王明明，孙 赞

(南京医科大学康达学院药学系，江苏 连云港 222000)



气相色谱法测定聚桂醇400中月桂醇含量

王明明，孙 赞

(南京医科大学康达学院药学系，江苏 连云港 222000)

建立气相色谱方法用于测定聚桂醇400原料药中月桂醇的残留量。采用BD-5ht(30 m×0.25 mm，0.1 μm)毛细管色谱柱，程序升温，起始温度120 ℃，维持1 min，以10 ℃/min的速度升至350 ℃，维持10 min，进样口温度300 ℃，分流进样，分流比50:1，FID检测器，检测器温度350 ℃，进样量1 uL。结果显示，月桂醇的回归方程为A=1.2743×103c+1.2867(r=0.9998)，线性范围为0.2039～0.6118 mg·mL-1，月桂醇含量为1.65%。综上所述，该方法简单易行，结果稳定准确，适用于聚桂醇400原料药中月桂醇含量的测定。

聚桂醇400；月桂醇；含量测定；气相色谱

聚桂醇400(Lauromacrogol 400，或Polidocanol)临床上广泛应用于下肢静脉曲张以及毛细血管扩张症的硬化法治疗，最新研究表明，在肿瘤治疗方面与超声技术配合，对食道囊肿、皮肤血管瘤、肝肿瘤以及子宫肌瘤均具有一定的治疗效果[1-3]。聚桂醇400商品名为Asclera，由Chemische Fabrik Kresussler于2010由FDA批准上市，取得了巨大的经济效益。在国内，陕西天宇制药公司于2008年获得产品的仿制药上市批文，但其质量方面的研究少有文献报道，产品质量的控制在国内仍处于研究性阶段。

聚桂醇400为月桂醇和乙二醇的单链多聚物，化学合成路线单一，原料月桂醇和环氧乙烷在催化剂作用下，于密封的反应釜中聚合而成[4-5]。环氧乙烷常温常压下以气态形式存在，或与空气中的水分迅速转化为乙二醇。月桂醇在投料过程中的量远远大于环氧乙烷，因此作为主要的有机残留物。月桂醇具有毒理学刺激性，含量超标会对药物的安全使用产生严重影响，欧洲药典对聚桂醇400原料药中月桂醇的限度设定为2.0%，因此有必要建立稳定有效的检测方法对月桂醇的百分含量进行测定。笔者在参照各国药典以及查阅相关文献的基础上，建立了测定聚桂醇400原料药中月桂醇含量的GC方法，制定了方法学质量标准。

1 仪器与试药

7890A气相色谱仪，安捷伦科技有限公司；GC2010气相色谱仪，岛津公司；XS千分之一分析天平，梅特勒科技有限公司。

聚桂醇400原料药(批号：20160401，含量≥98.00%)，南京工业大学；月桂醇对照品(批号：15061000，含量≥99.90%)，sigma试剂有限公司；冰乙酸(分析纯)上海实意化学试剂有限公司；丙酮(色谱纯)，ROE。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

毛细管色谱柱DB-5ht(30 m×0.25 mm，0.1 μm)，FID检测器，载气N2(纯度99.99%)。进样口温度300 ℃，检测器温度350 ℃，程序升温，初始温度120 ℃，维持1 min，以10 ℃/min升温至350 ℃，维持10 min。分流进样，分流比50:1，检测器温度350 ℃，进样量1 μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品溶液

取月桂醇对照品适量，精密称定，加丙酮溶解并稀释成0.4 mg·mL-1的溶液，摇匀，0.22 μm有机滤膜滤过。

2.2.2 供试品溶液

取聚桂醇400原料药适量，精密称定，加丙酮溶解并稀释成20 mg·mL-1的溶液，摇匀，0.22 μm有机滤膜滤过。

2.3 系统适用性试验

取聚桂醇400原料药，月桂醇对照品与醋酸对照品适量，精密称定，加丙酮溶解稀释制成每1 mL分别含20、0.4、0.1 mg·mL-1的混合溶液，作为系统适用性溶液。在“2.1色谱条件”项下，精密取系统适用性溶液1 μL，进样，记录色谱图。色谱峰结果显示，月桂醇和醋酸的保留时间分别为5.3 min和15.8 min，聚桂醇无准确出峰时间，各峰分离效果良好，分离度大于1.5，月桂醇峰理论塔板数大于20000。色谱图见图1。

