丰江舟，杨梦梦，朱彬彬，曹文清，郑立春，周兴路，王 潞，吴志浩

(1.皖南医学院第一附属医院 弋矶山医院 肿瘤内科，安徽 芜湖 241001；2.皖南医学院 麻醉学院，安徽 芜湖 241002;3.皖南医学院 法医学院，安徽 芜湖 241002；4.皖南医学院 医学影像与检验学院，安徽 芜湖 241002；5.皖南医学院 医学生物学教研室，安徽 芜湖 241002)



·基础医学·

人PD-L1基因启动子克隆及其荧光素酶报告基因载体的构建

丰江舟1，杨梦梦2，朱彬彬3，曹文清2，郑立春4，周兴路4，王 潞1，吴志浩5

(1.皖南医学院第一附属医院 弋矶山医院 肿瘤内科，安徽 芜湖 241001；2.皖南医学院 麻醉学院，安徽 芜湖 241002;3.皖南医学院 法医学院，安徽 芜湖 241002；4.皖南医学院 医学影像与检验学院，安徽 芜湖 241002；5.皖南医学院 医学生物学教研室，安徽 芜湖 241002)

目的：对人源PD-L1基因启动子进行PCR扩增,构建PD-L1荧光素酶报告基因。 方法：用PCR扩增方法获得PD-L1基因启动子；PD-L1启动子和载体行KpnⅠ、XhoⅠ酶切、连接和转化，然后行菌落PCR以及测序等。构建成功后转染至A549细胞中并检测PD-L1启动子活性。 结果：经PCR方法扩增出PD-L1基因启动子片段,；菌落PCR鉴定各重组体构建正确并经生工测序成功；瞬时转染A549细胞后经报告基因检测得知所克隆的不同片段序列具有启动子活性。 结论：成功克隆PD-L1基因启动子,构建出不同片段基因启动子荧光素酶报告基因，为进一步研究其分子机制提供详实基础。

PD-L1；启动子克隆；双荧光素酶报告基因

【DOI】10.3969/j.issn.1002-0217.2016.06.004

程序性细胞死亡蛋白1(programmed death-1，PD-1)为PDCD1基因编码的Ⅰ型跨膜糖蛋白[1]，PD-1表达于活化的免疫细胞表面，如CD4+T细胞、B细胞等[2]。PD-L1(programmed death-1-ligand 1，程序性死亡配体-1)是程序性细胞死亡蛋白1的配体之一，同属CD28/B7家族。……