陆廷茂 张军梅

(1.贵州省人民医院口腔科，贵州 贵阳 550002；2.贵州医科大学附属口腔医院，贵州 贵阳 550004)

·实验研究·

仙灵骨葆对大鼠正畸保持阶段成骨细胞和破骨细胞的影响

陆廷茂1张军梅2△

(1.贵州省人民医院口腔科，贵州 贵阳 550002；2.贵州医科大学附属口腔医院，贵州 贵阳 550004)

目的 观察仙灵骨葆对成年大鼠正畸保持阶段牙槽骨改建的影响。方法 20只3月龄雄性大鼠，随机分为治疗组和对照组各10只。将上颌前牙作为支抗牙近中牵引上颌第一磨牙，持续加力21 d后安装保持装置。治疗组每只以3 mL剂量的仙灵骨葆灌胃4周至处死大鼠取上颌弓标本，对照组仅给予同等剂量双蒸馏水。HE染色病理切片，分别观察计数成骨细胞、破骨细胞。结果 保持结束时，仙灵骨葆组压力侧、张力侧成骨细胞数量均高于对照组压力侧、张力侧成骨细胞数量，P<0.05；压力侧、张力侧破骨细胞数量均低于对照组压力侧、张力侧破骨细胞数量，P<0.05；HE染色示，仙灵骨葆组压力侧及张力侧见大量成骨细胞和少量破骨细胞，对照组压力侧及张力侧见少量成骨细胞和大量破骨细胞。结论 仙灵骨葆可以抑制成年大鼠牙移动保持阶段破骨细胞生成，促进成骨细胞的生成，提示仙灵骨葆可能对成年大鼠正畸保持阶段新骨形成、使过渡性牙槽骨向正常牙槽骨转化具有促进作用。

正畸； 仙灵骨葆； 成骨细胞； 破骨细胞； 大鼠

稳定是正畸治疗的一个重要目标，复发是正畸中棘手的问题。正畸保持阶段牙周组织形成新的结构及达到功能平衡，是一个慢长的过程。而牙槽骨改建未完成是正畸复发的主要原因。若在正畸治疗的保持期应用药物促进牙周组织修复与骨改进，将会有利于矫治后的牙齿的稳定，降低复发的可能。国内外对于这类的报道并不多见，中药在正畸保持阶段的研究尚未见报道。仙林骨葆是由黔岭淫羊藿、丹参、补骨酯、地黄等组成的一种纯中药制剂，具有温肾壮阳，接骨续筋，强身健骨之功效，临床上常被用于治疗骨质疏松症(osteoporosis,OP)，治疗效果得到学术界的广泛认可。本课题通过建立成年大鼠牙移动保持期模型，对保持期大鼠灌服仙灵骨葆悬液，观察其对成年大鼠正畸保持阶段成骨、破骨细胞表达的影响，探索仙灵骨葆对成年大鼠保持期牙周组织改建的影响作用。

1 材料与方法

1.1 动物来源、仪器与试剂 Wistar大鼠(第四军医大实验动物中心提供)、正畸用镍钛螺旋拉簧(北京圣玛特科技有限公司)、0.25mm结扎丝(杭州奥索医疗器械有限公司)、正畸测力计(长沙天美医疗器械有限公司)、广陆电子数显卡尺(桂林广陆数字测控股份有限公司)、MOF-392F型超低温冰箱(日本SANYO)、LONYPAS HB51型光学显微镜(日本索尼)、仙灵骨葆胶囊 (贵州同济堂制药有限公司)。

1.2 动物分组及正畸牙移动模型的建立与维持[1]选择3月龄雄性Wistar大鼠20只，体质量200～220 g。将右侧上颌第一磨牙为实验牙，镍钛拉簧放置在上颌切牙和同侧的第一磨牙之间，初始力值为40 g。用慢速手机在大鼠上颌双侧切牙颈缘处磨出一条深约0.5 mm的固位沟。0.02 mm正畸不锈钢结扎丝将螺旋拉簧结扎在上颌第一磨牙和上颌切牙之间。用测力计使螺旋拉簧产生40 g的拉力，灌药组和对照组在加力21 d后，去除镍钛螺旋拉簧加力装置。建立保持期模型：用0.02 mm不锈钢结扎丝于上颌第一磨牙和切牙之间用钢丝被动结扎，光固化树脂固定切牙处结扎点，不施加任何正畸力，仅维持第一磨牙的位置。将大鼠随机分为对照组、仙灵骨葆组，仙灵骨葆组以灌胃针灌胃250 mg/(kg·d)[2]4周，对照组给予等量双蒸馏水灌胃4周。