图1 系统适用性试验气相色谱图

2.4 线性范围

取月桂醇对照品约2.0 g，精密称定，置于100 mL量瓶中，加丙酮溶解稀释至刻度，摇匀，作为对照品母液。精密量取对照品母液各0.5、0.8、1.0、1.2、1.5 mL，分别置于50 mL量瓶中，加丙酮稀释至刻度，摇匀，作为系列标准曲线溶液。精密取各浓度标准曲线溶液1 μL，进样测定，以峰面积(A)为纵坐标，浓度(c)为横坐标，绘制标准曲线，得线性方程为：A=1.2743×103c+1.2867(r=0.9998)。结果表明，月桂醇溶液线性浓度范围为0.2039～0.6118 mg·mL-1。

2.5 检测限和定量限

取“2.2.1”项下对照品溶液，丙酮逐步稀释5、10、15、20倍……，各精密量取1 μL，进样，记录色谱图。结果表明，月桂醇进样量为20 ng时，S/N=10，进样量为6.5 ng时，S/N=3。实验结果见表1。

表1 定量限和检测限

2.6 精密度

2.6.1 进样精密度

取浓度为0.4 mg·mL-1的月桂醇对照品溶液，连续进样6次，进样量1 μL，结果表明，6次进样峰面积RSD为0.15%，表明进样精密度良好。实验结果见表2。

2.6.2 中间精密度

取浓度为0.4 mg·μL-1的月桂醇对照品溶液，变更日期，变更操作人员，在同一实验室，使用岛津GC-2010气相色谱仪连续进样6次，进样量1 μL，6次进样峰面积RSD为0.27%，表明中间精密度良好。实验结果见表2。

表2 精密度实验结果

2.7 稳定性试验

取浓度为0.4 mg·mL-1的月桂醇对照品溶液放置0、2、4、8、12、24 h后进样测定，进样量1 μL，6次进样峰面积RSD为1.01%，表明溶液在室温条件下24 h内保持稳定。实验结果见表3。

表3 稳定性实验结果

2.8 回收率试验

精密称取月桂醇对照品，按照“2.2.1”项下对照品溶液含量的80%、100%、120%三个水平分别加入不含月桂醇的聚桂醇原料药，每个水平各配制3份样品溶液(共9份)，进样1 μL，记录并计算回收率。平均回收率为99.79%，RSD为1.08%，表明回收率结果良好。回收率试验数据见表4。

表4 回收率试验测定结果

2.9 样品含量测定

取待检测聚桂醇400原料药，批号20160401，精密称定。按照“2.2”项下方法配制对照品溶液和供试品溶液，进样量1 μL，记录峰面积，外标法计算含量。结果表明，聚桂醇原料药中月桂醇含量为1.65%，符合规定。

3 讨 论

3.1 溶剂的选择

聚桂醇和月桂醇为高分子有机物，易溶于有机溶剂，在水中溶解需要溶胀过程[6]，溶解缓慢，溶解后，在振摇条件下，有发泡现象，易于堵塞进样针和毛细管色谱柱，影响测定结果的准确性，有相关文献报道，采用甲醇和水混合作为溶剂，测定溶剂残留[7]。考虑到水在毛细管色谱柱中低温条件下易产生爆沸现象，损伤毛细管色谱柱，程序升温过程易出现鬼峰和基线不平稳现象，而有机溶剂丙酮对聚桂醇和月桂醇均具有良好的溶解性，溶解迅速，无起泡现象，基线平稳，对色谱柱有保护作用，因此，选用丙酮作为溶剂。

