王珏 张毕奎 戴迎春

HPLC法测定古汉养生精片（口服液）中淫羊藿苷的含量

王珏 张毕奎 戴迎春

目的：建立高效液相色谱法测定古汉养生精片和古汉养生精口服液中淫羊藿苷含量方法。方法：采用Hypersil BDS C18柱（250mm×4.6mm，5μm），以甲醇-1.5%冰醋酸（58:42）为流动相，流速：1.0ml/min，检测波长270nm。结果：淫羊藿苷在0.088～1.760μg范围内与峰面积线性关系良好（r=0.9991），平均回收率为98.0%，RSD为1.09%。结论：所建高效液相色谱法简单,准确，专属性强，重现性好，可用于古汉养生精片（口服液）的质量控制。

高效液相色谱法；古汉养生精片；古汉养生精口服液；淫羊藿苷；含量

现今社会生活节奏的日益加快，随着年龄的增长，身体功能也开始衰退，人们开始选择一些养生药品来延缓这个过程。古汉养生精是依据马王堆西汉古墓出土的古汉《养生方》精髓，由湖南中医研究所开发的养生药，并且是国家保密局、国家科委将其列为国家秘密技术项目及国家保密处方。

古汉养生精片中（口服液）由淫羊藿，人参，黄芪，金樱子肉，枸杞子，菟丝子，白芍，甘草等药物组成。其中淫羊藿中的淫羊藿苷能增加心脑血管血流量、促进造血功能、免疫功能及骨代谢，具有补肾壮阳、抗衰老、抗肿瘤等功效。本研究建立高效液相色谱法测定古汉养生精片和古汉养生精口服液中淫羊藿苷含量的方法。淫羊藿化学式见图1。

图1 淫羊藿苷化学式

1 仪器

高效液相色谱仪（Agilent 1100，美国）、超声仪（HS6150）、分析天平、Maxi Mix型漩涡振荡仪。

2 试剂

古汉养生精片（批号9055），古汉养生精口服液（批号10001），均购买于养天和大药房。淫羊藿对照品（中国药品生物检定所提供，批号110737-2004155），甲醇（色谱纯），冰醋酸（分析纯），蒸馏水（超纯水）。

3 方法与结果

3.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil BDS C18柱（250mm× 4.6mm，5μm），流动相为甲醇-1.5%冰醋酸（58:42），流速1.0ml/min,柱温30℃，检测波长270nm，进样量为20μl。1.5%冰醋酸制备：精密量取7.50ml冰醋酸，加蒸馏水至500ml，搅拌混匀，0.45μm微孔滤膜过滤，即得。

3.2 对照品制备 精密称取淫羊藿苷对照品8.80mg置于100ml量瓶中，加蒸馏水（用0.45μm微孔滤膜滤过）适量，超声30min，放冷，加蒸馏水至刻度，即得质量浓度为88.0μg/ml。

3.3 供试品溶液制备 古汉养生精片溶液配制：取本品10片，研细，精密称量1.60g，置于100ml量瓶中，加入90ml蒸馏水，超声处理30min，放冷，加蒸馏水至刻度，摇匀，过滤，即得片剂供试品溶液。古汉养生精口服液溶液配制：取本品一瓶（10ml），精密吸取本品0.100ml，置于5ml量瓶中，加入蒸馏水4ml，超声处理30min，放冷，加蒸馏水至刻度，摇匀，过滤，即得口服液供试品溶液。

3.4 标准曲线制备 精密吸取对照品溶液0.5ml,1ml, 2ml,3ml,4ml，5ml，10ml置于10ml容量瓶中，分别加入蒸馏水（已过滤）至刻度，摇匀，分别取上述溶液20μl进样，以浓度（C）为横坐标，峰面积为纵坐标（A），进行线性回归。线性回归方程为A=56.928C-85.809 R2= 0.9991。表明淫羊藿苷在进样量在0.088～1.760μg范围内与峰面积线性关系良好。见表1、图2～图3。

