王建华 ， 赵 丹 ， 张俊哲 ， 董志珍 ， 赵祥平 ， 王玉玲 ， 肖 妍 ， 王乃福 ， 陈小金 ， 陈本龙

(天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 ， 天津保税300456)



一种基于CP204L基因的非洲猪瘟病毒TaqMan-MGB实时荧光PCR检测方法的建立

王建华 ， 赵 丹 ， 张俊哲 ， 董志珍 ， 赵祥平 ， 王玉玲 ， 肖 妍 ， 王乃福 ， 陈小金 ， 陈本龙

(天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 ， 天津保税300456)

基于非洲猪瘟病毒(ASFV)CP204L基因序列设计1对特异性引物和TaqMan-MGB探针，通过优化反应条件建立了一种检测ASFV的TaqMan-MGB实时荧光PCR方法。结果显示，该方法仅对ASFVDNA呈现特异性扩增，不与猪的其他常见病毒发生交叉反应，具有良好的特异性。该方法对标准对照质粒(PCR2.1-CP204L)的线性检测范围为4.2×101～4.2×109copies/μL，标准曲线方程为Y=-3.452 3X+39.014，相关系数(R2)为0.998 8，检测下线为4.2个拷贝。对5个不同浓度(4.2×103～4.2×107copies/μL)的质粒标准品进行4次双份样品的重复检测，Ct值变异系数均小于1.5%，表明该方法具有良好的重现性。用该方法对总计164份的进口猪临床样品和生猪肌肉样品进行ASFV检测，结果均为阴性。该方法的建立为活猪临床样品和生猪肌肉样品中ASFV检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。

非洲猪瘟病毒 ； CP204L序列 ；TaqMan-MGB探针 ； 实时荧光PCR

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus，ASFV)引起猪的一种急性、热性和高度接触性传染病，临床症状以高热、病程短、高死亡率、内脏器官广泛性出血以及呼吸系统和神经系统功能改变为主要特征。自2009 年以来，本病经格鲁吉亚等国传播到与我国接壤的俄罗斯部分地区并多次暴发[1]，目前已对我国养猪业的持续发展构成巨大威胁。……