刘 敏 郝明巨



聚合酶链反应检测麻风分枝杆菌的研究进展

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麻风的早期诊治对减少疾病传播、预防疾病进展和致残起重要作用。本文对PCR技术在检测麻风杆菌中的应用作一综述。

麻风； 麻风分枝杆菌； 聚合酶链反应

麻风杆菌在体外尚不能培养，常用的检测麻风菌的实验室方法是皮肤组织液刮片抗酸染色法(AFB)。AFB染色的方法敏感度很低，需要每克组织中至少含有104个细菌才能在显微镜下观察到[1]。PCR是一种高度敏感和特异的检测样本细菌DNA的方法，在过去30年里，已开发了多种用于麻风杆菌DNA的PCR检测方法，这些方法的应用对麻风的早期诊治和预防有重要意义。

1 PCR技术检测麻风分枝杆菌的实验室方法学研究进展

1.1 方法学进展 1989年，Hartskeerl等通过基因提取、扩增、识别等过程，检测麻风36kDa抗原编码基因，发现具有很高的灵敏度和特异性[2]。1990年，Williams等[3]基于探针杂交技术建立了一套检测感染样本中麻风菌DNA的PCR方法。同年，Plikaytis等运用巢式PCR的方法，采用两步法扩增麻风菌DNA片段，将灵敏度提高到了单个菌体的水平，缩短了检测时间[4]。单管PCR方法的运用避免了二次扩增的污染，简化了操作流程，而且提高了实验的灵敏度。2001年，Cole等[5]首先完成了麻风菌的全基因组测序，之后麻风菌的PCR检测得到了迅猛发展。实时定量PCR技术的应用，明显提高了检测的敏感度和特异性，大大缩短了检测时间，而且能够对细菌DNA进行直接定量，评估病人体内的细菌指数[6，7]。

1.2 检测的DNA目标片段 能够作……