1.3 HE染色及组织学观察 在保持期第28天颈椎脱臼处死大鼠，取上颌右侧第一磨牙及其牙槽骨制作HE切片，采用Biomias 2001图像分析系统分析，对破骨细胞、成骨细胞数量计数。

1.4 统计学处理 采用SPSS18.0统计软件对所得数据进行统计处理。平均数±标准差采用t检验，检验水准P<0.05示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 成骨细胞、破骨细胞数比较 仙灵骨葆组压力侧、张力侧成骨细胞数量均明显高于对照组压力侧、张力侧成骨细胞数量，差异有统计学意义(P<0.05)；仙灵骨葆组压力侧、张力侧破骨细胞数量均显著低于对照组压力侧、张力侧破骨细胞数量，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 对照组与仙灵骨葆组成骨细胞、破骨细胞数比较

注：与对照组相比，★P<0.05。

2.2 HE染色结果 HE染色示，仙灵骨葆组压力侧及张力侧见大量成骨细胞和少量破骨细胞，对照组压力侧及张力侧见少量成骨细胞和大量破骨细胞。见图1～4。

3 讨 论

仙灵骨葆是由淫羊藿、丹参、补骨脂等组成的一种纯中药制剂。研究证实仙灵骨葆不仅促进成骨细胞增殖分化，促进新骨生成；还可以明显抑制破骨细胞的分化及骨吸收，减少炎性因子的分泌[3]，减轻由破骨细胞导致的骨量下降和骨组织形态结构的改变[4]；同时，仙灵骨葆具有提高成骨细胞分泌碱性磷酸酶(ALP)的活性，促进成骨细胞成熟和钙化的作用，能很好地恢复骨小梁的形态结构并提升骨密度和生物力学的性能，对OP的治疗效果得到学术界的广泛认可[5]。临床研究[6]发现仙灵骨葆胶囊具有促进骨折患者骨痂生长的功效，仙灵骨葆治疗组患者骨折愈合时间明显短于对照组，且随着时间的延长，治疗组患者骨痂生长情况明显优于对照组，亦有研究[7]结果显示，仙灵骨葆可以缩短骨质疏松大鼠骨折愈合时间。牙移动的生物学原理是基于矫治力打破骨转化平衡，一定程度上认为是骨组织损伤与改建过程，与骨损、骨折修复的重建机理变化是相同的。有研究证实患者服用仙灵骨葆胶囊可使整体骨量、骨矿物质含量增加，成骨细胞和破骨细胞的功能得以恢复且调节正常，骨生成能力提高；并能使骨钙和骨有机质的构成比向正常水平接近，从而更好地调节机体的代谢紊乱，刺激骨痂形成．最终使整体骨量和骨的质量得到恢复，促进骨折愈合[8]。仙灵骨葆的主要成分淫羊藿在口腔领域的研究显示，给予实验大鼠淫羊藿注射液，可明显预防拔牙后的剩余牙槽嵴吸收。体外实验研究淫羊藿能有效抑制破骨细胞在下颌骨片上形成的吸收陷窝的数量和面积，可以抑制颌骨骨吸收[9]。

本实验发现，成年大鼠正畸保持阶段灌服仙灵骨葆组相比较对照组成骨细胞数量明显增多，破骨细胞显著减少。而骨代谢的平衡是靠这两类细胞功能间的动态平衡维持[10]，当成骨细胞数量和活性增加时，牙槽骨的改建为骨的生成为主，而破骨细胞的减少表明骨吸收可能减少。本实验提示仙灵骨葆有可能促进牙移动后保持阶段新骨形成，减少牙槽骨骨量丢失，有可能缩短过渡性新骨恢复到正常骨结构的时间。这对临床上缩短佩戴保持器的时间，维持临床上成人正畸牙移动到新位置的长期稳定，具有重要的理论意义。

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