张雪寒，张 强，张碧成，汪 伟，倪艳秀，温立斌，李 彬，周俊明，何孔旺，周 萍

(江苏省农业科学院兽医研究所 / 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/ 国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏 南京 210014)



检测产志贺毒素大肠杆菌抗体的间接ELISA试剂盒的研制

张雪寒，张 强，张碧成，汪 伟，倪艳秀，温立斌，李 彬，周俊明，何孔旺，周 萍

(江苏省农业科学院兽医研究所 / 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/ 国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏 南京 210014)

本研究旨在研制一种以紧密素为检测靶标的间接ELISA技术，检测血清中产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxigenicEscherichiacoli,STEC)的抗体水平。根据紧密素27个亚型的N端保守序列，体外表达390～543 aa片段制备包被抗原，通过敏感性、特异性、重复性和稳定性实验，建立检测STEC的抗体的间接 EIISA方法。经优化筛选的间接ELISA最佳反应条件：抗原包被浓度3 ng/孔，待检血清稀释比例1∶200，HRP-兔抗羊IgG、HRP-兔抗牛IgG的工作浓度均为1∶15000，5 %脱脂奶封闭l h，底物作用时间10 min，用于牛、羊疫苗抗体检测或者STEC大肠杆菌感染的监测。

致病性大肠杆菌；紧密素；间接ELISA

产志贺毒素性大肠杆菌(Shiga toxigenicEscherichiacoli,STEC)是一个多样的家族，其中的很多O∶H血清型与人类疾病密切相关。众所周知，STEC O157∶H7曾在全世界范围内引发大范围的感染发病[1]，导致严重的公共卫生事件爆发。中国自1986年[2]首次报告O157∶H7感染的病例以来，已先后有江苏、山东、河南、安徽、北京等十几个省市发现O157∶H7感染的散发病例，潜在着疫情爆发流行的威胁，仅在1999年江苏省徐州局部地区短期内就报告了131例O157感染性腹泻病例，其中仅有16例治愈，115例因并发急性肾衰而死亡[3-4]。……