刘 瑶，陈俊海，肖桂龙，孟 灿，曾 蓉，武 波，蒋承建,3*

>(1.亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，广西 南宁 530004；2.广西大学 生命科学与技术学院，广西 南宁 530004；3.国家海洋局 海洋生物活性物质与现代分析技术重点实验室，山东 青岛 266061)



海洋Pseudomonasaeruginosasp. DES-3的鉴定以及基因ap02对其产蛋白酶的影响研究*

刘 瑶1,2，陈俊海1,2，肖桂龙1,2，孟 灿1,2，曾 蓉1,2，武 波1,2，蒋承建1,2,3*

>(1.亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，广西 南宁 530004；2.广西大学 生命科学与技术学院，广西 南宁 530004；3.国家海洋局 海洋生物活性物质与现代分析技术重点实验室，山东 青岛 266061)

海洋是地球上最大的生态系统，其多样独特的生态环境造就了其有别于其他环境的微生物资源。本研究利用蛋白酶的活性筛选策略，从辽宁省营口市某海洋淤泥中分离得到一株产蛋白酶的优势菌株DES-3。通过微生物形态学特征、生理生化性质和16S rDNA基因鉴定以及系统发育进化关系的分析，将该菌株鉴定为铜绿假单胞菌属，命名为Pseudomonasaeruginosasp. DES-3。其胞外蛋白酶的最适反应温度和最适pH分别为55 ℃和9.0。将来自于碱性污染土壤宏基因组文库的编码碱性蛋白酶基因ap02与广宿主表达载体pBBR1MCS-5连接，转化至野生型菌株P.aeruginosasp. DES-3细胞中，成功构建了基因工程菌株P.aeruginosasp. DES-3/pBBR1MCS-5-ap02。基因工程菌株的最适反应温度为60 ℃，较野生型菌株提高了5 ℃。本研究构建基因工程菌株的策略可为菌株的改造和相应工业应用提供一定的技术参考。

海洋微生物；碱性蛋白酶；Pseudomonasaeruginosasp.；基因工程菌株

海洋是地球上最大的生态系统，体积在整个生物圈超过90%，面积占地球表面积的71%，其包含的微生物占全球初级生产者的50%左右[1]。从2……