王光慧++陈书英++肖卫芬++韩秋峪

DOI：10.16658/j.cnki.1672-4062.2016.16.121

[摘要] 目的 探讨肿瘤坏死因子α启动因子基因多态性与妊娠期糖尿病间的关系。方法 选取孕妇150例，包括50例糖耐量异常孕妇、50例糖耐量正常孕妇，50例GDM孕妇；将这三组孕妇分别记为IGT组、NGT组、GDM组；通过采血提取DNA，应用聚合酶链反应----限制性片段长度多态性法，对其进行TNF-α基因启动子-308位点的基因型分布频率分析，从而对其多态性展开研究；结果 在NcoI酶切后，GA型出现，具体由3个片断构成，分别为107bp、87bp、20bp；AA型出现，则表现为1个片断，即107bp。GDM组A等位基因频率（62%）显著高于NGT组（28%），GA+AA型基因频率高于NGT组，差异均有统计学意义（P<0.01）；在GA+AA基因型、A等位基因频率表现方面，IGT组明显高于NGT组，两组数据比较差异有统计学意义（P<0.05）。GDM 组与NGT组的血清TNF-α水平分别为（10.29±2.48）ug/L、（5.21±1.03）ug/L，比较两组数据差异具有统计学意义（P<0.05）。GDM组与NGT组IR分别为（2.74±1.06）、（1.35±0.69），比较两组数据差异具有统计学意义（P<0.01）。结论 GDM的发病后，TNF-α-308G/A基因多态性会发生相应的变化，从机制方面看，A等位基因在孕妇中会导致其体质偏向肥胖，且提升其指数，该次研究发现，在这各情况下会发生胰岛素抵抗现象，并且因其中的糖耐量遭到损害而引发GDM。

[关键词] 肿瘤；妊娠；糖尿病；基因

[中图分类号] R587.1 [文献标识码] A [文章编号] 1672-4062（2016）08（b）-0121-02

妊娠期是妇女的关键时期，从临床经验来看，由于在妊娠前由于糖代谢稳定或正常的情况下，会发生糖耐量异常情况；医学将其命名为妊娠期糖尿病，这种疾病因其中的肿瘤坏死因子-α存在表达异常现象，因此，往往会由此造成孕妇流产、早产等症状，是危害妊娠期妇女健康的重大隐患。因此，需要对其加强研究，从而找到解决对策[2]，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

该次研究所选取徐州医学院附属医院在2015年1月—2016年1月间收治的孕妇150例，其中，年龄从23～32岁，平均年龄（28.5±4.1）岁；孕周（31.2 ±4.60）周，平均年龄（28.2±1.2）岁；包括50例糖耐量异常孕妇、50例糖耐量正常孕妇，50例GDM孕妇；将这三组孕妇分别记为IGT组、NGT组、GDM组；三组患者均可排除感染因素、血液病因素，以及肿瘤或器官性的肾病因素等；对三组患者的基本资料进行统计学分析，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 研究方法

1.2.1 标本采集 三组均禁食12 h，次日晨抽取肘静脉血4 mL，加入0.5 mL乙二胺四乙酸抗凝剂抗凝，放置-80℃冰箱中储存备用。

1.2.2 实验方法 三组采集静脉血4 mL，其中全血2 mL用TKM提取DNA，采用聚合酶链反应----限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）的方法，确定各组TNF-α基因启动子-308位点的基因型分布频率，确定其多态性。另2 mL血采用双抗体夹心酶联吸附试验（ELISA）测定血清TNF-α水平，具体方法按说明书操作。以稳态模型Homa-model公式评估IR。

1.2.3 诊断标准 GDM诊断标准按照2013年的美国糖尿病学会（American Diabetes Association， ADA）指南[3]。

1.3 统计方法

应用SPSS 19.0软件操作系统进行数据统计，计量资料用（x±s）表示，计数资料用χ2检验，计量资料采用t检验，P<0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TNF-α启动子PCR产物酶切后电泳结果

在NcoI酶切后，GA型出现，具体由3个片断构成，分别为107bp、87bp、20bp；AA型出现，则表现为1个片断，即107bp。

2.2 基因多态性的分布情况

150例孕妇子基因型、等位基因频率GDM组A等位基因频率（62%）显著高于NGT组（28%），GA+AA型基因频率（72%）也显著高于NGT组（36%），差异均有统计学意义（P<0.01）；在GA+AA基因型、A等位基因频率表现方面，IGT组明显高于NGT组，两组数据比较差异具有统计学意义（P<0.05）。具体如下表1所示。

2.3 GDM 组与NGT组的血清TNF-α水平

GDM 组与NGT组的血清TNF-α水平分别为（10.29±2.48）ug/L、（5.21±1.03）ug/L，比较两组数据差异具有统计学意义（P<0.05）。（3）GDM组与NGT组IR分别为（2.74±1.06）、（1.35±0.69），两组比较差异有统计学意义（P<0.01）。具体如下表2所示。

