杜亚丽，张中印，潘建芳，王树杰，杨 爽, 3，赵慧婷，姜玉锁



中华蜜蜂气味结合蛋白基因的克隆及时空表达

杜亚丽1，张中印2，潘建芳1，王树杰1，杨 爽1, 3，赵慧婷4，姜玉锁1

（1山西农业大学动物科技学院，山西太谷 030801；2河南科技学院资源与环境学院，河南新乡 453003；3云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所，云南蒙自 661101；4山西农业大学生命科学学院，山西太谷 030801）

【目的】克隆获得中华蜜蜂（）基因序列，并对其蛋白结构进行预测，分析其在不同组织和发育阶段的时空表达差异，为该基因的功能研究提供参考。【方法】以中华蜜蜂全组织cDNA为模板利用RT-PCR技术扩增和克隆获得cDNA全长序列，并提交至GenBank数据库；利用多种生物信息学软件预测分析其编码蛋白的理化特性和结构特征；采用MEGA5.2软件中的邻位相连法（neighbor-joining，NJ）构建AcerOBP14及其同源膜翅目昆虫OBPs的系统发育树；通过实时荧光定量PCR技术分析在1、5、10、15、20、25和30日龄中华蜜蜂不同组织（触角、头、胸、腹、足和翅）中mRNA的表达情况。【结果】克隆获得了中华蜜蜂气味结合蛋白基因的cDNA序列（GenBank登录号为KT24648）。的开放阅读框（ORF）长度为408 bp，编码135个氨基酸，预测其蛋白分子量为15.08 kD，理论等电点为5.44，有信号肽，无跨膜结构，且第18—127位氨基酸之间存在一个昆虫气味结合蛋白家族PBP-GOBP superfamily保守结构域；存在多个比较明显的疏水区域，可能是脂溶性气味分子的结合位点；含有4个保守的半胱氨酸位点，属于Minus-C OBP亚家族。亚细胞定位分析表明，AcerOBP14属于分泌型蛋白，主要集中在内质网-高尔基体-质膜分泌途径上。AcerOBP14蛋白具有7个螺旋，1—6属于典型OBPs核心螺旋，7位于C端且暴露在蛋白表面。……