positive expression (P=0.015), were independent influential factors of NEN's prognosis. Survival has obvious difference between the patients with positive and negative expression of Pax5 (P<0.05), and those with positive expression of PAX5 has a poor survival. Conclusion There was influence of PAX5 positive expression in the clinicopathological features. It may be related to the poor prognosis of NENs.

PAX5； Neuroendocrine neoplasm； Prognosis

R34；R736

A

1000-744X(2016)06-0584-03

2016-03-29)

△通信作者,E-mail:ypq1964@163.com