3 讨论

3.1 TNF-α与GDM的相关性分析

目前认为GDM发病原因与胰岛素抵抗、氧化应激、炎性反应等有关，更多学者认为GDM发病机制与 2 型糖尿病类似[4]，在GDM发病中，居于中心环节的是胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能方面的障碍问题；以GDM孕妇为例，当其处于高糖刺激情况之下，会出现一定程度的应激反应，从而释放出的TNF-α会在量上出现提升，这种不断增加的TNF-α是造成胰岛素抵抗不断出现剧烈化的原因所在，而且，随着这种抵抗的不断加剧，也会参与到GDM病变之中，从发病之始到整个病程的不断进展，皆会有其影响。在“炎症-胰岛素抵抗-GDM”这一病理生理过程中，脂肪细胞的内分泌调节功能障碍也起了重要作[5]。

TNF-α可作为GDM的预测因子，从廖丹的相关研究来看，已经通过实际临床实例研究印证了TNF-α在GDM中升高现象，也有效的说明了TNF-α可作为GDM的预测因子，因此，应该将其应用于复查相关疾病的一个条件或依据[6]。TNF-α导致IR的机制目前尚未明确，已有的研究认为可能与TNF-α影响胰岛素受体后信号的传导、降低胰岛素敏感细胞水平、促进其他炎性细胞因子分泌增加，进而介导IR有关[7]。

该次研究结果表明，GDM的发病后，TNF-α-308G/A基因多态性会发生相应的变化，从机制方面看，A等位基因在孕妇中会导致其体质偏向肥胖，且提升其指数，该次研究发现，在这各情况下会发生胰岛素抵抗现象，并且因其中的糖耐量遭到损害而引发GDM[8-10]。

3.2 TNF-α启动子-308G/A 基因的多态性与GDM的相关性分析

TNF-α存在多个多态位点，不同的基因型可以产生不同的蛋白，基因多态性影响TNF-α基因产物的表达，进而影响正常孕妇对于糖尿病的易感性及患糖尿病的严重程度[11]。

从临床研究分析，高度的个体差异是TNF-α分泌的显著表现，这有力的体现出基因多态性与其存在关联性；以目前的研究结果为例遗传对IR的作用影响已经成为了IR的候选因素，并且可以明确的得到TNF基因在其中存在影响这一事实；通过对大量研究热点的统计发现，TNF-α基因启动子/增强子上游308处是重点，尤其是在其影响多态性得等位基因方面，很有说服力；另一方面，当定义TNF1的常见基因型为G和定义为TNF2 的少见基因型为A时，这种定义也对其热点研究方面的影响因素进行了有效说明[12]。

另外，老年人的糖尿病与TNF-α启动子-308G/A基因多态性相关，多显现为2型糖尿病[13]。根据常颖等人的研究结果，可以认识到在TNF-α水平、胰岛素抵抗指数方面，GDM组高于对照组，在GA+AA基因型出现频率方面、与A等位基因出现频率方面，也是如此；而且，GA+AA基因型出现频率的对比研究，也证实了A等位基因出现频率高于对照组[14]。

根据该次研究的结果来看，当TNF-α启动子-308G/A基因多态性后，也是造成GDM发生的重要因素，另一方面，当孕妇携带A等位基因时，也表明其发生了糖耐量受损，甚至严重时可能发生糖尿病症状；在最为理想的情况下，即使妊娠期不发病，患2型糖尿病的机会也比携带GG基因型的人高。

综上所述，GDM的发病后，TNF-α-308G/A基因多态性会发生相应的变化，从机制方面看，A等位基因在孕妇中会导致其体质偏向肥胖，且提升其指数，该次研究发现，在这各情况下会发生胰岛素抵抗现象，并且因其中的糖耐量遭到损害而引发GDM。因此，进一步研究GDM孕妇TNF-α过度表达的分子机制，以TNF-α为靶点，通过药物治疗抑制其过度表达能够为该方面的预防机制研究提供新的方向与途径。

[参考文献]

[1] 廖丹.妊娠期糖尿病合并妊高征患者hs-CRP、IL-6、TNF-α 检测的临床意义[J].海南医学院学报， 2013， 19（12）： 1726-1729.

[2] Ulla Kampmann， Lene Ring Madsen， Gitte Oeskov Skajaa：Gestational diabetes： A clinical update[J]. World J Diabetes，2015，6（8）： S1065-1072.

[3] 闫洪超. 妊娠期糖尿病患者血清TNF-a浓度与空腹血糖水平的相关性研究. 中国医师进修杂志，2006（29）：6-7.

[4] 闫洪超. 妊娠期糖尿病患者TNF-a变化的意义. 妇女保健，2006（21）：1475.

[5] 闫洪超. TNF-a在妊娠期糖尿病患者胎盘组织中表达的免疫组化研究临床医学，2006（26）：76.

[6] 常颖，牛秀敏.肿瘤坏死因子a启动子基因多态性与妊娠期糖尿病的相关性研究[J].中华妇产科杂志，2005，10（40）：676-678.

（收稿日期：2016-05-17）