表1 标准曲线数据

图2 标准品图

图3 标准曲线图

3.5 精密度试验 精密吸取88.0μg/ml对照品100μl，加蒸馏水300μl，配成22.0μg/ml溶液，振荡，摇匀，重复进样5次，20μl进样。RSD=1.35%，精密度良好。见表2。

表2 精密度实验结果

3.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，在0h,3h，6h, 12h,24h分别进样，记录淫羊藿苷峰面积。见表3。结果RSD=1.29%，室温下供试品24h内较稳定。

表3 稳定性实验结果

3.7 加样回收实验 取已知含量的样品，制备成供试品溶液。精密量取供试品溶液100μl置1.5ml eppen⁃dorf离心管中（共9份并编号），分别加入低（8.8μg/ml）、中（26.4μg/ml）、高（44.0μg/ml）浓度的对照品溶液100μl，各3份，摇匀，20μl进样。见表4。

表4 加样回收实验结果

3.8 样品含量测定 古汉养生精片（批号10001）：取本品10片，研细，精密称量1.60g，置于100ml量瓶中，加入90ml蒸馏水，超声处理30min，放冷，加蒸馏水至刻度，摇匀，过滤。取滤液20μl进样，记录峰面积。将峰面积值带入标准曲线A=56.928C-85.809，计算淫羊藿苷含量为0.53mg/g。见图4。古汉养生精口服液（批号9055）：取本品一瓶（10ml），吸取本品0.100ml，置于5ml量瓶中，加入蒸馏水4ml，超声处理30min，放冷，加入蒸馏水至刻度摇匀，过滤，取滤液20μl，进样记录峰面积。将峰面积值带入标准曲线A=56.928C-85.809，计算淫羊藿苷含量为1.12mg/ml。见图5。

图4 古汉养生精片

图5 古汉养生精口服液

4 讨论

古汉养生精片（口服液）为中药复方制剂，组分复

杂，其中淫羊藿具有益精气、坚筋骨、补腰膝,强心力之功效。淫羊藿总黄酮的主要有效成分为淫羊藿苷,目前淫羊藿药材以淫羊藿苷为指标，本研究通过高相液相色谱法对其进行质量评估。

样品液色谱图中淫羊藿苷峰与其他杂质峰分离度＞1.5，理论塔板数＞1500符合高效液相分析测定要求，按照文献中[1-4]乙腈-水为流动相，分离效果较好但保留时间较长需约16min出峰。按照文献[5,6]等的色谱条件，流动相调整为甲醇-水分离效果不好。把流动相换成甲醇-1.5%冰醋酸（58∶42）各项条件都符合。该方法简单,准确，专属性强，重现性好，可作为古汉养生精片（口服液）中的质量控制方法。

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Determination the Content of Icariin in Guhanyangshengjing pills and oral ilquid by HPLC

Wang Jue1,Zhang Bikui2,Dai Yingc⁃hun3.1.Department of Pharmacy,Hunan Prevention and Treatment Institute of Occupational Diseases Hospital,Changsha,410000，China；2.Department of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South University,Changsha 410000，China；3 Department of Pharmacy, People’s Hospital of Hunan Province,Changsha 410000，China

Objective:To establish a method of determination the content of icariin in Guhanyangshengjing pills（oral ilquid）by HPLC.Methods:Hypersil BDS C18 column（250mm×4.6mm，5μm）was used,menthanol-glacial acetic acid（58:42）were used as mobile phase,the flow rate was 1.0ml/min.The detective wavelength was 270nm.Results:The linearity was good when the icariin range from 4.40—88.0μg／m（r=0.9991）.The average recovery of icariin was 98.0%.RSD was 1.09%.Conclusion:The method is simple,accurate,specific and can be applied to quality control of the Guhanyangshengjing pills（oral ilquid）.

HPLC;Guhanyangshengjing pills;Guhanyangshengjing oral;ilquid icariin;content

410000湖南 长沙，湖南省职业病防治医院药剂科（王珏）；410000湖南 长沙，中南大学湘雅二医院药剂科（张毕奎）；410000湖南 长沙，湖南省人民医院药剂科（戴迎春）

王珏，E-mail:593706899@qq.com

A

1004-2725（2016）11-0812-04