王希越, 高 鹏, 连丽丽, 娄大伟*, 许国旺(. 吉林化工学院, 吉林 吉林 30; . 中国科学院大连化学物理研究所, 辽宁 大连 603; 3. 大连医科大学附属大连市第六人民医院, 辽宁 大连 60)

邹汉法研究员纪念专辑(下)·研究论文

基于气相色谱-质谱联用技术的高通量细胞表型分析方法

王希越1,2, 高 鹏2,3*, 连丽丽1, 娄大伟1*, 许国旺2
(1. 吉林化工学院, 吉林 吉林 132022; 2. 中国科学院大连化学物理研究所, 辽宁 大连 116023; 3. 大连医科大学附属大连市第六人民医院, 辽宁 大连 116021)

研究开发了一种基于96孔板培养和气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术的高通量细胞表型分析方法。该方法分别以48种物质作为唯一能源对大肠杆菌进行培养,利用GC-MS研究野生型和yfcC基因改造大肠杆菌对各物质的分解代谢情况,实现高通量的细胞表型分析。结果显示,野生型和yfcC基因过表达大肠杆菌对14种物质的代谢能力有显著差异,yfcC基因过表达大肠杆菌对甘氨酸和柠檬酸的代谢能力明显强于野生型大肠杆菌,而对其他物质的代谢能力较弱,我们推测可能是由于yfcC基因促进乙醛酸代谢,导致yfcC过表达菌株对甘氨酸的代谢能力较强;野生型和yfcC基因敲除大肠杆菌间分解有显著差异的共16种物质,其中yfcC基因敲除大肠杆菌对丙氨酸、乳糖、肌醇和柠檬酸的代谢能力较强。该方法简单、高效,可以为未知基因功能研究提供更多代谢功能相关的参考数据。

气相色谱-质谱;高通量;表型;基因功能

在过去十几年里,随着基因测序技术的不断发展和……