3.2 色谱柱的选择

采用实验室所具备的DB-WAX，DB-1，DB-5ht色谱柱分别进行预实验，在其它试验条件不变的情况下，使用DB-5ht色谱柱，色谱基线平稳，样品出峰时间短，理论塔板数高，进样精密度高，并且具有常压下耐350 ℃高温的特性，能够有效的减少柱流失和延长色谱柱使用的寿命。

3.3 进样口温度的选择

月桂醇的沸点为259 ℃，常温常压下为无色或微黄色粘稠液体，聚乙二醇400和聚桂醇沸点300 ℃以上，常温常压下为半固体或液体形态(根据原料中杂质的含量多少而变化)，易于凝结在分流进样口处，污染垫片。进样口温度设定在350 ℃，能够有效的防止进样口处堵塞和减少垫片的更换频率。

3.4 程序升温条件的选择

柱温箱起始温度120 ℃，维持1 min，以10 ℃/min的速率升至350 ℃维持10 min，色谱分析时间34 min，分析时间适中，可应用于大批量产品的检测，同时，高温度条件下的梯度洗脱有助于清除色谱柱中残留的多沸点和高沸点聚合物。

综上所述，本研究应用气相色谱方法，检测聚桂醇中月桂醇的含量，并进行了相关方法学的验证。分析方法简单实用，分析时间短，灵敏度强，准确度高，结果可靠稳定，适用于聚桂醇400中月桂醇含量的测定。

[1] Kurnicki J, Oseka M, Tworus R, et al. Ultrasound-guided foam sclerotherapy of great saphenous vein with 2% polidocanol one-year follow-up results[J]. Wideochir Inne Tech Maloinwazyjne, 2016, 11(2):67-75.

[2] Doganci S, Yildirim V, Erol G, et al. Polidocanol (Lauromacrogol 400) has anti-angiogenic effects in vitro and in vivo[J]. Eur Rev Med Pharmacol Sci, 2016, 20(7):1384-9.

[3] 谭建福,艾婷,赵云,等.介入硬化剂聚桂醇的临床应用及研究进展[J].中国全科医学,2013,16(29): 3509-3511.

[4] 吴舰,郭璇,柴雨柱,等.聚桂醇的精制方法:中国江苏,CN201410159416.8.

[5] 周如国.一种聚桂醇制备工艺[P].中国安徽,CN201310586580.2.

[6] 周建平,唐星.工业药剂学[M].北京:人民卫生出版社,2014:116.

[7] 王发,徐春燕,王嫦鹤,等.顶空气相色谱法测定聚桂醇中环氧乙烷和二氧六环的含量[J].安徽医药,2013,17(1):33-34.

Determination of Content of Dodecanol in Lauromacrogol 400 by Gas Chromatography

WANGMing-ming,SUNZan

(Department of Pharmacy, Kangda College of Nanjing Medical University,Jiangsu Lianyungang 222000, China)

A method of gas chromatography for the determination of residual amount of dodecanol in raw materials of Lauromacrogol 400 was established. The analytical condition was based on BD-5ht (30 m×0.25 mm, 0.1 μm) capillary column with programmed temperature steps, the initial column temperature was 120 ℃, maintained 1 min, then rised to 350 ℃ with the speeds of 10 ℃/min, maintained 10 min. The inlet temperature was 300 ℃ with the split ratio 50:1. The detector was FID with temperature of 350 ℃ and the injection volume was 1 μL. Results showed that the regression equation was A=1.2743×103c+1.2867 (r=0.9998)，the linear range was 0.2039～0.6118 mg·mL-1, the content of dodecanol was 1.65%. In conclusion, the method was simple and easy with accurate and stable results, suitable for determination the content of dodecanol in raw materials of Lauromacrogol 400.

Lauromacrogol 400; dodecanol; content determination; gas chromatography

王明明(1986-)，男，助教，主要从事药物开发和应用。

R917

A

1001-9677(2016)021-0130-03