张庆松 李传昌 陈忠 李凡 袁慧星 杨为民



·实验研究·

小分子双链RNAs联合应用抑制膀胱癌细胞增殖的实验研究

张庆松 李传昌 陈忠 李凡 袁慧星 杨为民

目的 在膀胱癌细胞系T24和EJ细胞中转染两种不同的人工合成小分子双链RNA(dsRNA)，观察联合应用与分别单独应用两种dsRNA对膀胱癌细胞生长的影响。 方法 根据对膀胱癌细胞的处理不同分为：①阴性对照组(dsControl)、dsP21-322组、dsP21-555组和dsP21-322+ dsP21-555组；②dsControl组、dsP21-322组、dsP53-285组和dsP21-322+dsP53-285组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测各组细胞p21 mRNA及细胞周期依赖性激酶CDK4、CDK6 mRNA的表达；蛋白印迹法(Western blot)检测P21蛋白和CDK4、CDK6蛋白的表达；细胞增殖实验检测转染后细胞增殖能力；集落形成实验检测单个细胞克隆增殖能力。 结果 qPCR结果显示，与dsControl组相比，dsP21-322组、dsP2l-555组和dsP53-285组均分别上调T24和EJ细胞中p21 mRNA的表达(P<0.01)；而与单独转染dsP21-322、dsP2l-555相比，同时转染dsP21-322+dsP21-555，差异无统计学意义(P>0.05)。与dsControl组相比，dsP53-285能够上调p53基因的表达(P<0.05)；与单独转染dsP53-285相比，p53 mRNA表达在同时转染dsP21-322和dsP53-285组中差异无统计学意义(P>0.05)。与单独转染dsP21-322、dsP53-285相比，dsP21-322+dsP53-285能够显著增加p21 mRNA的表达(P<0.05)。与dsControl相比，转染dsP21-322、dsP53-285分别使T24和EJ细胞中CDK4、CDK6 mRNA的表达下调(P<0.05)；与单独转染dsP21-322、dsP53-285相比，CDK4/6 mRNA的表达在dsP21-322+dsP53-285组中明显被抑制(P<0.05)。Western blot检测结果验证了组间p21和CDK4/6基因表达的差异。细胞增殖实验结果显示，同时转染dsP21-322和dsP53-285比单独转染抑制膀胱癌细胞增殖能力更明显。细胞集落形成实验中，dsP21-322+dsP53-285组中形成的集落数量显著少于单独转染组。 结论 同时转染dsP21-322和dsP53-285能够显著抑制膀胱癌细胞的增殖。

膀胱肿瘤； dsRNAs； P21； RNA激活

前期研究发现微小非编码双链RNA(dsRNA)分子dsP21-322、dsP53-285能分别与膀胱肿瘤细胞中的抑癌基因p21和p53基因的启动子靶部位结合，从而激活p21和/或p21上游基因p53的表达[1-2]。Place等[3]研究发现dsRNA分子dsEcad-640和微小RNA(miRNA)分子miR-373分别与E-cadherin启动子的靶序列完全及不完全互补配对，在前列腺癌细胞中都能明显激活E-cadherin基因的表达，而将二者同时转入细胞后并没有使得E-cadherin的表达比单独转染时增高。为了研究两个不同作用点的dsRNA同时转入细胞后是否能够使得目的基因p21的表达更高并且显著抑制膀胱癌细胞的生长，本研究通过实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)初步检测转染处理的膀胱癌……