王 伟， 陈 雪， 钟兆铭， 储红映， 胡泽东， 程 瑞， 孙传政

(昆明医科大学第三附属医院 头颈外科， 云南 昆明 650118)



pSUPER-IL-11-shRNA表达载体的构建与鉴定*

王 伟， 陈 雪， 钟兆铭， 储红映， 胡泽东， 程 瑞， 孙传政**

(昆明医科大学第三附属医院 头颈外科， 云南 昆明 650118)

目的： 构建及测序鉴定重组质粒pSUPER-IL-11-shRNA，检测其对甲状腺未分化癌(anaplastic thyroid carcinoma，ATC)细胞株sw579 IL-11基因的沉默效应。方法:根据Genebank中IL-11 cDNA序列，设计并合成3对两端有酶切位点的特异编码IL-11shRNA序列的寡核苷酸链，退火成互补双链后与pSUPER.retro.puro质粒载体连接，转至大肠杆菌DH-5α菌株，挑取单个抗性克隆，提取质粒进行1%琼脂糖凝胶电泳鉴定及测序分析，脂质体介导重组质粒转染ATC细胞株sw579，real-time PCR及ELISA检测其对靶基因IL-11的表达影响。结果:重组质粒pSUPER-IL-11-shRNA酶切产物凝胶电泳结果显示，3个样本均为阳性重组质粒，测序鉴定3种重组质粒pSUPER -IL-11-shRNA序列正确，转染3种重组质粒后sw579细胞裂解液中IL-11 mRNA和细胞培养上清液中IL-11蛋白显著降低。结论:本研究成功构建重组质粒pSUPER-IL-11-shRNA，为进一步探索IL-11在ATC进展中的作用奠定了基础。

甲状腺肿瘤； 白细胞介素-11； RNA，小分子干扰； 短发夹RNA； 质粒

甲状腺未分化癌(anaplastic thyroid carcinoma，ATC)是人类恶性程度最高的肿瘤之一，占全部甲状腺癌的1%～5%，但致死率却占全部甲状腺癌的14%～50%，临床研究表明虽然甲状腺癌治疗方案不断改进和完善，但其确诊后中位生存期只有3～9个月，1年生存率约20%[1-3]，因此有必要探索新的治疗手段。IL-11属于IL-6家族，参与调控炎症反应和肿瘤形成[4]。最近研究发现IL-11高表达与肝细胞癌、胃腺癌预后呈负相关，并促进乳腺癌、子宫内膜癌、软骨肉瘤等实体肿瘤远处转移[5-7]。……